黔东南州规模羊场小反刍兽疫免疫抗体水平调查

杨先富，莫兴虎，杨胜红，杨政益，彭彩丽，吴通奎，袁晓娟

(黔东南州动物疫病预防控制中心，贵州 凯里 556000)

小反刍兽疫(PPR)又称羊瘟、小反刍兽假牛瘟等，是由小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus，PPRV)引起的一种急性病毒性传染病。该病毒主要感染山羊、绵羊等小反刍动物，常呈急性发作,病死率高[1]。一旦发生羊小反刍兽疫疫情，会对养羊生产造成很大威胁。为掌握黔东南州小反刍兽疫疫苗的免疫效果，为全州小反刍兽疫的防控提供重要依据，2020年下半年笔者等在黔东南州16个县(市)的16个规模羊场采集羊血清样品，进行抗体检测，现将检测结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 山羊血清与检测试剂

山羊血清采集于黔东南州16个县(市)的16个规模羊场，共计687份。小反刍兽疫ELISA抗体检测试剂盒(批号：20200509)由深圳市康百得生物科技有限公司生产。

1.2 免疫抗体检测与结果判定

1.2.1 抗体检测

1) 洗涤液配置。用蒸馏水将洗涤液10×(2号液)按1∶10稀释为工作浓度洗涤液。

2) 样品稀释及加样。用样品稀释液(5号液)将待检血清按1∶100稀释，每个样品孔加100μL。

3) 加阴、阳性对照品。阴性对照2孔，每个孔阴性对照品(试剂盒内提供)加入100 μL；阳性对照2孔，每个孔加阳性对照品(试剂盒内提供)100 μL，盖好封板膜，37℃避光反应30 min。

4) 洗板。甩去孔内液体，每孔注满工作浓度洗涤液洗涤3次，1 min/次，最后1次甩净，拍干。

5) 加酶反应。每孔加酶标结合物(1号)100 μL，盖好封板膜，37℃避光反应30 min。甩去孔内液体，每孔注满工作浓度洗涤液洗涤3次，1 min/次，最后1次甩净，拍干。

6) 显色反应。按所需用量，临用前取等体积底物溶液(3号液)和显色液(4号液)充分混匀，每孔加100 μL，盖好封板膜，37℃避光反应15 min；

7) 终止反应。加终止液(6号液)50 μL，用酶标仪于450 nm波长读取OD值。

1.2.2 结果判定 有效性判断标准:阴性对照孔OD值≤0.20(>0.2则试验无效)，阳性对照孔OD值≥0.30(<0.3则试验无效)。抗体阳性利用S/P值判定。

S/P=样品OD值/阳性对照平均OD值

样品S/P≥0.2，判断为小反刍兽疫抗体阳性；样品S/P<0.2，判断为小反刍兽疫抗体阴性。

2 结果与分析

经测定，阴性对照OD450nm平均值为0.06，小于0.20；阳性对照OD450nm平均值为0.91，大于0.30。说明此次抗体检测试验有效。

2.1 羊小反刍兽疫抗体合格率

从表1看出，在黔东南州16个规模羊场687份血清样品中合格494份，免疫合格率为71.91%，达到国家合格标准(70%)，但各场小反刍兽疫免疫抗体合格率差异较大，达到国家合格标准以上的有7号场(73.33%)、2号场(80.00%)、14号场(80.00%)、10号场(91.11%)、8号场(92.00%)、13号场(93.94%)、9号场(98.00%)、16号场(98.00%)，而11号场、12号场、15号场免疫合格率均为100%；抗体合格率较低的有3号场(21.67%)、6号场(22.00%)、1号场(30.00%)、4号场(44.00%)、5号场(65.71%)。

表1 黔东南州羊场羊小反刍兽疫的免疫合格率与S/P值

2.2 S/P值

黔东南州16个规模羊场的S/P值平均为0.50，

其中1号、3号、4号、6号4个规模羊场的S/P<0.2，其余规模羊场的S/P>0.2，且11号、12号、15号3个规模羊场的S/P大于0.8。免疫抗体水平与S/P值呈正比，即免疫抗体水平越高S/P值越高；免疫抗体水平越低S/P值越低，小反刍兽疫疫情风险就越高。

3 小结

小反刍兽疫疫苗免疫1次，一般保护期限为3年[2]。检测结果表明，黔东南州16个规模羊场小反刍兽疫的免疫合格率为71.91%，达国家合格标准(70%)，但各场的免疫抗体合格率差异较大，且3号场、6号场、1号场、4号场、5号场均未达国家合格标准。免疫合格率较高(高于70%)的羊场，都制定了合理的小反刍兽疫免疫程序，经常开展免疫抗体检测，掌握免疫抗体水平变化情况，山羊受到严格的免疫保护；5个未达标的羊场，可能是最后1次小反刍兽疫疫苗免疫时间接近或超过了3年，建议经常开展免疫抗体检测，根据抗体水平变化制定适合本场的免疫程序，使小反刍兽疫抗体合格率达到国家合格标准，避免或减少发生小反刍兽疫的风险。