NSE、TTF-1及Ki-67与小细胞肺癌患者预后、化疗反应的关系

王仪胜 张章 秦岭 孙玲玲

小细胞肺癌属于恶性程度极高的神经内分泌肿瘤，其在所有肺癌中的发生率为15%，肿瘤增长速度快，且易发生远处转移，严重危害患者生命健康［1］。提高肺癌的早期诊断率是改善患者预后，延长生存期的关键。研究显示，有60%～80%的小细胞肺癌患者血清神经元特异性烯醇化（Neuron specific enolization，NSE）存在高表达［2］。甲状腺转录因子-1（thyroid transcriptionfactor-1，TTF-1）是肺及甲状腺来源肿瘤的重要标记物，近年来被广大临床医师所认可［3］。Ki-67 是一种核蛋白，有学者报道Ki-67 是判断肿瘤良恶程度及侵袭力的重要标志之一［4］，但其与TTF-1、NSE 之间的关系研究国内报道较少。本研究旨在探讨TTF-1、NSE 及Ki-67 在小细胞肺癌中的表达情况，并探讨其潜在预后价值，现研究报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

对2017年8月至2020年8月本院收治的110例小细胞癌患者的临床资料进行整理、分析。纳入标准：①均经组织病理学和免疫组化确诊为小细胞癌［5］；②至少连续接受过2 周期以上的含铂两药方案一线化疗，方案包括依托泊苷联合顺铂/卡铂、伊立替康联合卡铂/顺铂。排除标准：①合并其他恶性肿瘤及重要器官严重疾病者；②因精神障碍无法配合治疗者。

最终纳入90 例患者，共90 份小细胞癌标本。其中男48 例，女42 例；平均年龄（60.51±3.57）岁；根据美国退伍军人管理局肺癌研究组（Veterans Administration Lung Cancer Study Group，VALG）分期标准［6］，可分为广泛期53 例，局限期期37 例。

1.2 方法

1.2.1 NSE 检测方法

纳入研究的对象均在入院后第二天清晨空腹抽取静脉血3 mL，3 500 r/min 离心10 min，分离血清及血浆，样本置于-20℃下保存待检。采用酶联免疫吸附法检测NSE 水平。相关试剂盒采购于北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.2.2 TTF-1 及Ki-67 检测方法

采用S-P 免疫组化染色，将小细胞肺癌标本经常规石蜡切片、脱水，在显微镜下观察TTF-1、Ki-67。检测过程严格按照说明进行，检测完成后由2 名以上高级职称病理科医师阅片。TTF-1 鼠抗人单克隆抗体、Ki-67 鼠抗人单克隆抗体均购自杭州百通生物技术有限公司。

1.3 结果判定

NSE 正常范围值：≤12.5 μg/L，＞12.5 μg/L 视为异常增高［7］。

TTF-1、Ki-67 阳性判断标准［8］：肿瘤细胞胞质或细胞核中出现棕黄色或棕褐色颗粒。染色强度评分：0 分（无色）、1 分（淡黄色）、2 分（棕黄色）、3 分（棕褐色）；阳性细胞所占百分比小于26%为1 分，阳性细胞所占百分比26%～50%为2 分，阳性细胞所占百分比51%～75%为3 分，阳性细胞壁大于75%为4 分。根据两者相乘结果进行评判：小于3 分（-）、3 分（+）、4 分（++）、5 分（+++）。阳性率=阳性例数/总例数×100%。

1.4 观察指标

主要观察指标为一线化疗客观反应率（objective response rate，ORR）、疾病控制率（disease controlrate，DCR）、无进展生存期（progression free survival，PFS）、总生存期（overall survival，OS）。根据实体瘤疗效评价标准（Response Evaluation Criteria in Solid Tumor，RECIST）1.1 版［9］评价疗效，分为完全缓解（complete response，CR）、部分缓解（partial response，PR）、稳定（stable disease，SD）、进展（progressive disease，PD）。OS 指从确诊至患者死亡或者末次随访时间。PFS 指一线治疗开始至疾病进展或者患者死亡的时间。ORR=（CR+PR）病例数/总病例数。DCR=（CR+PR+SD）病例数/总病例数。

1.5 随访

以病例查询、电话或门诊复查的方式对患者进行随访（截止时间2020年8月）。

1.6 统计学方法

采用SPSS 22.0 软件进行统计分析。计数资料以n（%）表示，采用χ2检验；计量资料采用（±s）描述，行t检验。采用Pearson 直线相关分析NSE、TTF-1、Ki-67 之间的相关性；采用多元Logistic 回归分析影响小细胞肺癌患者2年预后生存的相关危险因素。以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 NSE、TTF-1、Ki-67 在小细胞肺癌组织中的表达

小细胞肺癌组织中NSE 异常增高率为75.56%（68/90）、正常表达率为24.44%，TTF-1 阳性率为76.67%（69/90）、阴性率为23.33%为（21/90），Ki-67阳性率为78.89%（71/90）、阴性率为21.11%（19/90）。见图1。

图1 免疫组化染色图（SP，×500）Figure 1 immunohistochemical staining（SP，× 500）

2.2 随访结果

对90 例小细胞肺癌随访2年，平均随访时间（1.25±0.25）年，回访率100%。随访结果显示：90例小细胞肺癌患者2年生存率为24.44%（22/90），NSE（高表达）与TTF-1（阳性）、Ki-67（阳性）的小细胞肺癌患者死亡率更高（P＜0.05）。见表1。

表1 小细胞肺癌患者不同NSE 与TTF-1、Ki-67 表达的预后情况［n（%）］Table Prognosis of different NSE，TTF-1 and Ki-67 expression in patients with small cell lung cancer［n（%）］

2.3 影响小细胞肺癌患者预后的单多因素分析

临床分期（广泛期）、有淋巴结转移、NSE（异常增高）、TTF-1 表达（阳性）及Ki-67 表达（阳性）为影响小细胞肺癌患者预后生存的独立危险因素（P＜0.05）。见表2。

2.4 不同NSE、TTF-1 及Ki-67 表达状态与化疗反应的关系

NSE 正常表达一线化疗DCR、ORR 均低于NSE 异常增高患者，差异有统计学意义（P＜0.05），TTF-1 阳性及Ki-67 阳性患者一线化疗DCR、ORR均高于TTF-1 及Ki-67 阴性表达的患者，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

2.5 远期疗效

NSE（异常增高）、TTF-1（阳性表达）及Ki-67（阳性表达）的患者PFS、OS 均显著短于NSE（正常表达）、TTF-1（阴性表达）、Ki-67（阴性表达）者，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表4。

3 讨论

铂类联合第三代化疗药物的化疗方案治疗小细胞肺癌已取得较好的治疗疗效，在一定程度上延长患者的生存期，但肺癌患者的5年生存率仍然仅有15%［10］。随着广大学者对生物分子学的不断深入研究，发现可通过寻找特异性肿瘤标志物，了解小细胞肺癌的生物学行为，并有效评估患者预后［11］。

表2 影响小细胞肺癌患者预后的单多因素分析Table 2 Univariate analysis of prognostic factors in patients with small cell lung cancer

表3 不同NSE、TTF-1 及Ki-67 表达状态与化疗反应的关系［n（%）］Table 3 the relationship between the expression of NSE，TTF-1 and Ki-67 and chemotherapy response［n（%）］

表4 两组患者远期疗效比较情况（±s）Table 4 Comparison of long-term efficacy between 2 groups（±s）

表4 两组患者远期疗效比较情况（±s）Table 4 Comparison of long-term efficacy between 2 groups（±s）

不同指标NSE组别异常增高正常表达68 22 t 值P 值TTF-1阳性阴性69 21 t 值P 值Ki-67阳性阴性71 19 t 值P 值PFS（月）7.24±2.77 10.05±3.20 3.980＜0.001 7.54±3.15 10.55±4.53 3.439＜0.001 8.65±3.68 10.69±4.21 2.082 0.040 OS（月）11.50±5.28 14.41±6.65 2.105 0.038 11.88±5.69 14.93±7.14 2.025 0.046 12.38±5.24 15.43±7.34 2.060 0.042

NSE 在神经元以及内分泌组织中分布，是脱羧基化细胞系列的肿瘤标志物，对恶性肿瘤、脑损伤等疾病敏感性高。较多文献报道小细胞肺癌是一种恶性程度高，且能分泌NSE 的神经内分泌性质肿瘤，NSE 在肺癌组织中的表达量较高，约为正常组织的3～35 倍［12］。本研究进一步证实上述结论，可见NSE 对小细胞肺癌的检测敏感度、特异度高。TTF-1 分子量为38 LD，是由371 个氨基酸组成的核转录蛋白。既往学者研究报道，TTF-1 与许多肺部疾病之间有着密切联系，且发现TTF-1 在肺组织及甲状腺组织癌变过程中呈高表达状态，影响多种基因调控，因此认为TTF-1 可能是肺癌、甲状腺癌等恶性肿瘤的一个驱动核心［13］。本研究中，TTF-1 与在小细胞肺癌组织的阳性表达率在70%以上，与既往文献报道结果一致［14］。Ki-67 属于非组蛋白，位于细胞核内，对蛋白酶高度敏感，标记增殖性细胞核，可敏感地反映恶性肿瘤的增殖率及侵袭力，较多学者认为Ki-67 对肿瘤的诊断、预后评估有重要指导意义［15］。研究结果显示，Ki-67 为影响小细胞肺癌患者预后死亡的独立危险因素。提示可在根治术后或放疗后，检测Ki-67在小细胞肺癌患者中的表达情况来判断疗效，评估患者预后，以指导治疗。

化疗会引起严重的副作用，降低患者的生活质量，确定预测化疗反应的标志物对减轻患者化疗副作用、保障生活质量意义重大。本研究结果提示NSE1、TTF-及Ki-67 可作为预测化疗反应的标志物，这与国外学者报道结果一致［16］。本研究结果说明NSE、TTF-1 及Ki-67 表达水平与小细胞肺癌患者预后密切相关。Duschek S 等［17］学者研究报道，不同TTF-1 表达的患者PFS 及OS 比较差异无统计学意义。这与本研究结果存在差异，可能为免疫组化染色中使用的阳性标准有所不同所致。同时本研究纳入样本量较小，可能导致研究结果出现一定偏倚，后续将扩大样本量进行深入研究。

综上所述，TTF-1、NSE 及Ki-67 对小细胞肺癌的发生、发展起重要作用，可通过联合检查三者的表达情况，选择有效的个体化治疗方案，以延长小细胞肺癌患者的生存期。