复方中药发酵液对肉鸡生长性能、肠道结构及免疫功能的影响

2021-04-21顾艳丽刘秋晨李志兴

中国畜牧杂志 2021年4期

顾艳丽，刘秋晨，林洋，刘恩，李娟，李志兴，刘艳,*

（1.大连三仪动物药品有限公司，辽宁大连 116036；2.江苏三仪科研质量控制中心，江苏邳州 221300）

在饲料中添加低于治疗剂量的抗生素可以促进动物生长，提高饲料转换效率，降低畜禽发病率和死亡率[1-2]，但长期添加抗生素所引起的耐药菌株的抗药性、动物源食品药物残留、对环境污染等已经成为全球关注的问题[3]，禁止将饲用抗生素用于动物生产已成为必然趋势。我国农业农村部第194 号公告规定，自2020 年1 月1 日起退出除中药外的所有促生长类药物饲料添加剂品种。

发酵中药集合中药、酶制剂、益生菌、发酵后产生新的有效物质等众多优点，具有吸收快、药效强、无毒副作用等特点[4-5]，成为一种极具潜力饲料添加剂，成为减抗替抗的重点研发内容。研究已经证实，本试验选用的复方中药发酵液可以替代抗生素治疗由大肠杆菌O78 引起的禽大肠杆菌病[6-7]。本试验旨在研究饮水中添加复方中药发酵液对爱拔益加白羽肉鸡的生长性能、肠道结构和免疫功能的影响，为开发高品质饲料添加剂提供技术支持。

1 材料与方法

1.1 试验材料爱拔益加（AA）白羽肉鸡购自大连普湾新区炮台齐泰隆种鸡养殖场；98%恩拉霉素购自南昌某药业有限公司。复方中药发酵液由穿心莲、白头翁、黄连、黄柏、木香、败酱草和甘草按比例混合，于55℃干燥，含水量7%～13%，粉碎，按照1:15 的体积比加入75%乙醇水溶液进行提取，提取2 次，每次1 h，将中药原料提取产物于4℃静置24 h 后浓缩成含有1 g/mL 生药量的药液，得到复方中药提取液。将枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、植物乳杆菌和产朊假丝酵母的活菌数量比按2:1:1.5:2 混合，得到种子液，在含有10%复方中药提取物的培养基中接种种子液进行发酵，37℃下培养3 d，使发酵液中有效活菌数达到1.0×108CFU/mL，即为复方中药发酵液[8]。4℃冰箱保存备用。

1.2 试验设计及饲养管理选取1 日龄健康、体重相近的AA 肉雏鸡270 只，随机分成3 组，每组3 个重复，每个重复30 只。对照组饲喂基础饲粮，抗生素组4 日龄开始饲喂基础饲粮+5 mg/kg 恩拉霉素，中药复方发酵液组饲喂基础日粮并从4 日龄开始在半天的饮水中按肉鸡体重添加1mL/kg 中药复方发酵液。试验期42 d，自由饮水。参照NRC（1994），并结合《肉鸡饲养标准》（NY/T 33-2004）制定肉鸡基础饲粮[9]。基础饲粮组成及营养成分见表1。试验鸡只采用复层式笼养，饲养管理和常规免疫均按《AA 肉仔鸡饲养管理手册》进行，每日观察并记录鸡只健康状况。

表1 肉鸡基础饲粮组成及营养成分（饲喂基础）

1.3 测定指标与方法

1.3.1 生长性能按照试验设计对各组1 日龄肉鸡称重，作为试验初始体重。记录每天喂料量和剩余量，分别在肉鸡14、28、42 日龄禁饲12 h 后，进行空腹称重作为试验末期体重。计算各重复的平均日增重（ADG）、日均采食量（ADFI）和耗料增重比（F/G）[10]。

1.3.2 肠道结构分别于试验期第14、28、42 天时，每重复选取3 只接近平均体重的肉鸡，颈静脉放血处死，取空肠中段肠组织1 cm 左右，用生理盐水冲洗干净，固定于10%的福尔马林溶液，经苏木精-伊红HE 染色，再用中性树胶加盖玻片封片，在光学显微镜下观察，每个样品选择3 个容貌完整/走向平直的视野单元，每个试验组取3 个样品共9 个视野单元，对绒毛高度和隐窝深度进行测定，计算绒隐比（VH/CD）[11]。

1.3.3 免疫器官指数分别于试验期第28 和42 天时，每重复选取6 只接近平均体重的肉鸡进行采样，采样前禁饲12 h，不禁水，分别采集胸腺、脾脏和法氏囊，剔除干净表面结缔组织和脂肪，精确称量鲜重，计算免疫器官指数。

1.3.4 血清免疫球蛋白分别于试验期第28 和42 天时，每重复选取6 只接近平均体重的肉鸡进行翅静脉采血，收集的全血37℃静置30 min 后，3 000 r/min 离心10 min，收集血清。采用ELISA 试剂盒测定血清中IgG、IgM、IgA 含量[12]。试剂盒购自江苏科晶生物科技有限公司。

1.4 统计分析数据采用Excel 2010 进行整理，采用SPSS 20.0 软件进行方差分析，结果以平均值±标准差表示。P＞0.05 表示差异不显著，P＜0.05 表示差异显著。

2 结果

2.1 复方中药发酵液对肉鸡生长性能的影响由表2 可知，与对照组相比，1～14 d，饮水中添加复方中药发酵液能够显著提高雏鸡的体重、ADG 和ADFI，降低F/G（P＜0.05）；15～28 d，饮水中添加复方中药发酵液对体重和ADG 无显著影响，可降低ADFI 和F/G（P＜0.05）；29～42 d，饮水中添加复方中药发酵液对肉鸡体重、ADG、ADFI 和F/G 影响显著，体重增加11.41%。与抗生素组相比，15～42 d，饮水中添加复方中药发酵液降低了F/G（P＜0.05），体重增加7.96%。

2.2 复方中药发酵液对肉鸡肠道结构的影响由表3可知，与对照组比，饮水中添加复方中药发酵液在1～14 d 能够提高空肠绒毛高度和VH/CD、降低隐窝深度（P＜0.05），在15～28 d 能够提高空肠VH/CD、降低隐窝深度（P＜0.05），在29～42 d 能够提高空肠绒毛高度和VH/CD（P＜0.05），有降低隐窝深度的趋势（P＞0.05）。与抗生素组相比，饮水中添加复方中药发酵液在1～14 d 内绒毛高度和隐窝深度差异显著、VH/CD 差异不显著，在15～42 d 绒毛高度、隐窝深度和VH/CD 差异均显著。试验组各组空肠绒毛完整性良好，绒毛排列整齐。

表2 复方中药发酵液对肉鸡生长性能的影响

表3 复方中药发酵液对肉鸡肠道形态的影响

2.3 复方中药发酵液对肉鸡免疫器官的影响由表4 可知，28 日龄时，与对照组和抗生素组相比，复方中药发酵液组的胸腺指数分别提高了13.94%、22.80%（P＜0.05），法氏囊指数分别显提高了21.70%、32.99%（P＜0.05），脾脏指数差异不显著。42 日龄时，与对照组和抗生素组相比，复方中药发酵液组的胸腺指数分别提高了22.04%、43.75%（P＜0.05），法氏囊指数分别提高了21.88%、37.32%（P＜0.05）。脾脏指数全程差异不显著。

表4 复方中药发酵液对肉鸡免疫器官指数的影响 mg/g

2.4 复方中药发酵液对肉鸡免疫球蛋白的影响由表5 可知，28 日龄时，饮水中添加复方中药发酵液组的IgG、IgM 和IgA 高于对照组和抗生素组（P＜0.05）；42 日龄时，复方中药发酵液组的IgM 和IgA 高于对照组和抗生素组（P＜0.05），IgG 有提高趋势（P＞0.05）。

表5 复方中药发酵液对肉鸡血清免疫球蛋白含量的影响 μg/mL

3 讨论

3.1 复方中药发酵液对肉鸡生长性能的影响发酵中药能够增强肉鸡的免疫力，提高肠道消化吸收功能，同时能够补充肠道有益微生物，维持肉鸡生产全过程处于健康状态，降低F/G，提高肉鸡整体生产性能[13]。本试验以中兽医的基础理论为依据，选择具有清热解毒、燥湿止痢、行气导滞作用的穿心莲、黄连、白头翁、木香等复方中药[6]，选用多株产蛋白酶和淀粉酶强的芽孢菌、产酸能力强并有一定抑菌作用的乳酸菌、产纤维素酶高的酵母菌等微生物作为目标菌，制成复方中药发酵液。该复方中药发酵液不仅能够拮抗动物机体病原菌，增强机体免疫力和抗病能力[7]，而且能够提高饲料利用率。中草药中的多糖类活性物质有助于提高畜禽的生长性能[14]；黄连素凭借抑菌、抑炎、抗氧化等多方面的生物学功能，在维持动物机体健康，尤其提高禽类生产性能方面有显著效果[15]；乳酸菌作能够竞争性的定植于家禽消化道，分泌多种消化酶，促进营养物质吸收和饲料转化率[16]。Gu 等[17]研究表明，使用益生菌发酵中药不仅能够治疗由大肠杆菌引起的腹泻，还可以不同程度地促进生长。本试验结果表明，与对照组相比，复方中药发酵液对肉鸡中期的ADG 影响不显著，但在出栏时（42 日龄）增重11.39%，F/G 降低7.85 %，可显著提高鸡的ADG、ADFI。各菌种在发酵过程中产生的纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶等[18]物质对中草药的细胞进行破壁，使有效物质迅速释放出来；木香行气健脾，败酱草多糖和甘草多糖提高ADG，促进生长；枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌和植物乳杆菌促生长，改善肠道菌群环境[19]，提高饲料转化率。

3.2 复方中药发酵液对肉鸡肠道结构的影响肠道结构包括绒毛高度、隐窝深度和VH/CD，是机体对营养物质消化吸收的关键，常常被用做反映肠道健康的重要指标[20]。小肠绒毛作为肉鸡消化和吸收营养物质的特有部位，绒毛高度增高，食糜吸收面积就会增大，吸收养分的能力就越强。肠道隐窝是绒毛基部的上皮细胞下陷至固有层内形成的管状结构，隐窝深度反映细胞生成率，隐窝变浅，成熟细胞数量增加，分泌功能也随之增强，肠道发育越好[21]。VH/CD 综合反映小肠绒毛吸收功能，比值越高，说明绒毛对营养物质的吸收能力增强。夏亿等[22]研究表明，凝结芽孢杆菌能改善感染肉鸡28 d十二指肠和空肠肠道形态的发育。凝结芽孢杆菌有产生孢子的能力，在复杂的胃肠道环境中可顺利到达肠道，通过产生抑菌物质、酶和营养物质调节肠道微生态环境，增强肠道消化和吸收功能，缓解损伤保护肠黏膜的完整性，促进肠绒毛的发育。张志鹏等[23]发现在基础饲粮中添加中草药提取物可以显著增加肉鸡的小肠绒毛高度和隐窝深度。陈家祥等[24]在基础饲粮中添加地衣芽孢杆菌饲喂麻羽肉鸡，结果表明地衣芽孢杆菌有保护肠黏膜和促进绒毛生长的作用，且随着添加量的增加效果有提高的趋势。本试验结果表明，在试验组饮水中添加复方中药发酵液可明显促进小肠黏膜绒毛的生长发育，改善消化道黏膜结构与形态，进而增加肉鸡对营养物质的消化吸收能力。一方面可能是组方中穿心莲能促进肉鸡肠绒毛生长，降低隐窝深度，使肠壁变薄，让营养物质更容易被吸收[25]。另一方面酵母发酵物中的核苷酸能促进肠道上皮细胞增殖发育，促进肠道形态改变[26]；中草药经过微生物发酵后可能直接或间接刺激肉鸡的肠道菌群，与肉鸡肠道黏膜上皮细胞结合，在肠道内形成一层防护膜，进而发挥改善肠道组织形态的作用[27]。

3.3 复方中药发酵液对肉鸡免疫功能的影响机体免疫器官指数在一定程度上反映机体的免疫功能状态和免疫机能的高低以及抗感染能力，是衡量机体免疫功能的初步指标，免疫器官的发育状况直接反映出机体的免疫应答水平[28]。胸腺、脾脏和法氏囊分别是家禽中枢免疫、外周免疫和体液免疫的主要器官，对机体的细胞免疫和体液免疫均发挥重要功能[29]。免疫器官细胞生长发育及分化会使免疫器官指数增加，而免疫抑制会使免疫器官指数降低。郭宏伟等[30]研究表明，在肉鸡日常饮水中添加发酵扶正解毒口服液可显著提高其肝脏指数、脾脏指数和法氏囊指数。张桂枝等[31]研究表明，饲料中添加一定剂量的复方中药混菌发酵剂可显著提高肉鸡胸腺、腔上囊和脾脏指数，促进肉鸡淋巴器官的生长发育和迅速成熟。徐亚慧等[32]研究发现在饮水中添加4 mL/L 马齿苋发酵液可以提高雏鸡免疫器官指数，氟苯尼考抗生素明显抑制了免疫器官的发育。邓文琼[25]研究表明，饲粮中添加穿心莲超微粉能够提高三黄鸡的脾脏指数、胸腺指数和法氏囊指数，且所有指标与抗生素相当或高于抗生素。Li 等[33]研究表明，玉屏风散可以通过调节非特异性和细胞免疫来发挥免疫调节作用并增强免疫力。本试验在饮水中添加复方中药发酵液组的免疫器官指数均显著高于对照组和抗生素组，说明中药复方经过复合菌剂发酵后显著增加了肉鸡胸腺指数、法氏囊指数，但对脾脏指数影响不显著；同时与对照组相比，抗生素组抑制了胸腺和法氏囊的发育。随着抗生素对鸡只的影响，日龄越大发酵中药对免疫器官指数的影响越显著，复方中药发酵液组和抗生素组相比，28 日龄时胸腺指数增加22.8%，43 日龄时胸腺指数增加43.75%，说明该复方中药发酵液促进了胸腺发育，有利于提高机体的细胞免疫机能。一方面可能是由于组方中的黄连素等活性成分不仅可以抑制病原微生物的生长，在调节人体免疫系统中也发挥重要作用[34]，调节血清IgG，并参与肉鸡体液免疫[35]；另一方面中药经过微生物的转化，大分子活性物质转变成易吸收的小分子物质，更有助于营养物质的吸收。可见，该复方中药发酵液可提高抗病和免疫能力。