猪瘟活疫苗、猪圆环病毒2型基因工程疫苗和猪肺炎支原体灭活疫苗三种疫苗联合免疫效果的评估

张 召，马红伟，魏 烨，李均平，阮坤祥，王世旗

(1.浠水长流牧业有限公司，湖北 浠水 438200； 2.洛阳普莱柯生物工程股份有限公司，河南 洛阳 471000)

猪支原体肺炎是猪肺炎支原体引起的接触性传染病，猪肺炎支原体聚集并粘连在支气管、细支气管以及气管上皮细胞上，损伤猪的呼吸道，最终引起猪支原体肺炎[1，2]。临床主要表现为猪的咳嗽和气喘，病变部位基本集中在肺脏心叶、尖叶、中间叶和膈叶前缘，呈肉样实变。猪圆环病毒病是由致病性猪圆环病毒引起的接触性传染病。猪圆环病毒主要侵害猪的免疫系统，破坏淋巴细胞的正常结构，抑制淋巴细胞的功能，最终造成机体免疫抑制和抗病力下降，导致病毒性及细菌性疾病的继发感染[3]。猪圆环病毒病临床以母猪繁殖障碍、仔猪抖抖病、仔猪断奶后多系统衰竭综合征和皮炎肾病综合征等为特征。猪圆环病毒和猪肺炎支原体是公认的猪呼吸道传染病的原发性病原[4]。猪瘟是由猪瘟病毒引起的以高热稽留及弥散性出血为特征的烈性传染病，最终导致发病猪大量死亡，对养猪业危害非常严重[5]。

疫苗免疫是控制上述三种传染病的有效手段。自2019年以来，开始推行猪圆环病毒2型疫苗和猪肺炎支原体灭活疫苗的联合免疫，一针多防，给养殖户带来便利。后非瘟时代，广大从业者对更简便有效疫苗联合免疫方式的呼声越来越高。猪瘟活疫苗、猪肺炎支原体疫苗和猪圆环病毒2型疫苗，这三种疫苗能不能联合免疫？联合免疫的时间如何安排？这三种疫苗联合免疫的效果如何？这些问题亟待解决。

本试验先将猪圆环病毒2型基因工程疫苗(水佐剂)和猪肺炎支原体灭活疫苗(水佐剂)混合，然后用二者的混合液稀释猪瘟活疫苗，注射健康仔猪，比较联合免疫方式与常规免疫方式的免疫效果，为三种疫苗免疫程序的优化提供实践依据。

1 材料与方法

1.1 疫苗

疫苗由洛阳普莱柯生物工程股份有限公司提供，疫苗名称、批号、剂量及数量如表1所示。 委托第三方专业检测机构对疫苗进行检测，并出具检测报告。

1.2 试验设计

1.2.1 试验分组

试验在湖北金旭农发集团浠水长流分公司进行。试验选取7日龄健康仔猪500头，分为A组和B组(表2)。试验开始前将试验猪标记组别，并称重、采血、观察是否有异常情况，做好相关记录。A组：联合免疫组(圆柯欣+柯喘宁+稳柯健三苗联合免疫)；B组：单苗免疫组(圆柯欣、柯喘宁、稳柯健单苗免疫)。饲养管理按试验猪场日常管理程序进行。

表1 疫苗名称、批号、剂量及数量

表2 试验仔猪头数和平均体质量

1.2.2 疫苗接种

试验从仔猪7日龄开始，到仔猪72日龄结束，试验日期为2019年10月7日-2019年12月12日。疫苗具体接种方案如表3所示。A组(联合免疫组)仔猪21日龄首免，免疫剂量：每头仔猪1 mL圆柯欣、2 mL柯喘宁和1头份稳柯健，圆柯欣与柯喘宁按照1∶2比例混合后，稀释稳柯健；55日龄二免，稳柯健1头份/头。B组(单苗免疫组)仔猪免疫按照试验猪场现有的免疫程序进行。所有仔猪均在出生当天，伪狂犬病活疫苗滴鼻并注射保健针，在35日龄注射伪狂犬病活疫苗1.5头份/头，断奶仔猪使用“化药+中药”进行保健，连续使用10天。

表3 疫苗接种方案

1.2.3 样品采集与指标分析

观察记录仔猪21日龄免疫后两天及育肥至中期的表现。观察统计试验猪在整个试验期的免疫应激(呕吐、发烧、死亡、精神沉郁、不食)情况、死淘率、日增重、均匀度等。在21日龄免疫前、21日龄免疫后(A组：三种疫苗联合免疫；B组：各疫苗单苗免疫)的第四周、第八周采血，A组每次采样17份，B组每次采样10份，检测血清中的猪瘟病毒抗体和猪圆环病毒2型抗体。血清抗体的检测采用ELISA法。

2 结果

2.1 仔猪生产性能、免疫应激、免疫后健康状况和死亡情况

仔猪21日龄免疫后两天及育肥至中期的表现如表4所示。联合免疫组个别仔猪免疫后采食量稍有下降，但两组仔猪免疫后两天的采食量无显著差异(数据未列出)。两组仔猪免疫后两天的精神状态良好，体温正常。两组均没有出现猪只的死亡。联合免疫组和单苗免疫组仔猪在育肥至中期期间，无咳嗽、气喘等情况，采食情况正常。

表4 仔猪21日龄免疫后两天及育肥至中期的表现

仔猪在整个试验期的死淘、应激及生长情况如表5所示。联合免疫组仔猪的总应激次数为8次，单苗免疫组总应激次数为13次，单苗免疫组猪应激比例高于联合免疫组。应激仔猪均没有出现严重的免疫副反应。联合免疫组仔猪整个试验期间的平均日增重为348 g，单苗免疫组仔猪整个试验期间的平均日增重为334 g，联合免疫组猪只每天多增加14 g。

表5 仔猪在整个试验期的死淘、应激及生长情况

2.2 单苗免疫猪和联合免疫组的猪瘟抗体变化情况

21日龄免疫前、21日龄免疫后的第四周及第八周，仔猪血清猪瘟抗体水平如图1所示。从图1可以看出，单苗免疫组和联合免疫组的猪瘟抗体水平，在21日龄免疫前、21日龄免疫后的第四周及第八周三个时间点，均无显著差异。

图1 不同免疫方式猪瘟抗体变化情况

2.3 单苗免疫组和联合免疫组的圆环抗体变化情况

21日龄免疫前、21日龄免疫后的第四周及第八周，仔猪血清圆环抗体水平如图2所示。从图2可以看出，单苗免疫组和联合免疫组的圆环抗体水平，在21日龄免疫前、21日龄免疫后的第四周及第八周三个时间点，均无显著差异。

图2 不同免疫方式圆环抗体变化情况

3 讨论

在本试验中，猪瘟活疫苗、圆环病毒2型基因工程疫苗、猪肺炎支原体灭活疫苗三种疫苗同时免疫，相互之间不干扰，联合免疫比单苗免疫表现出更好的生长性能，表明联合免疫安全有效。张敬峰等[6]的研究表明，在圆环病毒阳性猪场，免疫圆环病毒疫苗能够显著增强猪瘟疫苗的免疫效果。朱子健等[7]发现，用圆环病毒灭活疫苗稀释猪瘟活疫苗，进行免疫，可产生针对两种病原的免疫抗体，且两种抗体间互不影响。王科文等[8]发现，用猪肺炎支原体疫苗与猪圆环病毒2型疫苗联合免疫猪只，免疫效果与两种疫苗单独免疫的效果是一样的。朱巧艳等[9]发现，用圆环病毒-支原体二联苗稀释猪瘟活疫苗，进行一次性注射免疫，各疫苗的免疫效力均不受影响。上述研究表明，圆环病毒疫苗、支原体疫苗、猪瘟活疫苗两两组合或三种组合，进行联合免疫，对各种疫苗的免疫效果没有不良影响。

本试验发现，在后续育肥过程中，两组猪的发病率、饲料消耗情况没有明显的区别，印证了猪瘟疫苗、圆环病毒疫苗、支原体疫苗三种疫苗联合免疫，相互之间不干扰，进一步表明圆柯欣、柯喘宁、稳柯健三种疫苗可以联合一起，同时免疫。在非洲猪瘟流行的环境下，应尽量减少猪只与外界的接触。在不影响抗体水平的情况下，圆柯欣、柯喘宁、稳柯健联合免疫可以减少破皮行为，减少交叉感染的风险，减少猪的应激，同时提高劳动效率。