高效液相色谱法测定德拉昔布咀嚼片的体外溶出度

郭桂芳，于泓潇，李思鸿，张艺馨，程 平，张秀英*

(1.中国兽医药品监察所，北京 100081；2.东北农业大学动物医学学院，哈尔滨 150030)

德拉昔布属于昔布类非甾体抗炎药物(Nonsteroidal Anti-inflammatory Drugs，NSAIDs)，化学名为4-[5-(3-氟-4-甲氧基苯基)-3-二氟甲基-1H-咪唑-1-基]苯磺酰胺，临床上用于治疗犬骨性关节炎及其引起的疼痛，并可预防犬牙科与骨科手术后的疼痛[1]。德拉昔布原研单位为诺华制药有限公司(Novartis Pharmaceuticals Corporation)，商品名为Deramaxx®，于2002年被美国食品与药品管理局(Food and Drug Administration，FDA)批准上市[2]。因良好的镇痛抗炎效果以及显著降低的胃肠道副作用，德拉昔布已成为美国兽医临床犬骨性关节炎治疗的一线药物[3]。

德拉昔布咀嚼片(Deracoxib chewable tablets)目前尚未在我国上市销售，对其溶出度与稳定性的检测也未见报道。本实验建立考察德拉昔布咀嚼片溶出度的方法-高效液相色谱法(HPLC)，并对实验室研制的德拉昔布咀嚼片和美国Novartis公司生产的Deramaxx咀嚼片进行溶出度考察，以期为德拉昔布咀嚼片质量标准的建立及产品的质量控制提供依据。

1 材料与方法

1.1 试剂与材料 德拉昔布咀嚼片(实验室自制，规格：12 mg、25 mg，批号：20180507、20180514，20180521)；德拉昔布标准品(北京Absin公司，CAS号：169590-41-4，纯度 99%)；Deramaxx(美国Novartis公司，购自美国，规格：12 mg、25 mg，批号：175227C)；乙腈(色谱纯，美国Sigma公司)。

1.2 仪器 Waters e2695高效液相色谱系统(美国 Waters公司)；Waters 2998 紫外检测器(美国 Waters公司)；THP-10压片机(天祺制药机械有限公司)；RC-8D智能溶出度测定仪(北京凯德兴茂有限公司)。

1.3 色谱条件与系统适应性 色谱柱为Waters XSelect H88 C18色谱柱(4.6 mm×250 mm, 5 μm)；流动相为磷酸盐缓冲液(pH4.5)-乙腈 (52∶48，V/V)；检测波长252 nm；流速1 mL/min；柱温30 ℃。

1.4 德拉昔布咀嚼片制片工艺 采用直接压片法[4]，按表1中处方称取适量原辅料过60目筛，适当调整主药与淀粉比例，压片，制成每片含德拉昔布12 mg/25 mg。

表1 德拉昔布咀嚼片处方

1.5 溶出度测定 溶出介质为0.8%十二烷基硫酸钠溶液，溶出方法为桨法，转速50 r/min。取德拉昔布咀嚼片与Deramaxx各6片，投入装有900 mL 0.8%十二烷基硫酸钠溶液的溶出杯中，搅拌桨转速为50 r/min，溶出杯内温度设定为37 ℃。分别在5、10、15、20、30、40和50 min取样1 mL，同时补充同体积的溶出介质。

1.6 溶液配制

1.6.1 对照品溶液配制 精密称取25 mg德拉昔布标准品，以适量0.8%十二烷基硫酸钠溶解，至250 mL容量瓶中定容，制成浓度为0.1 mg/mL德拉昔布溶液，作为对照品溶液。

1.6.2 供试品溶液配制 从溶出度测定仪中取得的样品溶液，经3000 r/min离心5 min，取上清，0.22 μm滤膜过滤，作为供试品溶液。

1.7 方法学考察

1.7.1 专属性 取德拉昔布咀嚼片，Deramaxx与空白辅料分别充分粉碎，以0.8%十二烷基硫酸钠溶液溶解，按方法1.6.2制成供试品溶液，取10 μL注入HPLC记录色谱图与峰面积。

1.7.2 线性关系 取不同体积1.6.1项下的对照品溶液，以0.8%十二烷基硫酸钠于10 mL容量瓶中定容，配成浓度为5、10、15、20和25 μg/mL的系列德拉昔布标准溶液，分别取10 μL注入液相色谱仪，应用SPSS 22.0建立标准曲线并进行相关性分析。

1.7.3 精密度 取1.6.1项下对照品溶液2 mL定容到10 mL容量瓶中，配成含量为20 μg/mL的德拉昔布溶液，连续进样6次，记录色谱图与峰面积。

1.7.4 灵敏度 取1.6.1项下对照品溶液，以0.8%十二烷基硫酸钠溶液逐步稀释进行检测，主峰响应值为噪音水平的3倍左右时，确定检测限，主峰响应值为噪音水平的10倍左右时，确定定量限。

1.7.5 溶液稳定性 取1.6.1项下的对照品溶液，分别在0、2、4、8、16和24 h测定，评价德拉昔布在0.8%十二烷基硫酸钠溶液中的稳定性。

1.7.6 回收率 采用加样回收率测定法，称取适量德拉昔布空白辅料9份，分别精密添加20 mg (80%)、25 mg (100%)、30 mg (120%)的德拉昔布标准品，每个浓度3份平行，按方法1.6.2制成添加回收样品溶液，测定回收率。

1.8 溶出度差异比较 分别取德拉昔布咀嚼片、Deramaxx各6片， 按方法1.5进行溶出度测定，记录溶出度结果并绘制溶出度与时间曲线，考察不同规格德拉昔布咀嚼片溶出度的差异。

2 结果与分析

2.1 专属性 结果如图1-图3所示，德拉昔布保留时间约为11.3 min，主峰附近无杂峰干扰，表明方法的专属性良好。

图1 空白辅料溶液色谱图

图2 德拉昔布咀嚼片溶出度色谱图

图3 Deramaxx溶出度色谱图

2.2 方法学考察 经SPSS 22.0处理数据得到样品浓度C与峰面积A的回归方程A=31237C+9.6559(r2=0.9992)，说明在5～25 μg/mL的浓度范围内，德拉昔布的浓度与峰面积呈良好的线性响应。德拉昔布的检测限与定量限分别为0.81 μg/mL与2.57 μg/mL；精密度测定结果为98.66%±0.73%，表明仪器精密度良好；方法的平均回收率为101.8%±0.91%；99.09%±0.68%的溶液稳定性表明德拉昔布24 h以内在0.8%十二烷基硫酸钠溶剂中稳定。表2结果表明，HPLC法检测德拉昔布溶出度的方法可行。

表2 HPLC法检测德拉昔布咀嚼片溶出度方法学考察结果

图4 德拉昔布咀嚼片与Deramaxx溶出度结果

2.3 溶出度测定 结果见图4。在30 min内，德拉昔布咀嚼片溶出度87.78%±1.91%，Deramaxx溶出度88.76%±2.05%，均大于85%，符合片剂的有关规定。

2.4 溶出度差异 结果见图5。25 mg/12 mg德拉昔布咀嚼片与Deramaxx在30 min的溶出度差异RSD分别为1.91%、1.84%、1.99%、1.52%，表明标示量为25 mg和12 mg的德拉昔布咀嚼片与Deramaxx在30 min的溶出度无显著差异。

A、B、C、D分别为同一批次25 mg德拉昔布咀嚼片、25 mg Deramaxx、12 mg德拉昔布咀嚼片、12 mg Deramaxx的溶出度图，其中1、2、3、4、5、6分别代表1～6号样品

3 讨论与结论

3.1 检测方法的确定 一般检测药物溶出度的传统方法为紫外法，其优点是方便、快速、灵敏度高、应用范围广[5]，缺点是准确度不高。由于片剂中辅料使用较为复杂，可能存在干扰紫外吸收的辅料，造成最终的检测结果不准确，因此本文建立了检测德拉昔布溶出度的HPLC法， 具有简单、快速、准确等优点，可有效分离辅料与主药，大大提高了药物溶出度检测的准确程度。

3.2 溶出方法的确定 片剂、胶囊、丸剂的溶出度方法都选择为桨法。德拉昔布咀嚼片属于片剂，因此选择桨法进行试验，转速设定为50 r/min(桨法一般默认转速)，溶出温度为模拟体内环境选择为37 ℃[7-9]。

3.3 溶出介质的确定 对于难溶性药物一般可以在溶出介质中添加适量的增溶剂(通常为表面活性剂)以增加药物的溶出程度。德拉昔布属于难容性药物，参考德拉昔布的同类药物——维他昔布的溶出方法[6]，选择0.8%十二烷基硫酸钠为溶出介质，此外溶出介质体积通过参考谢沐风的研究[10]，确定为900 mL。

采用本文建立的HPLC法测定了德拉昔布咀嚼片的溶出度，自制的德拉昔布咀嚼片与美国Deramaxx®在30 min内的溶出度均大于85%，符合咀嚼片的相关规定，而且不同规格的德拉昔布咀嚼片与Deramaxx®溶出度无明显差异，说明本文所建立的HPLC法简单、准确、重现性好，可用于德拉昔布咀嚼片溶出度的检测。