蒲地蓝消炎口服液含量测定方法的研究进展

曾祥素，欧阳波

蒲地蓝消炎口服液由蒲公英、黄芩、板蓝根、苦地丁4味中药组成，具有清热解毒、抗炎消肿的功能，临床应用广泛，全国一二三级医院覆盖率达71%[1]。其主要用于疖肿、腮腺炎、咽炎、扁桃体炎、手足口病等，早期单用可替代抗生素，中期联合抗生素增强疗效，长期使用降低抗生素耐药性[2]。目前蒲地蓝消炎口服液已经鉴定出79种化学成分并进行了药味归属，蒲公英中绿原酸、咖啡酸、菊苣酸等酚酸类成分，苦地丁中紫堇灵等生物碱类成分，板蓝根中表告依春等生物碱类成分和腺苷等核苷类成分，以及黄芩中黄芩苷、汉黄芩苷、汉黄芩素、千层纸素A等黄酮类成分为其主要的活性成分[3-4]。2020版《中华人民共和国药典》[5]只对黄芩苷和菊苣酸2种成分进行了质量控制。为更好地控制产品质量，保证临床疗效，近年来研究者对蒲地蓝消炎口服液的含量测定方法进行了广泛深入的研究。本文对近年来蒲地蓝消炎口服液含量测定方法进行了汇总分析，旨在为全面控制其质量标准提供借鉴参考。蒲地蓝消炎口服液含量测定方法如下：

1 测定1种化学成分

吴文华等[6]建立了高效液相色谱(HPLC)法测定蒲地蓝消炎口服液中菊苣酸的含量。样品70%乙醇直接稀释。色谱柱：Agilent ZORBAX EclipseXDB C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，乙腈：0.2%磷酸溶液为流动相，流速：1.0 ml/min，柱温30 ℃，检测波长为326 nm，菊苣酸的线性范围为0.0338～0.3376 μg(r=0.9999)，平均加样回收率为98.91%，RSD为1.7%。

阮治纲等[7]使用HPLC法测定蒲地蓝消炎口服液中咖啡酸的含量。样品以5%甲酸的甲醇溶液超声30 min。色谱柱为 ZORBAX Extend-C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为甲醇—磷酸氢二钠缓冲液(23∶77取磷酸氢二钠1.56 g，加水使溶解成1 000 ml，用磷酸调节pH值为4.0)，流速为1.0 ml/min，柱温40 ℃，检测波长为323 nm，进样量10 μl。咖啡酸线性范围在0.0336～0.6720 μg呈良好的线性关系(r=0.9999)；平均回收率为99.49%，RSD为0.35%。蒋磊等[8]用HPLC法分析测定蒲地蓝消炎口服液咖啡酸的含量。样品5%甲酸的甲醇溶液直接稀释。色谱柱为Hypersil ODS(250 mm×4.6 mm，2.5 μm)，流动相为甲醇—磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钠1.56 g，加水使溶解成1 000 ml，再加1%磷酸溶液调节pH值至3.8～4.0)，流速为1.0 ml/min，检测波长为323 nm，进样量10 μl，柱温40 ℃。咖啡酸在线性范围为8.95～53.7 μg/ml，平均加样回收率为99.99%，RSD为0.35%。上述研究者的方法对蒲地蓝消炎口服液中咖啡酸含量研究进行了有益的探索，但流动相使用磷酸盐相对容易对色谱柱、单向阀、柱塞泵造成损坏。

代磊[9]采用HPLC法测定了蒲地蓝消炎口服液中咖啡酸的含量。样品5%甲酸50%甲醇溶液超声处理40 min。色谱柱：Eclipse ODS-C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相：甲醇—乙腈—0.05%磷酸溶液(8∶7∶85)，流速：1.0 ml/min，检测波长：323 nm，进样量10 μl。结果咖啡酸在0.0348～0.348 μg(r=0.9999)内呈良好的线性关系，平均加样回收率为97.6%，RSD为1.5%。该研究对蒲公英主要有效成分咖啡酸的含量测定提供了较为简便的分析方法。

曲楠楠[10]应用HPLC法对蒲地蓝消炎口服液中紫堇灵的含量进行了测定。样品甲醇超声30 min。采用C18色谱柱，流动相：甲醇—磷酸盐缓冲液(浓度为0.015 mol/L，pH=6.7)(80∶20)，检测波长：289 nm，流速：1.0 ml/min，进样量10 μl，柱温：30 ℃。在该检测条件下，紫堇灵的线性范围为0.2004～1.002 μg(r=1)，平均加样回收率为99.50%，RSD为0.1%，样品10 h内稳定性良好。该方法可操作性强、样品处理较简便，对蒲地蓝消炎口服液中苦地丁药材的质量控制提供了借鉴。

2 同时测定2种化学成分

苏万福等[11]采用HPLC法同时测定了蒲地蓝消炎口服液黄芩中的黄芩苷和蒲公英中的菊苣酸含量。样品加乙腈—水(20∶80)直接稀释。色谱柱：Agilent Zorbax SB-Pheny1(75 mm×4.6 mm，3.5 μm)，流动相：水—乙腈—甲醇—磷酸(75∶15∶10∶0.2)，流速梯度洗脱，柱温：40 ℃，波长326 nm，进样量10 μl。结果黄芩苷在90.58～1449.3 μg、菊苣酸在5.475～54.75 μg浓度范围内线性关系良好，(黄芩苷r=0.9999、菊苣酸r=0.9998)。黄芩苷和菊苣酸平均回收率分别为99.72%、99.38%，RSD分别为0.92%、0.99%。现行药典黄芩苷和菊苣酸是分别采用2种分析方法，而且菊苣酸单针进样分析时间长达65 min。而本研究实现了用一种方法同时测定2种成分，全部检测时间23 min，可降低生产分析成本。

陈世雄等[12]通过UPLC(超高效液相色谱)法同时分析了蒲地蓝消炎口服液黄芩中的黄芩苷和蒲公英中的菊苣酸含量。样品加乙腈—水(1∶3)直接稀释。色谱柱Waters Xbridge C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，柱温30 ℃，波长326 nm，乙腈—0.2%磷酸溶液为流动相梯度洗脱，进样量10 μl。结果表明，黄芩苷在90.59～1449.36 μg浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999)，菊苣酸在5.48～54.85 μg浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9998)，黄芩苷和菊苣酸平均回收率分别为105.887%、99.033%，RSD分别为1.03%、1.11%。与现行药典相比，此方法也缩短了检测时间，提高了检测效率，可提升产品的生产控制力度。

刘德胜等[13]运用HPLC法测定了蒲地蓝消炎口服液中绿原酸和咖啡酸的含量。样品75%甲醇直接稀释。色谱柱为Waters SμnfireTMC18(150 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为乙腈—0.4%磷酸水溶液(9∶91)，检测波长为327 nm，柱温为室温。绿原酸和咖啡酸分别在浓度14.7～3 750.0 ng/ml，68.4～4 376.0 ng/ml范围内与峰面积积分值呈良好线性关系(r2分别为0.9974和0.9984)，平均加样回收率分别为101.6%，101.1%。RSD都为1.3%。本实验同时测定了蒲地蓝消炎口服液中君药蒲公英清热解毒的成分绿原酸和咖啡酸的含量，对君药蒲公英质量的进一步控制具有参考价值。

张学东等[14]建立了同时测定蒲地蓝消炎口服液中绿原酸和咖啡酸含量的RP-HPLC法。样品50%甲醇直接稀释。色谱柱为Inertsil ODS C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为乙腈—0.04%磷酸水溶液(15∶85)，柱温35 ℃，检测波长327 nm。实验表明，绿原酸和咖啡酸在质量浓度为4.0～19.0 μg/ml时，与峰面积呈良好的线性关系，线性回归方程分别为Y=37434.0X-45435.1(r=0.9996)、Y=111260X-152136(r=0.9998)。平均回收率分别为99.0%(RSD=1.65%)、100.1%(RSD=1.78%)。本法对蒲地蓝消炎口服液中绿原酸和咖啡酸的含量测定再次提供了实验依据。

3 同时测定5种化学成分

姜梦华等[4]通过体外抗炎活性为基础结合多指标筛选了黄芩苷、汉黄芩素、腺苷、菊苣酸和紫堇灵5种成分作为蒲地蓝消炎口服液的质量标志物并进行了含量测定。色谱柱为Agilent SB C18，流动相为甲醇—0.1%磷酸水，梯度洗脱，检测波长280 nm，流速1.0 ml/min，柱温30 ℃，进样量10 μl。实验表明，各方法学考察结果均符合要求，所测三批样品5个质量标志物的含量都较稳定。本研究创新性的提出了囊括蒲地蓝消炎口服液全部4味药材的质量标志物，并测量了标志物的含量，更能全面反映蒲地蓝消炎口服液质量。

4 同时测定6种化学成分

吴婷等[15]使用UPLC-MS-MS法测定了蒲地蓝消炎口服液中野黄芩苷、黄芩苷、绿原酸、汉黄芩素、黄芩素和咖啡酸6种成分的含量。样品50%甲醇直接稀释。色谱柱为Phenomenex Luna C8(50 mm×2.0 mm，3 μm)，流动相为甲醇—0.1%甲酸水溶液，梯度洗脱，体积流量为200 μl/min，进样量2 μl，柱温35 ℃。质谱采用电喷雾离子源，多反应监测方式进行负离子扫描。各测定成分分别在0.205～2.054、0.414～4.140、0.134～1.335、0.109～1.088、0.541～5.410、0.339～3.390 μg/ml的浓度范围内呈良好的线性关系，r≥0.9994。平均加样回收率96.25%～101.79%，RSD均<3.5%。此方法整个进样过程仅需6 min，大大缩短了进样时间，做到了快速高效、灵敏准确，为更好地质控蒲地蓝消炎口服液提供了依据。

5 同时测定7种化学成分

董自波等[16]采用HPLC法测定了蒲地蓝消炎口服液黄芩中的黄芩苷、汉黄芩素、腺苷、咖啡酸、绿原酸、菊苣酸和紫堇灵7种成分含量。样品50%甲醇直接稀释。采用Phenomenex Luna C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为甲醇—0.1%三氟乙酸水溶液梯度洗脱，柱温30 ℃，检测波长280 nm，流速1.0 ml/min，进样量10 μl，50%甲醇直接稀释。各成分分别在161.3～1613、0.726～7.260、4.092～40.92、2.212～22.12、2.324～23.24、38.56～385.6、1.816～18.16 mg/L的浓度范围内呈良好的线性关系。r≥0.9996。平均加样回收率98.73%～102.1%，RSD均<2.6%。该研究首次覆盖了蒲地蓝消炎口服液全部4味组方药材成分的含量测定、对全面控制蒲地蓝消炎口服液的质量标准具有参考价值，但整个进样时间100 min，分析时间较长。

6 同时测定8种化学成分

朱粉霞等[17]建立UPLC法同时测定了蒲地蓝消炎口服液中腺苷、表告依春、咖啡酸、黄芩苷、千层纸素A苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素8种成分的含量。样品50%甲醇超声30 min。色谱柱为Acqμity BEH C18(100 mm×2.1 mm，1.7 μm)，流动相为甲醇—0.1%甲酸梯度洗脱，流速0.3 ml/min，柱温30 ℃，波长为275 nm。结果各被测成分分别在1.22～122.40、0.41～41.20、0.45～45.40、12.03～1203、0.82～81.80、1.01～100.60、0.99～39.40、0.61～60.60 μg/ml的线性浓度范围呈良好的线性关系，r≥0.9971。此法快速、准确，这对化学成分复杂的中成药的分离分析上具有明显优势，这对蒲地蓝消炎口服液的质量标准的提升提供了方向与依据。

7 同时测定12种化学成分

高文雅等[18]应用UHPLC-QqQ-MS法14 min内同时测定了蒲地蓝消炎口服液中汉黄芩苷、黄芩苷、汉黄芩素、白杨素、木犀草素、咖啡酸、乙酰紫堇灵、紫堇灵、原阿片碱、水杨酸、尿嘧啶、腺苷12种成分的含量。样品加入纯水溶液稀释然后离心取上清液。色谱柱为Agilent Extend C18(150 mm×3.0 mm，3.5 μm)；流动相为甲醇—0.1%甲酸水溶液梯度洗脱；柱温40 ℃，流速0.3 ml/min，进样量2 μl。质谱为电喷雾离子化源，动态多反应监测模式，正、负离子交替模式检测。上述检测成分分别在0.06224～16.24、33.95～530.4、0.01364～3.558、0.001157～0.3024、0.001199～0.3130、0.01464～3.821、0.0007395～0.03859、0.06083～3.174、0.002443～0.6374、0.02180～1.138、0.02299～6.000、0.006046～1.578 mg/L浓度范围内线性关系良好，r2≥0.980平均加样回收率94.6%～106.9%。研究人员使用UHPLC-QqQ-MS法所测成分覆盖了蒲地蓝消炎口服液全部4种组方中药，样品处理简便，灵敏度高，检测快速全面，对全面控制蒲地蓝消炎口服液的质量奠定了基础。

综上所述，对蒲地蓝消炎口服液含量的测定主要集中在各单味药的特征性成分，其中咖啡酸、绿原酸、黄芩苷、汉黄芩苷、腺苷、紫菫灵是研究蒲地蓝消炎口服液质控的主要成分。为保证蒲地蓝消炎口服液疗效均一稳定，研究能同时覆盖全部4味组方药材的指标活性成分的含量测定至关重要，而不只是同时检测多个化学成分表象的提升其质量标准。因此筛选真正能反映蒲地蓝消炎口服液内在品质的药效基础物质并积极应用新的检测技术和方法进行质控，才能更加有效控制蒲地蓝消炎口服液质量。