复方聚维酮碘油乳剂与聚维酮碘溶液对野生动物体外抑菌作用比较

李向勇，粟玉刚，张 浪，陈大非，张卫忠

（1.长沙生态动物园，湖南长沙410118；2.长沙市农业综合行政执法局,湖南长沙410013）

聚维酮碘是一种广谱、高效低毒的消毒药物，对细菌、病毒和真菌均有良好杀灭作用，有明显的杀瘤效力，国外有文献报道稀释聚维酮碘可能通过抑制超氧化物歧化酶的活性从而抑制肿瘤生长和诱导细胞凋亡[1-4]。聚维酮碘的剂型在兽医上的应用也有报道，如一种复方聚维酮碘凝胶有效碘稳定性研究等等[5]。

无论是生活在野外的野生动物，还是饲养在动物园的圈养动物，其所受的外伤都是危害动物健康的一类疾病，如果不及时治疗或采取相应护理措施就会造成感染甚至危及生命[6]。为了探讨聚维酮碘在野生动物外伤上的应用，将聚维酮碘与有机溶剂、乳化剂按一定比例借助机械力分散悬浮于另一种不相溶的液体中来形成的一个均相的分散体系。其药物混悬液与油相和水相形成了一个缓释剂药物库使药物能长时间持续作用以达到预期效果，用药次数少且药效能持续较长时间[7-9]。此次实验评价了复方聚维酮碘油乳剂与聚维酮碘溶液的体外抑菌作用，为复方聚维酮碘油乳剂的进一步研究开发提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

复方聚维酮碘油乳剂（自制）、聚维酮碘溶液（购于郑州六顺化工产品有限公司）、TSA 培养基、LB 培养基、链球菌菌株、大肠杆菌菌株、金黄色葡萄球菌菌株、沙门氏菌菌株、TTC 显色剂。

1.2 方法

1.2.1 细菌计数

取保存于实验室-80℃的链球菌菌株、大肠杆菌菌株、金黄色葡萄球菌菌株、沙门氏菌菌株，待其融化后用接种环接种至培养皿中，放于37℃生化培养箱中培养24h。勾取长出的菌落接种于5mL 液体培养基中，放于摇床中37℃、200rmp 培养12 小时。取1.5mL 灭菌离心管8 只编号1～8，各加入900μL 无菌水，吸取培养后的菌液100μL 加入到1 号管中吹打混匀，吸取1 号管液100μL 加入到2号管中吹打混匀，重复此操作直到8 号管。选取5、6、7、8 号管，吸取 100μL 液体加入固体培养基中均匀涂板，各浓度做3 个平行组，放于37℃生化培养箱中培养24h。

1.2.2 最小抑菌浓度的测定

1.2.2.1 操作步骤

在细菌计数的基础上将细菌数量稀释至1×105cfu/mL～1×106cfu/mL。准备无菌的玻璃试管24支，分为 A、B 两组，每组 12 支编号 1～12，每个试管中加入0.5%的TTC 显色剂5μL。A 组为复方聚维酮碘油乳剂，B 组为聚维酮碘溶液。将复方聚维酮碘油乳剂利用二倍稀释法稀释成 20g/L、10g/L、5g/L、2.5g/L、1.25g/L、0.625g/L、0.3125g/L 的浓度的受试液，在A 组试管中加入2mL 含两倍浓度培养基的培养液，吸取稀释后的受试液2mL 加入对应的试管中，在A1-A10 号试管中接入0.1mL 的浓度约为 1×106cfu/mL 的菌液，A11 号试管加入 4mL 培养液和等量的菌液做阳性对照，A12 号试管中只加培养液做阴性对照。聚维酮碘溶液用相同操作方法在B 组试管中进行。将A、B 两组试管放于37℃生化培养箱中培养24h。

1.2.2.2 判断方法

通过观察，若A11 号试管变红，表明阳性对照组有细菌生长；A12 号试管没有变红，表明阴性对照组没有细菌生长，则实验成立。A1-A10 试管中没有变红的编号数字最大试管所对应的浓度即为该药对链球菌的最小抑菌浓度（MIC）。

1.2.3 最小杀菌浓度的测定

1.2.3.1 操作步骤

在最小抑菌浓度的基础上，选取该浓度及以前的各浓度试管，吸取100μL 试管液均匀涂板于TSA 固体培养基中。倒放于37℃生化培养箱中，24h后计数。

1.2.3.2 判断方法

通过计数统计，菌落总数小于或等于5 的培养板所对应的试管中浓度最小的即为最小杀菌浓度。

2 结果与分析

2.1 实验结果

经实验测得复方聚维酮碘油乳剂对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和链球菌的MIC 依次为5g/L、10g/L、5g/L、1.25g/L；聚维酮碘溶液对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和链球菌的MIC 依次为 2.5g/L、10g/L、10g/L、5g/L。复方聚维酮碘油乳剂对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和链球菌的 MBC 依次为 5g/L、10g/L、5g/L、1.25g/L；聚维酮碘溶液对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和链球菌的 MIC 依次为 2.5g/L、10g/L、10g/L、5g/L。具体实验结果如下表1 所示。

表1 复方聚维酮碘油乳剂和聚维酮碘溶液的MIC、MBC 结果

2.2 结果分析

在MIC 和MBC 实验中因所用试剂为乳浊色，肉眼无法很直观的看出细菌生长状况，遂采用TTC显色剂的方法，利用嗜中温性需氧菌在其新陈代谢过程中产生的琥珀酸脱氢酶可以使无色的TTC 还原为红色的TPF 的特性，在有细菌生长的情况下会变为红色、无细菌生长时为无色的原理清晰地看出细菌的生长情况。将未变色的稀释度最大的浓度判定为该药物对相应细菌的MIC 值。变红色的试管在固体培养基上涂板后菌长出来300 个以上的菌落，而未变红的试管在固体培养基上涂板后菌没有细菌生长，根据这一结果，可知得到的MBC 值与MIC 值相同。

3 结论

复方聚维酮碘油乳剂对金黄色葡萄球菌、链球菌的抑制和杀灭作用均优于聚维酮碘溶液，对大肠杆菌的抑制和杀灭作用要低于聚维酮碘溶液，对沙门氏菌的抑制和杀灭作用相同。此外，复方聚维酮碘油乳剂还含有龙血竭、樟脑、薄荷油等成分，使其对伤口具备止血、驱蚊等功效，这些药物对聚维酮碘的抑菌作用带来什么样的影响需进一步实验验证。 □