乳腺癌患者TOP2A基因变异的临床病理意义分析

（沈阳二四二医院病理科，辽宁 沈阳 110000）

乳腺癌是临床常见病、多发病。近几年，乳腺癌的发病率呈逐年上升的势态，其在很大程度上对民众的生活质量造成了严重影响[1-2]。在对乳腺癌患者开展化疗过程中，通常需要应用蒽环类药品。但现如今尚缺少关于蒽环类药品剂量强度有效靶标。拓扑异构酶2A（TOP2A）属于核基质主要成分。其在核内能够体现出相关效用[3]。该物质参与了DNA转录、复制、修复和重组过程，是蒽环类药品有效的作用靶点。本文全面探究乳腺癌患者拓扑异构酶2A基因变异临床病理意义，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2009年12月至2019年12月本院所收治的218例浸润性乳腺导管癌患者为研究对象。受试者年龄26～71岁，平均年龄（45.32±2.62）岁。患者在接受手术治疗以前，没有进行过分子靶向治疗或者放化疗。病理样本在离体后30 min通过浓度为10%的甲醛溶液完成固定、脱水、石蜡包埋、切片与HE染色。邀请2位高资历病理科医师阅片并诊断，确定受试者为浸润性乳腺癌。

1.2 方法

1.2.1 试剂以及探针 本实验所利用的免疫组化检测为福州迈新生物技术开发有限公司生产的HER-2/neu、Ki-67、PR、ER。荧光原位杂交检测试剂盒为广州安必平医药科技股份有限公司生产的HER2/neu/TOP2A/CSP17多色检测试剂盒。

1.2.2 实验方法 ①FISH：将玻片利用常规方式脱蜡复水，于100 ℃环境下水浴处理，时间为20 min。后进行蛋白酶消化，时间为10 min，85 ℃变性，37 ℃杂交过夜，开展DAPI染核和封片，发生荧光反应，应用显微镜观察反应结果。②IHC法：取用玻片，利用常规方法实施脱蜡复水，有效修复抗原。一抗孵育4 ℃过夜、二抗孵育30 min，室温。经DAB染色，实施苏木精复染，脱水，透明封片，于显微镜下观测结果。

1.3 具体判读标准 针对于TOP2A具体判定标准，利用本实验所使用的试剂盒推荐标准完成。癌瘤细胞计数共计30个，统计出Ratio值。TOP2A扩增标准为：①拓扑异构酶2A信号点为簇状或者点簇状。②TOP2A/CSP17比例在2.0以上。TOP2A缺失标准为：TOP2A/CSP17比例在8.0以下。针对于HER-2中的FISH以及IHC测定利用我国乳腺癌HER2检测指南中的判读标准完成该项工作。IHC、PR、ER判读标准结合乳腺癌雌激素孕激素受体免疫组织化学检测指南中的相关条目完成。分子分型分为Luminal A型以及Luminal B型、基底细胞型与HER-2过度表达型，细则为：Luminal A型：Ki67在14%以下、HER2-、ER+和（或）PR+。Luminal B型：其分为两类，其一、ER+或/和PR+，Ki67在14%以上；其二、HER2+、ER+或/和PR+。HER-2过度表达型：Ki67呈高度表达、HER2+、PR-、ER-。基底细胞型：HER2-，PR-、ER。

1.4 统计学方法 本实验利用SPSS20.0统计学软件对本研究产生的所有数据进行分析，对数据内的计量资料开展Spearman相关性分析，计数资料实施χ2检验分析，若P＜0.05，证实相关数据存在统计学差异。

2 结果

2.1 乳腺癌患者TOP2A变异和HER2基因相关性 TOP2A基因扩张共计52例、缺失10例、总变异例数为62例。TOP2A以及HER2基因扩增共计52例，在此其中共计10例TOP2A基因缺失但HER2基因扩张；有46例受试者TOP2A基因不存在异常表达，但存在HER2基因扩张。和TOP2A基因变异率相比，HER2基因变异率明显更高，HER2基因变异率和TOP2A基因变异率存在显著相关性（r=0.698，P＜0.05），HER2蛋白变异和TOP2A基因变异存在相关性（r=0.3998，P＜0.05）。见表1。

2.2 TOP2A基因变异和临床病理特点关联性 TOP2A基因变异和患者肿瘤直径、年龄无明显相关性，P＞0.05，而与组织学分级情况、淋巴结数量存在明显相关性，P＜0.05。见表2。

表1 乳腺癌患者TOP2A变异和HER2基因相关性

表2 TOP2A基因变异和临床病理特点关联性

2.3 TOP2A基因于各个乳腺癌分子分型内变异情况 本组内，分子分型为Luminal A型共计30例、TOP2A基因扩增0例、缺失2例、正常28例。分子分型为Luminal B型共计130例、TOP2A基因扩增34例、缺失2例、正常94例。HR2过度表达型共计46例，TOP2A基因扩增18例、缺失6例、正常22例。基底细胞型共计12例，其中TOP2A基因扩张以及缺失均为0例，正常12例。TOP2A基因于Luminal B型以及HER2过表达型呈现为高表达，其在Luminal A型以及基底细胞型为低表达。乳腺癌患者临床分子分型和TOP2A基因变异情况无相关性（r=-0.189，P＞0.05）。

3 讨论

诸多文献表明，TOP2A蛋白属于蒽环类化疗药物直接作用靶点。TOP2A参与了转录、细胞复制、有丝分裂和基因重组等过程，TOP2A和乳腺癌患者化疗敏感度与预后存在显著关联性[4]。利用IHC法测定乳腺癌受试者病变组织内TOP2A蛋白表达有着良好的公允性。有文献表明，TOP2A蛋白与乳腺癌组织内表达率在1%～90%，中位表达率大约为30%。有学者依照10%的截断值测定TOP2A阳性表达率范围为50%～80%[5]。人体的HER基因和TOP2A基因均在17号染色体中。上述二者位置相邻[6]。有研究表明，在HER2阳性乳腺癌患者群体中，有89%～90%的患者存在TOP2A基因缺失或者扩增现象，但在HER2正常群体中则少有TOP2A基因变异情况。因此可以认为：上述两类基因属于协同变异，到HER2基因完成扩增以后，染色体发生重排，进而使TOP2A基因缺失或者扩张。于HER2基因正常乳腺癌患者中也会存在TOP2A变异现象[7]。有调查表明[8]，HER2基因正常群体中，TOP2A缺失以及扩张概率分别达到了3.7%以及6.6%。而在HER2基因扩增样本内，TOP2A基因缺失以及扩增则达到了24.0%以及26.5%。由此可见，TOP2A基因变异于HER2扩增标本内更容易出现TOP2A表达。拓扑异构酶2A为基因转录、复制所需要的关键物质。发生TOP2A基因变异的乳腺癌患者往往预后不佳，生存期较短。这一点重点体现在TOP2A基因缺失患者群体之中，其预后往往更差[9]。

本实验经过对218例乳腺癌受试者实施HER2蛋白、TOP2A基因、HER2蛋白、分子分型和组织分型等临床病理特点开展分析，结果表明：TOP2A变异率为28.4%。该项报道和国内文献相似。该基因的扩张和HER2基因扩张与其自身蛋白表达存在极大关联性。其一般发生于HER2基因扩张的受试者之中。本组内仅有2例TOP2A基因缺失受试者同时出现了HER2基因没有扩张的情况。另外值得说明的是，TOP2A基因变异和癌瘤组织分级以及转移淋巴结也存在关联性。TOP2AR基因变异和乳腺癌疾病分子分型无关联性[10-14]。本实验研究表明，与基底细胞形态以及Luminal A型内TOP2A基因变异率较低，而在HER2过表达型以及Luminal B型变异率则较高。TOP2A基因变异一般集中于分化不佳的癌瘤受试者之中。这也在根本上代表了TOP2A基因变异和乳腺癌患者预后不良存在关联性。其属于预测患者疾病预后情况的公允化指标。

针对于乳腺癌患者来讲，为其开展新辅助化疗已然成为了临床常用方法。但值得注意的是，上述指标是否能够预测化疗效率还没有形成一致的观点。相关研究证实：对于发生TOP2A基因扩增的患者在接受化疗时具有良好的总生存率和无病生存率，而对于TOP2A基因缺失的机制和相关临床意义尚未被深入性研究，这也是日后临床进一步研究的方向，以期为日后临床实施个体化治疗以及提升临床治疗成效提供理论依据。