波纹龙虾胚胎对五种生态因子的适应性

（广东海洋大学水产学院，广东 湛江 524088）

目前我国大陆沿海龙虾货源紧缺，产品供不应求，需从国外进口应市[2]。我国目前主要的龙虾养殖方式是捕捞天然龙虾苗种进行人工养殖，由于自然海区苗种资源有限，无法满足养殖的需求，因此开展龙虾人工繁殖研究势在必行。波纹龙虾（Panulirus homarus）隶属于十足目（Decapoda）腹胚亚目（Pleocyemata）龙虾科（Palinuroidea）龙虾属（Panulirus）[1]，在印度洋和西太平洋均有分布，是我国东南沿海的地方经济种类。波纹龙虾具有生长快、个体大等优点，波纹龙虾的人工繁殖具有很高的研究价值和经济价值。

龙虾的胚胎发育是龙虾生活史中的重要阶段之一，也是龙虾人工繁殖研究中重要的领域之一。龙虾的人工繁殖研究主要集中在叶状幼体和成虾阶段[3-5]，对于胚胎发育关注较少[1,6]。生态因子如温度、盐度、pH、氨氮和亚硝酸盐氮对波纹龙虾胚胎存活的影响尚未见有相关报道。波纹龙虾繁殖时胚胎在母体的腹肢刚毛上黏附发育，发育时间长达20～24 d[6]。在胚胎发育过程中，容易受到细菌、真菌和原生动物等病原体的侵害，引起部分的胚胎黏污，抵抗力下降甚至死亡等现象发生。温度对甲壳类胚胎的影响主要表现为影响胚胎的发育速度、胚胎的孵化和导致胚胎畸形等，如水温对中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）的影响表现为在适宜的温度范围内，温度越高卵裂越快，但同步率越低[7]；盐度会影响甲壳类胚胎的孵化率、孵化时间等，如在凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）胚胎孵化中，盐度由33升至36时孵化率由74.67%降到50.79%[8]；pH会影响甲壳类胚胎存活和孵化时间，如在不适的pH条件下，锯缘青蟹（Scylla serrata）胚胎的孵化率降低，畸形率升高[9]。而氨氮和亚硝酸盐氮在水中不断积累，会使水体不断恶化，影响养殖生物生长发育、呼吸代谢，使生物免疫力下降、生理功能紊乱、组织器官受损，甚至引起养殖生物大量死亡。本研究通过探讨波纹龙虾胚胎对温度、盐度、pH、氨氮和亚硝酸盐氮五种生态因子的耐受能力，以期为人工繁育提供理论依据，并为龙虾胚胎发育的进一步研究奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1实验龙虾胚胎 本实验采用的波纹龙虾抱卵亲虾购自湛江市霞山区水产品批发市场，暂养于广东海洋大学东海岛基地室内1 m3的塑料圆桶中，桶内设置人工掩体，桶表面覆盖黑色遮阳膜。于温度（30±0.5） ℃，盐度30，pH（8.10±0.1）和溶解氧（DO）为（5.0±0.5）mg/L条件下暂养3 d后，待抱卵亲虾稳定，对波纹龙虾胚胎进行离体手术，用20 mL/m3甲醛溶液消毒20 s。通过光学显微镜下观察，选择表面洁净光滑不黏污，附肢清晰的胚胎进行实验。

1.1.2实验用水准备 实验用水为自然海区海水，温度为（30±0.5） ℃，盐度为30，pH为（8.10±0.1），DO为（5.0±0.5）mg/L。经过沉淀、砂滤和孔径5 μm过滤袋过滤，用20 mL/m3甲醛溶液消毒24 h后充分曝气。

温度、盐度和pH骤变适应性实验分别根据实验要求调节实验用海水。温度设置5个梯度，分别为15、20、25、30（对照组）和35 ℃，用水浴锅增温和冰块降温方法调节，实验开始前连续监测以保证水温在实验过程中的波动小于0.5 ℃。盐度设置8个梯度：10、15、20、25、30（对照组）、35、40和45，用人工速溶海水晶和经20 mL/m3甲醛消毒曝气的淡水进行调节。pH设置8个梯度：6.0、6.5、7.0、7.5、8.0（对照组）、8.5、9.0和9.5，用HCl或NaOH进行调节。

1.1.3实验药品 实验用氯化铵和亚硝酸钠均为分析纯试剂（广州化学试剂厂），实验前先用蒸馏水配制成母液，再根据实验具体要求配制成不同浓度的溶液。

1.2 方法

1.2.1温度、盐度和pH骤然变化实验 骤变实验即将自然海区条件（温度30 ℃，盐度30，pH 8.0，作为对照组）下的胚胎分别放置于温度、盐度和pH的实验梯度溶液中，其瞬间变化幅度大。实验采用封闭静水的方法，将配制好实验条件的溶液注满体积为1 L的一次性塑料餐盒，放置30粒复眼色素形成期胚胎后密封。每12 h及时清除死卵及更换一次溶液，以保持溶解氧在5 mg/L以上，同时能保证这3种生态因子维持在实验要求梯度。设定12、24、48、72 h 这4个观察时间点，观察统计存活胚胎数量，求出各个时间点胚胎的存活率。每组实验设置3个平行组。

1.2.2温度、盐度和pH逐渐变化实验 渐变实验即以自然海区条件为起始梯度（温度30 ℃，盐度30，pH 8.0，作为对照组），将温度渐变实验的溶液每24 h升高或降低1 ℃，盐度渐变实验按照盐度每24 h升高或降低2，pH渐变实验按照pH值每24 h升高或降低2，以此速度使胚胎逐渐过渡适应。实验以30粒膜内无节幼体期胚胎为材料，每24 h观察统计胚胎死亡情况，及时清除死卵并换水。实验设置3个平行组。

1.2.3氨氮和亚硝酸盐氮毒性预实验 按照毒理学实验方法，分别确定氨氮和亚硝酸盐氮96 h胚胎100%死亡的浓度和100 %存活的浓度，再设置不同的浓度梯度正式实验。

1.2.4氨氮毒性实验 实验采用封闭静水的方法，根据预实验结果，总氨氮含量按照等对数间距设置10.00、14.95、22.36、33.44和50.00 mg/L 5个梯度及空白对照组。将配制好的溶液注入1 L容器之后放置30粒复眼色素形成期胚胎。设定24、48、72和96 h 这4个观察时间点，每24 h更换一次溶液，并观察记录胚胎存活数量，及时去除死亡胚胎。实验设置3个平行组。

1.2.5亚硝酸盐氮毒性实验 实验方法参照1.2.4，根据预实验结果，总亚硝酸盐氮含量按照等对数间距设置30.00、44.86、67.08、100.31和150.00 mg/L 5个梯度及空白对照组。

1.2.6死亡胚胎鉴定方法 在光学显微镜下，卵膜边缘清晰、无附着物、复眼色素正常、心脏跳动正常者为存活的胚胎；卵膜有较多杂物或不完整，复眼色素暗淡，不明亮，卵子混浊、扁塌，心脏停止跳动者则确认是死亡胚胎。

1.2.7数据收集及处理 统计各个实验组胚胎的存活数目，按照下列公式计算实验组波纹龙虾胚胎的存活率。

式中Nt为胚胎在设定时间点时的存活数量（粒），N0为起始胚胎数量（粒）。

氨氮和亚硝酸盐氮毒性实验中对照组的波纹龙虾胚胎若有死亡，则按Abbott公式死亡率校正：

式中，P为校正后死亡百分数，P1为观察死亡百分数，C为对照组死亡百分数。

胚胎死亡率由平均数±标准差（Mean±SD）表示。

经过Excel软件操作和数据处理后，即可得到相应关系趋势图。生成死亡率与药物浓度的回归方程和置信区间，求出24、48、72和96 h的半致死浓度（LC50）和安全浓度（SC）。安全浓度为 0.1 × 96 h时LC50。

采用 SPSS 23.0进行方差分析(One-way ANOVA) 检验其差异显著性；用LSR法的新复极差检验（SSR检验）法（Duncan）进行组间多重比较；α设为0.05。

2 结果

2.1 温度变化对波纹龙虾胚胎存活率的影响

2.1.1温度骤然变化对波纹龙虾胚胎存活率的影响 波纹龙虾胚胎在盐度30、pH 8.0、不同温度条件下存活率如图1所示。暴露12 h，各组胚胎存活率均在98%以上。暴露24 h和48 h，除35 ℃下存活率下降至54.44%和26.67%，其余温度组存活率始终高于93%，35 ℃温度组与其余温度组之间存在显著差异（P＜ 0.05）。暴露72 h，15～25 ℃时存活率均在87%以上，无显著差异（P＞ 0.05），其中20 ℃下胚胎存活率最高（SR=94.44%）；30 ℃时存活率为84.44%，与20 ℃下有显著差异（P＜ 0.05），与15 ℃和25 ℃组无显著差异（P＞ 0.05）；35 ℃下存活率为5.56%，与其他各组差异显著（P＜ 0.05）。

图1 温度骤然变化对波纹龙虾胚胎存活率的影响Fig.1 Effect of abrupt temperature change on embryonic survival ratio of Panulirus homarus

2.1.2温度逐渐变化对波纹龙虾胚胎存活率的影响 波纹龙虾胚胎在盐度30、pH 8.0条件下，随着温度的升高和下降，胚胎存活率呈缓慢下降的趋势（表1、2）。升至35 ℃时，胚胎平均存活率为76.67%，当温度升至36 ℃时胚胎全部死亡，胚胎卵膜发白，原生质体收缩，卵子混浊。当温度降至7 ℃时，虽仍有少量胚胎存活，但3个平行组平均存活率低于10%，即认定7 ℃为波纹龙虾胚胎的存活最低临界温度。

表1 升温渐变对波纹龙虾胚胎存活率的影响Table 1 Effect of increasing temperature gradually on embryonic survival ratio of Panulirus homarus

表2 降温渐变对波纹龙虾胚胎存活率的影响Table 2 Effect of decreasing temperature gradually on embryonic survival ratio of Panulirus homarus

2.2 盐度变化对波纹龙虾胚胎存活率的影响

2.2.1盐度骤然变化对波纹龙虾胚胎存活率的影响 波纹龙虾胚胎在温度30 ℃、pH 8.0、不同盐度条件下存活率如图2所示。暴露12 h，盐度为10的存活率最低（SR=85.56%），与其他各组差异显著（P＞ 0.05）。暴露24 h，盐度25～45 胚胎存活率仍在98%以上，与盐度10、15、20组之间有显著性差异（P＜ 0.05），在盐度10～20范围内胚胎存活率随盐度下降而降低。暴露48 h，胚胎存活率随盐度增加呈现出先上升后下降的趋势，其中盐度30～40之间没有显著性差异（P＞ 0.05），盐度30组的胚胎存活率最高（SR=94.44%），盐度10下存 活率最低（SR=40.00%）。暴露72 h，胚胎存活率仍是随盐度增加呈现出先上升后下降的趋势，盐度30时的存活率最高（SR=87.78%），盐度10时的 存活率最低（SR=11.11%），盐度15和45次之，分别是26.67%和27.78%。

图2 盐度骤然变化对波纹龙虾胚胎存活率的影响Fig.2 Effect of abrupt Salinity change on embryonic survival ratio of Panulirus homarus

波纹龙虾胚胎在盐度30～35暴露12～72 h，两者存活率没有显著性差异（P＞ 0.05），而且存活率较高。

2.2.2盐度逐渐变化对波纹龙虾胚胎存活率的影响 波纹龙虾胚胎在温度30 ℃、pH 8.0条件下，渐变升高盐度组和降低盐度组的胚胎存活率结果如表3、4所示，均为缓慢下降趋势。当盐度升至44时，胚胎存活率为11.11%。盐度升至45时虽有少量胚胎存活，但3个平行组平均存活率低于10%，即认定盐度45为波纹龙虾存活最高临界盐度。渐变降低盐度组在16时，胚胎存活率为11.11%，当盐度降至15，胚胎全部死亡。

表3 高盐度渐变对波纹龙虾胚胎存活率的影响Table 3 Effect of increasing salinity gradually on embryonic survival ratio of Panulirus homarus

表4 低盐度渐变对波纹龙虾胚胎存活率的影响Table 4 Effect of decreasing salinity gradually on embryonic survival ratio of Panulirus homarus

2.3 pH变化对波纹龙虾胚胎存活率的影响

2.3.1pH骤然变化对波纹龙虾胚胎存活率的影响 波纹龙虾胚胎在温度30 ℃、盐度30、不同pH条件下存活率如图3所示。波纹龙虾胚胎在各梯度溶液中暴露12～72 h，在pH 6.0～9.5范围内，其存活率随pH值的升高呈现先上升后下降的趋势，其中pH 8.0的存活率最高，随着暴露时间越长，趋势越明显。暴露12 h，pH 6.5～9.0时存活率较高（SR ＞ 96%），组间差异不显著（P＞ 0.05），与pH 6.0和9.0时有显著差异（P＜ 0.05）。暴露24 h，pH在6.5～8.5组间存活率差异不显著（P＞ 0.05），与pH 6.0、9.0、9.5组间的差异显著（P＜ 0.05）。暴露48 h，pH 7.0～8.5组间存活率差异不显著（P＞ 0.05），与其余各组间差异显著（P＜ 0.05），pH 9.5存活率最低（SR=45.56%）。暴露72 h，pH 7.0～8.5组间差异不显著（P＞ 0.05），其中pH 8.0存活率最高（SR=93.33%），pH 6.0存活率最低（SR=36.67%）与pH 9.5（SR=41.11%）组间差异不显著（P＞ 0.05）。

图3 pH骤然变化对波纹龙虾胚胎存活率的影响Fig.3 Effect of abrupt pH change on embryonic survival ratio of Panulirus homarus

2.3.2pH逐渐变化对波纹龙虾胚胎存活率的影响 pH逐渐变化对波纹龙虾胚胎存活率的影响如表4、5所示。波纹龙虾胚胎在温度30 ℃、盐度30条件下，渐变升高pH组在pH 8.0～8.8范围内，胚胎存活率缓慢下降。当pH＞8.8时，胚胎存活率下降趋势加快，pH升至9.4时胚胎全部死亡。渐变降低pH组随着pH的降低，胚胎存活率缓慢下降，当pH低于7.0时，胚胎存活率下降趋势加快，pH降至5.8时虽有少量胚胎仍存活，但3个平行组平均存活率低于10%，即认定pH 5.8为波纹龙虾存活最低临界pH。

表5 高pH渐变对波纹龙虾胚胎存活率的影响Table 5 Effect of increasing pH gradually on embryonic survival ratio of Panulirus homarus

表6 低pH渐变对波纹龙虾胚胎存活率的影响Table 6 Effect of decreasing pH gradually on embryonic survival rate of Panulirus homarus

2.4 氨氮对波纹龙虾胚胎的毒性影响

波纹龙虾胚胎在不同氨氮浓度溶液中暴露96 h的致死情况如表7所示，胚胎死亡率随浓度的升高和暴露在药物中时间的增加而增加。由表7所见，24 h时各浓度组的死亡率没有显著差异（P＞ 0.05）。48 h时，氨氮质量浓度≥33.44 mg/L时死亡率与对照组差异显著（P＜ 0.05），但≤22.36 mg/L时死亡率与对照组差异不显著（P ＞0.05）。72 h时，氨氮质量浓度为10 mg/L时死亡率与对照组差异不显著（P＞ 0.05），但14.95 mg/L及以上死亡率与对照组差异显著（P＜ 0.05）。96 h时，氨氮实验组死亡率显著高于对照组（P＜ 0.05）。

根据表7数据，进行回归分析计算，得到氨氮对波纹龙虾胚胎的LC50与SC如表8所示。氨氮对波纹龙虾的24、48、72和96 h LC50分别为180.46、61.11、41.87、26.58 mg/L，SC为2.66 mg/L。

表7 氨氮对波纹龙虾胚胎的致死情况Table 7 Lethal effect of ammonia nitrogen on embryo of Panulirus homarus

表8 氨氮对波纹龙虾胚胎的半致死浓度和安全浓度Table 8 Half lethal concentration and safe concentration of ammonia nitrogen to embryo of Panulirus homarus

2.5 亚硝酸盐氮对波纹龙虾胚胎的毒性影响

波纹龙虾胚胎在不同亚硝酸盐氮浓度溶液中暴露96 h的致死情况如表9所示。

胚胎死亡率随浓度的升高和暴露在药物中时间的增加而增加。24 h和48 h时，亚硝酸盐氮质量浓度≥100.31 mg/L时死亡率与对照组差异显著（P＜ 0.05），但≤67.08 mg/L时死亡率与对照组差异不显著（P＞ 0.05）。72 h和96 h时，亚硝酸盐氮质量浓度≥44.86 mg/L及以上死亡率与对照组差异显著（P＜ 0.05），但30 mg/L死亡率与对照组差异不显著（P＞ 0.05）

表9 亚硝酸盐氮对波纹龙虾胚胎的致死情况Table 9 The lethal effect of nitrite nitrogen on embryo of Panulirus homarus

根据表9数据，进行回归分析计算，得到亚硝酸盐氮对波纹龙虾胚胎的LC50与SC如表10所示。亚硝酸盐氮对波纹龙虾的24、48、72和96 h 的LC50分别为839.50、423.75、214.48和135.41 mg/L，SC为13.54 mg/L。

表10 亚硝酸盐氮对波纹龙虾胚胎的半致死和安全浓度Table 10 Half lethal concentration and safe concentration of nitrite nitrogen to embryo of Panulirus homarus

3 讨论

3.1 温度变化对波纹龙虾胚胎的影响

波纹龙虾分布范围较广，对温度的耐受范围较大。在盐度30、pH 8.0条件下对波纹龙虾胚胎进行温度逐渐变化实验所得结果显示，波纹龙虾胚胎的耐受范围为7～36 ℃，属于典型热带和亚热带种类，与波纹龙虾分布范围较广的事实相符合。黄东科等[10]在温度对波纹龙虾的存活、摄食影响实验中得出，波纹龙虾的生存温度范围为13～36 ℃，与本实验结果相似。本实验基于胚胎的温度耐受范围设置温度梯度，温度骤然变化实验数据显示，在盐度30、pH 8.0条件下波纹龙虾胚胎在20 ℃的存活率最高，但与同期处于相对较高温度条件下的胚胎相比，其发育较为缓慢；25和30 ℃的波纹龙虾胚胎存活率始终高于80%，并且发育较快；35 ℃的胚胎发育畸形现象较多，死亡率也较高。升温组存活率始终低于降温组，表明波纹龙虾胚胎对高温突变的耐受性较差。当水温超过适宜范围时，孵化率下降且畸形率明显升高，即在适宜范围内，随着水温的升高，胚胎的发育速度加快，但进一步提高温度会引起胚胎畸形，产生败育[11]；温度低于适宜范围，胚胎发育速度减慢甚至会停止发育和死亡。宋盛宪等[12]以野生捕获的日本囊对虾（Marsupenaeus japonicus）为材料，观察胚胎发育过程，结果得到32和20 ℃分别为孵化时的温度上限和温度下限，在适宜温度范围内，水温与孵化时间呈负相关，与本实验研究结果相似。因此可以初步推测波纹龙虾胚胎适宜温度为15～30 ℃。

3.2 盐度变化对波纹龙虾胚胎的影响

甲壳类动物受盐度的影响主要体现在盐度影响甲壳类动物机体的渗透压。在不同的盐度环境条件下，虾蟹类动物通过调节自身代谢状况从而适应环境。当胚胎处于非等渗的溶液中，为调节胚胎与环境的渗透压平衡，会消耗胚胎的能量以维持渗透压的平衡，并随着处于这种状态的时间的延长，盐度对胚胎的影响越来越显著。在温度30 ℃、pH 8.0条件下对波纹龙虾胚胎进行盐度的逐渐变化实验，得出波纹龙虾胚胎的盐度耐受范围为15～45。黄东科等[13]研究表明，波纹龙虾的盐度耐受范围为9～45，与本实验研究结果相似，说明波纹龙虾胚胎耐受盐度变化的能力与成虾相似。在温度30 ℃、pH 8.0条件下进行波纹龙虾胚胎的盐度骤然变化实验，结果显示，24 h前，随着时间的推移，降低盐度组的胚胎存活率有明显地下降趋势，而升高盐度组均没有胚胎死亡的现象，说明短时间内，波纹龙虾胚胎对低盐度的适应能力较差。暴露72 h时，以盐度30为对照组，盐度每升高或降低5，升高盐度组和降低盐度组的存活率组间无显著差异，说明随着暴露时间的延长，波纹龙虾胚胎对升高和降低盐度的适应性基本相同，这是由于波纹龙虾属于广盐性动物。在盐度30和35的实验溶液中暴露72 h后，其存活率保持在78%以上，且没有显著差异。Dilip等[14]研究发现，波纹龙虾早期叶状幼体最适盐度范围为31～33，与本实验结果相似。因此可以初步推测波纹龙虾胚胎的适宜盐度范围为30～35。

3.3 pH变化对波纹龙虾胚胎的影响

在胚胎孵化过程中，由于卵膜具有调节能力，pH在胚胎适宜范围内变化不会影响胚胎的发育，但这种变化一旦超出胚胎承受范围，影响胚胎内环境的平衡，就会对胚胎发育产生很大的影响[15]。孵化水体pH过低容易使受精卵卵膜软化，失去弹性，胚胎破膜死亡；而pH过高，卵膜会提早溶解，也会使胚胎死亡。丁宏印等[16]在pH对锯缘青蟹胚胎发育的影响研究中，得出锯缘青蟹胚胎的发育适宜pH为7.0～9.0，最适pH为7.8～8.2，且pH值对胚胎的存活率、畸形率、孵化率均有显著的影响。梁华芳等[17]研究四种生态因子对锦绣龙虾（Panulirus ornatus）胚胎发育的影响，结果表明，锦绣龙虾胚胎发育适宜的pH为8.1～8.4，pH在＜7.5和＞8.7时受精卵极易出现畸形。波纹龙虾胚胎在温度30 ℃、盐度30条件下进行pH的逐渐变化实验，结果显示，波纹龙虾胚胎的pH耐受范围为5.8～9.4，虽然胚胎耐受范围广，但是在pH过高的溶液中，胚胎卵膜会逐渐发白或变黄；pH过低的溶液中，胚胎卵膜会逐渐变黑；pH高于8.8或低于7.0时胚胎的存活率会大幅下降，因此，要控制养殖水体的pH避免超过7.0～8.8的范围。在pH骤然变化实验中，胚胎存活率呈现中间高，两边低的趋势，其中胚胎在pH 8.0存活率最高。胚胎在溶液中暴露24 h，其存活率在pH 6.0、6.5、9.0、9.5有显著下降，存在胚胎发育畸形、卵膜出现孔洞等现象导致胚胎的死亡，表明胚胎对pH的大幅变化适应能力较差，而在pH 7.0～8.5范围内暴露了72 h，其存活率较高且没有显著性差异，表明pH 7.0～8.5为波纹龙虾胚胎的承受范围，在此范围内pH的变化对胚胎发育的影响较小。

3.4 氨氮和亚硝酸盐氮对波纹龙虾胚胎的影响

在封闭的高密度养殖系统中，氨氮和亚硝酸盐氮是引起暴发性疾病的主要环境因子。在养殖过程中，随着养殖时间的增加，养殖水体中氨氮或亚硝酸盐氮会逐渐积累，当其浓度达到养殖生物难以适应的值时，养殖生物的免疫系统会受到抑制，免疫功能下降，还会引起肝胰脏组织病变，诱发多种疾病。何碧华[18]对三疣梭子蟹（Portunus trituberculatus）胚胎的研究结果表明，当氨氮质量浓度高于3.125 mg/L时胚胎的存活率明显下降，在氨氮质量浓度高于6.25 mg/L时胚胎不能孵化出溞状幼体。当亚硝酸盐氮质量浓度高于6.25 mg/L 时，胚胎不能正常孵化；当亚硝酸盐氮质量浓度在 0～6.25 mg/L 时，随着亚硝酸盐氮浓度的升高，胚胎发育速度减慢，孵化所需要的时间延长。波纹龙虾胚胎在氨氮组和亚硝酸盐氮组随着暴露时间延长，半致死浓度均有所变化，从24 h到96 h，氨氮组的半致死浓度从180.46降至26.58 mg/L；亚硝酸盐组的半致死浓度从839.50降至135.41 mg/L。而在相同时间内，波纹龙虾胚胎在氨氮组和亚硝酸盐氮组随着浓度的提升，其死亡率上升。说明波纹龙虾胚胎死亡率与氨氮和亚硝酸盐氮的胁迫时间及浓度成正相关关系，与脊尾白虾（Exopalaemon carinicauda）[19]、日本囊对虾幼体[20]、红螯螯虾（Cherax quadricarinatus）[21]、拟穴青蟹（Scylla paramamosain）[22]的毒性实验结果相似。亚硝酸盐氮组波纹龙虾胚胎的安全浓度（13.54 mg/L）比氨氮组的胚胎安全浓度（2.66 mg/L）高，与王煜恒 等[23]对中华绒螯蟹、刘慧玲等[24]对墨吉明对虾（Fenneropenaeus merguiensis）的研究结果相似，说明氨氮对波纹龙虾胚胎的急性毒性强于亚硝酸盐氮。这也是养殖生产中影响波纹龙虾胚胎存活率的关键因素之一。所以，在养殖过程中要注意监控氨氮的变化，提高池塘的溶解氧，减少残饵和其他代谢产物的富集，避免出现氨氮中毒等症状。

4 结论

波纹龙虾胚胎发育的温度、盐度和pH耐受范围分别为7～36 ℃、15～45和5.8～9.4；波纹龙虾胚胎适宜温度为15～30 ℃，适宜盐度为30～35，适宜pH为7.0～8.5。氨氮对波纹龙虾胚胎24、48、72和96 h的半致死浓度分别是180.46、61.11、41.87、26.58 mg/L，安全浓度为2.66 mg/L；亚硝酸盐氮对波纹龙虾胚胎24、48、72和96 h的LC50分别是839.50、423.75、214.48、135.41 mg/L，SC为13.54 mg/L。波纹龙虾胚胎死亡率与氨氮和亚硝酸盐氮的胁迫时间及浓度成正相关关系，且氨氮对波纹龙虾胚胎的急性毒性强于亚硝酸盐氮。