EBV及HCMV活动性感染与自然流产的关系探讨

徐双，李荣，冯君阳

（南阳医学高等专科学校第一附属医院妇科，河南 南阳 473000）

自然流产(spontaneous abortion)是指妊娠期在28周及以下、由人为因素造成的自然妊娠终止，其中超过80%的自然流产发生在妊娠期12周之前，且多与胚胎染色体异常有关[1-2]。造成自然流产的原因包括夫妻双方染色体异常、孕妇内分泌失调、母体生殖道异常或病原体感染等,其中人巨细胞病毒(Human cytomegalorirus，HCMV)是孕妇及胎儿宫内感染的常见病毒类型,对孕妇及孕早期胎儿的危

害较大。此外还有EB病毒（Epstein-Barr virus，EBV）等传染性病毒，可进入血液循环通过感染B淋巴细胞造成全身性感染,并长期潜伏在人体淋巴组织中[3-4]。临床研究发现,自然流产孕妇体内HCMV、EBV感染率要高于正常孕妇，但HCMV、EBV引发宫内感染甚至自然流产的生物机制和尚不清楚，仍需做进一步探究[5]。基于此，本实验选取120例自然流产孕妇，通过分析孕妇体内的HCMV、EBV病毒水平分析其与自然流程的关系，为临床预防自然流产提供更多理论依据。报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取我院2017年2月至2019年12月收治的120例自然流产孕妇作为观察组研究对象，另选取100例同期体检正常孕妇作为对照组。纳入标准：⑴所有孕妇均经本院检查，检查结果符合《妇产科学》相关诊断标准[6]；⑵所有孕妇均无生殖器结构、染色体异常情况；⑶内分泌科检查指标正常，无内分泌相关疾病。排除标准:⑴因遗传、内分泌等因素导致的自然流产；⑵同时合并有恶性肿瘤疾病；⑶近期内使用过致使胚胎异常药物。观察组患者年龄23～36(27.24±3.23)岁，孕周10～24(16.45±3.58)周。对照组年龄22～34(26.85±3.37)岁，孕周10～25(16.76±3.62)周。两组实验的年龄、孕周等一般资料差异无统计学意义，具有可比性(P＞0.05)。本实验已征得本院医学伦理会批准同意，所有实验对象及其家属均对本实验目的及相关内容知情同意，并自愿签署知情同意书。

1.2 方法 两组实验对象在清晨空腹状态下抽取6 ml静脉血，均分为三份，一份静脉血内加溶血试剂提取HCMV-DNA：溶血试剂破坏全血内的红细胞后，采用PCR-荧光法提取全血DNA，经过聚合酶链式反应获取HCMV-DNA检测值，检测过程严格按照核酸检测试剂盒（苏州华益美生物科技有限公司，国械注准20163400039）说明书进行。一份静脉血采用2000 r/min离心处理15 min，取上清液待用：采用EB病毒(EBV)核酸试剂盒（武汉明德生物科技股份有限公司，国械注准20183400411）检测人外周血中NA-IgG、EA-IgM、VCA-IgM、VCAIgG。病毒感染阳性及阴性：标本所检测指标水平与临界质控物OD值之比超过1.2则为阳性，低于0.8则为阴性。EA-IgM、VCA-IgM诊断阳性表示为急性、重复性EBV感染，高亲和力VCA-IgG诊断阳性表示为近期EBV感染，NA-IgG诊断阳性表示为既往感染；检测cMV-IgM阳性水平，cMV-IgM诊断阳性表示为HCMV活动性感染，反之，诊断阴性则表示为HCMV非活动性感染[7-8]。一份静脉血采用2000 r/min离心处理15 min取上清液，采用试剂盒（北京热景生物技术有限公司，京食药监械准字20142400877，规格40T/盒）以ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、白介素-1(interleukin-1,IL-1)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的表达水平，的说明书进行，本研究所采用IL-1、IL-6、IFN的ELISA检测试剂盒均购自美国Genzyme公司[9]。

1.3 观察组指标 检测两组实验对象的EBV核心抗 原（NA-IgG）、早 期 抗 原（EA-IgM）、衣 壳 抗 原(VCA-IgM)、衣壳抗体（VCA-IgG）、HCMV的DNA(HCMV-DNA)、IgM抗体(cMV-IgM)，并分析两者肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)等炎性细胞因子水平差异，比较病毒感染因子与炎症水平的相关性。

1.4 统计学处理 采用SPSS 22.0软件进行统计分析。计量资料以（±s）描述，组间比较采用独立样本t检验；计数资料以n(%)描述，组间比较采用χ2检验；相关性采用Spearman相关分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组实验对象EBV及HCMV活动性感染水平对比 两组实验对象的NA-IgG、VCA-IgG阳性率无显著差别，差异无统计学意义(P＞0.05)。观察组患 者 的EA-IgM、VCA-IgM、HCMV-DNA、cMVIgM阳性检出率显著高于对照组，二者比较差异有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1 两组实验对象EBV及HCMV活动性感染水平对比[n（%）]

2.2 两组实验对象炎性细胞因子水平对比 观察组患者的TNF-α、IL-1、IL-6水平显著高于对照组，二者比较差异有统计学意义(P＜0.05)。见表2。

表2 两组实验对象炎性细胞因子水平对比（±s）

表2 两组实验对象炎性细胞因子水平对比（±s）

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2.3 EBV、HCMV活动性感染水平与炎性因子相关性 Spearman相关分析显示，EA-IgM、VCA-IgM、HCMV-DNA、cMV-IgM阳性与TNF-α、IL-1、IL-6水平均呈显著正相关（P＜0.01）。见表3。

表3 EBV、HCMV活动性感染水平与炎性因子相关性

3 讨论

由非人为目的造成发生的自然流产在所有临床确认的妊娠中发生率为15%左右，发生原因包括胚胎染色体异常、内体内分泌失调、母体生殖道病菌感染等，孕妇主要表现为孕后阴道出血、明显腹痛等[10-11]。自然流产后孕妇病菌感染的几率增加，更加容易出现大出血等不良情况，严重者甚至引发急性肾功衰竭等。因此，探究自然流产的影响因素和发生机制，并进行针对性的预防和术后救治措施显得尤为重要。

本实验通过分析EBV、HCMV病毒感染，进而探究EBV、HCMV对自然流产的作用机制。EBV基因组为DNA，属疱疹病毒科嗜淋巴细胞病毒，可通过唾液传播等方式体内外专一性地感染人类B细胞，干扰机体内淋巴细胞免疫和体液免疫机制，同时抑制淋巴细胞因子活性[12-13]。EBV感染表现为增殖性感染和潜伏性感染两种，不同感染状态表达不同的抗体，增殖性感染期表达EA-IgM和VCAIgM抗体，潜伏感染期表达NA-IgG和VCA-IgG抗体。

本实验选取自然流产孕妇和体检正常孕妇进行对比试验，结果发现，两组实验对象的NA-IgG、VCA-IgG阳性率无显著差异。究其原因，EBV是传染性单核细胞增多症的病原体，无症状感染多发生在幼儿，90%以上的幼儿都曾感染EB病毒，至成人群体大约90%以上都具有病毒抗体，主要针对VCA、EA、NA等病毒。机体感染EBV病毒后先出现VCA-IgM抗体，相应病毒类型在胎盘外表达，3周左右VCA-IgM水平会达到高峰，在病毒消除后短时间内又快速下降。观察组和对照组出现NA-IgG、VCA-IgG抗体的例数较多，表示两组孕妇大部分都是既往感染病毒者，体内仍存留相应抗体，在实验期间机体再次激活既往EBV感染抗体。此外，观察组孕妇EA-IgM、VCA-IgM检出阳性率显著高于对照组，表明自然流产孕妇急性病毒感染和重复病毒感染率显著高于体检正常孕妇，EBV在口咽部上皮细胞内增殖并感染B淋巴细胞，提高细胞屏障通透性，使感染性细胞大量进入血液循环导致孕妇全身性感染[14]。

HCMV属B疱疹病毒科，主要以人类为感染宿主，通过感染人体白细胞、唾液腺遗留建立潜伏性感染，对胎儿、幼儿、器官移植等自身免疫功能较薄弱的造成严重损伤，同时还可引发人体多种疾病[15-16]。大部分HCMV感染者都无感染症状，但孕妇在妊娠期内的免疫功能处于抑制状态，HCMV可通过感染血管内皮细胞和白细胞、辅助型T细胞2型(Th2)诱发激活病毒基因转录，提高潜伏HCMV病毒基因表达水平，进而促进分泌一系列损伤细胞组织和免疫功能的细胞因子。在本实验中，观察组TNF-α、IL-1、IL-6水平显著高于对照组，表明自然流产孕妇机体内的炎症水平显著高于体检正常孕妇。

TNF-α是一种能使多种肿瘤发生出血性坏死的物质，在体内体外均能杀死或抑制某些肿瘤细胞增殖。目前，TNF-α杀死某些肿瘤细胞的具体机制尚不清楚，但该物质可作用于血管内皮导致血管损伤或形成血栓，调节机体内免疫功能，加大刺激T淋巴细胞活跃度，进而杀伤肿瘤细胞。此外，临床研究已经证实，TNF-β是EB病毒转化淋巴母细胞的自分泌生长因子，TNF-α、TNF-β可起到抑制EB病毒转化淋巴细胞增殖的作用。IL-1属趋化因子家族，是指由多种细胞产生同时作用于对细胞的一类细胞亲自，产生于白细胞又作用于白细胞。IL-1是淋巴细胞刺激因子，在局部状态下与病原体抗原协同活化CD4+T细胞，促进机体形成抗体。IL-6是一种作用于多种细胞、可抑制病毒复制的细胞因子产生于单核巨噬细胞、Th2细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞等，可在白细胞间与血细胞生长因子相互协调、相互作用共同调节机体免疫功能，介导T、B淋巴细胞的活化、增殖与分化[17-18]。为分析EBV、HCMV对TNF-α等炎性因子的影响机制，本实验对EBV、HCMV病毒感染水平与炎性因子进行相关性分析。结果发现，EAIgM、VCA-IgM、HCMV-DNA、cMV-IgM诊断阳性与TNF-α、IL-1、IL-6水平均呈显著正相关。这表明，EBV、HCMV可能在侵入孕妇机体后，通过破坏血管表皮细胞、巨噬细胞等使之产生免疫应答，导致机体局部大量分泌各种炎性因子参与到病毒侵入感染过程中，最终破坏正常免疫功能。

综上所述，TNF-α、IL-1、IL-6是孕妇机体内EBV、HCMV病毒感染的关键作用因子，在抗原刺激作用下大量分泌的炎性因子在不同程度上破坏患者的免疫应答过程，导致孕妇出现宫内感染等症状，最终导致孕妇免疫力低下，造成自然流产。