miR-588表达水平与乳腺癌化疗疗效的关联研究

朱晓静，栾文强，董利，王聪

（濮阳市人民医院肿瘤一科，河南 濮阳 457000）

乳腺癌是常见的女性恶性肿瘤，是威胁女性健康的重大疾病之一。化疗是乳腺癌常见的治疗方式，提高乳腺癌化疗疗效一直是临床治疗的重点和难点[1]。MicroRNA(miRNA)通过碱基与mRNA特异性结合，调节mRNA的降解以及蛋白质的表达[2]，更重要的是对致癌基因、抑癌基因也具有一定联系，同时miRNA的表达水平对化疗药物的敏感度也有一定影响[3-4]。microRNA-588(miR-588)是乳腺癌相关的miRNA，但是临床中关于miR-588水平与乳腺癌化疗疗效的研究较少。本研究对126例乳腺癌患者的疗效以及miR-588表达水平进行比较分析，了解miR-588对化疗疗效的影响，以为临床提供参考。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选取2019年3月至2021年1月在本院接受乳腺癌化疗患者126例，根据患者的疗效分为两组，显效组（87例）和无效组（39例）。收集两组患者临床就诊资料，进行回顾性分析。

1.2 纳入和排除标准 纳入标准：⑴患者为首次接受乳腺癌化疗治疗；⑵患者乳腺癌病理分期为Ⅰ～Ⅲ期；⑶患者或其家属对此次研究的内容和方法知情，并已签署知情同意书。

排除标准：⑴患者合并有其他恶性肿瘤；⑵患者合并有免疫系统疾病；⑶患者患有严重凝血疾病、神经系统或其他重要器官衰竭症。

1.3 方法

1.3.1 根据所有患者的就诊记录，统计等级其年龄、身体质量指数（Body mass index，BMI）、肿瘤直径、肿瘤类型、临床病理分期，有无吸烟、饮酒史、化疗方案。

1.3.2 分组标准 所有患者化疗结束后，根据实体瘤疗效评价标准 （Response Evaluation Criteria in Solid Tumors，RECIST）[5]对两组患者的近期疗效进行评估。完全缓解（Complete remission,CR）：肿瘤体积肉眼完全消失持续1个月以上；部分缓解（Partial response,PR）：肿瘤大直径*最大垂直直径减小50%以上,且无新发病灶,持续至少1个月；肿瘤稳定（Stable disease,SD）：病灶最大双径乘积增大范围小于25%，同时减小不超过50%，,无新发病灶,持续至少1个月；肿瘤进展（Progression disease,PD）：病灶最大双径乘积增大超过25%，并伴随新病灶出现。CR、PR纳入显效组，SD、PD纳入无效组。

1.3.3 miR-588表达检测：取患者乳腺癌组织以及距离肿瘤边缘5 cm的正常组织，采用RNA提取试剂盒（苏州阿尔法生物实验器材有限公司）、反转录试剂盒（上海翊圣生物科技有限公司）进行总RNA提取、逆转录合成cDNA后，在荧光定量仪中进行实时荧光定量PCR （Quantitative Real-time PCR）扩增。扩增条件：95℃预变性3min，95℃变性12 s、62℃退火40 s，共进行40个循环，最后表达量采用2-△△Ct法进行检测，内参照为U6。miR-588正向引物：CGTAGCTTCAGCTAGCCTC；反向引物：CCTTCATCACGCAGCGCA。U6正向引物：GGCATCGATCAGCTAGC；反向引物：TCGATCGGATCAGTAAGTTAGC。

1.3.4 血清指标检测 抽取患者外周静脉血5.0 ml,，经离心、抽取上层清液、冷置于后采用全自动生化分析仪检测其半乳糖凝集素-9（Galectin,Gal-9）、肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor,TNF-ɑ）血清浓度，分别采用卡迈舒(上海)生物科技有限公司Gal-9检测（双抗体夹心ABC-ELISA）试剂盒、武汉菲恩生物科技有限公司TNF-ɑ检测（ELISA)试剂盒。

1.4 统计学分析 采用SPSS20.0软件处理数据。计数资料以n（%）表示，行χ2检验；计量资料以（±s）表示，两组间行独立t检验。miR-588表达水平、血清Gal-9、TNF--α水平与化疗疗效的相关性采用Kendall相关性分析，对乳腺癌患者化疗疗效的预测价值采用受试者工作特征曲线（The receiver operating characteristic curve，ROC）分析。检验水准为α=0.05。

2 结果

2.1 乳腺癌患者化疗疗效情况 本研究纳入的126例乳腺癌患者，经4个化疗疗效后，CR患者30例、PR患者57例、SD患者29例、PD患者10例，因此无效组39共例、显效组患者87例。其中无效组患者的乳腺癌患者癌症组织中miR-588的相对表达水平为2.89±0.24，癌旁正常组织为5.39±0.49，显效组患者为3.70±0.51，三者间差异有统计学意义（t=312.246,P＜0.001)。

2.2 两组患者基线资料以及相关指标对比 无效组患者的病变组织miR-588表达水平以及血清Gal-9浓度低于显效组（P＜0.05），TNF--α血清水平高于显效组（P＜0.05）。见表1。

表1 两组患者基线资料以及相关指标对比[n/（%），±s]

表1 两组患者基线资料以及相关指标对比[n/（%），±s]

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2.3 Kendall相关性分析 Kendall分析显示，肿瘤组织中miR-588表达水平以及血清Gal-9均与化疗疗效为正相关关系（P＜0.05），TNF--α浓度为负相关关系（P＜0.05）。见表2。

表2 乳腺癌化疗患者相关参数的Kendall分析

2.4 相关指标预测乳腺癌患者化疗疗效的ROC分析ROC分析显示，肿瘤组织中miR-588表达水平、Gal-9、TNF--α均具有一定的化疗疗效预测价值（P＜0.05），其中miR-588表达水平＞3.626、血清Gal-9浓度＞18.372 ng/L或TNF--α＜29.250 ng/L的患者，化疗疗效更佳。见表3、图1。

图1 相关指标预测乳腺癌患者化疗疗效的ROC曲线

表3 相关指标预测乳腺癌患者化疗疗效的ROC分析

3 讨论

miRNA在细胞内具有多种调节作用，参与分化、发育、组织生长等多种生理过程。哺乳动物70%的miRNA是位于TUs区，不仅在基因位置上保守,序列上也呈现出高度的同源性[6-8]。研究表明，miR-588的表达水平与癌症组织的迁移过程有关，通过了解乳腺癌患者组织中miR-588的表达差异与化疗疗效的影响[9]，对于控制乳腺癌发展具有重要意义。

本研究结果显示，乳腺癌患者癌症组织中miR-588相对表达水平显著低于癌旁正常组织。这可能是因为miR-588可靶向调控畸胎瘤细胞源性生长因子—颗粒体蛋白（Granulin,GRN）转化过程，从而抑制恶性肿瘤细胞的生长和转移。陶爽等人[10]的研究中也指出，miR-588在乳腺癌肿瘤细胞中的表达水平低于癌旁正常组织，且过表达会抑制肿瘤细胞的增殖。本研究结果还显示，无效组乳腺癌患者病变组织中miR-588表达水平低于显效组，Kendall分析显示miR-588表达水平与化疗效果具有一定相关性，说明miR-588表达不仅与乳腺癌的发生有关，同时还影响患者的化疗疗效。乳腺癌终末期通常伴有远处转移，威胁患者生命，而乳腺癌上皮间质转化是其肿瘤转移密切相关。miR-588可与靶基因酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(Adenosine triphosphate binding cassette superfamily G member 2,ABCG2)的3’UTR的非翻译区结合，可介导其转录和修饰[11-12]，ABCG2是跨膜运转蛋白，可促使肿瘤上皮间质转化，降低上皮细胞间的黏附能力，给予肿瘤细胞更大的活动、侵袭能力[13]，因此miR-588参与肿瘤细胞的凋亡、转移过程，与乳腺癌疗效、肿瘤转移密切相关。陈元元等人[14]的研究中指出，GRN为miR-588的下游通路，miR-588高表达可降低GRN水平，从而实现抑制乳腺癌肿瘤细胞迁移、侵袭，本研究结果与其一致。

在Yu Miao等人[15]关于miR-588的研究中指出，miR-588下调会降低乳腺癌患者在接受顺铂化疗后的敏感性，其发生预后不良、淋巴转移、雌激素受体功能损害发生率升高;且miR-588低表达患者的生存期更短。此外,He C等人[16]也表示，SNHG8在前列腺、乳腺癌、肿瘤癌等多种癌症中充当癌基因，可促进癌细胞的增殖和发展，而miR-588/ATG7与小核仁RNA宿主基因8对肿瘤细胞的自噬作用有密切关系。本研究结果还显示，Gal-9也与乳腺癌化疗疗效具有一定相关性，这是因为Gal-9作为凝集素成员，与肿瘤、免疫信号的传导有密切关系。与T细胞黏蛋白-3结合后可诱导免疫耐受，促使T细胞免疫系统的激活，细胞凋亡从而提高化疗效果。TNF-α在ROC分析中的敏感度较低，同时TNF-α受多种感染性疾病等因素的影响，因此并不具有代表性。

综上所述，miR-588在乳腺癌肿瘤细胞中的表达水平高于正常组织，同时miR-588水平高表达也是乳腺癌患者化疗效果显著的保护因子。临床中可根据患者miR-588组织表达水平以预测化疗效果，可为临床乳腺癌化疗计划的制订提供参考。