体外受精-胚胎移植中男方少弱精子症与胚胎质量及妊娠结局的相关研究*

苏梦驰 王华伟 饶 猛 龙艳喜 徐玉庭 唐 莉

昆明医科大学第一附属医院生殖遗传科（云南昆明 650000）

据WHO统计，目前全世界约有10～15%的育龄夫妇患有不孕不育症[1]。夫妇同居未采取任何避孕措施1年以上未孕称为不孕不育症，其中由于男方因素造成女方不孕称为男性不育症。目前，男方因素已经占到夫妻不孕不育的50%[2]。精子质量是体现男性不育症的最直观项目。男性不育症检查中，常以精液常规分析作为主要参考指标。主要包含精液量、精子浓度、精子活力、液化时间、精液pH值、精子形态学分析等。其中精子浓度下降为少精子症，精子活力降低为弱精子症。研究表明，少精子症和弱精子症严重影响男性的生育以及体外受精-胚胎移植（in vitro fertilization-embryo transfer，IVF-ET）成功率[3,4,5]。本研究选取在本生殖中心进行IVF助孕的693对夫妇共计693个取卵周期和2893枚胚胎的临床资料和实验室资料作为研究对象，研究少精子症、弱精子症对胚胎质量及体外受精-胚胎移植者妊娠结局的影响。

资料与方法

一、研究对象

收集2016年至2019年在本生殖中心行体外受精-胚胎移植助孕的693对不孕症夫妇，共计693个取卵周期，2893枚胚胎的临床及实验室数据，以男方精液检查及女方IVF相关检查均正常的不孕不育夫妇患者为对照。根据精子质量分为两组，凡是精子浓度或活力有一项异常的归入少弱精子症组，均正常者归入正常组。纳入标准：①男方精液为手淫取精，新鲜精液，容量≥2.0mL，pH正常，液化时间正常，禁欲天数为2～7天；②均为IVF助孕；③女方卵巢功能正常，造成不孕的因素为：输卵管梗阻、子宫畸形、子宫内膜异位症、子宫腺肌症、男性因素（少精子症、弱精子症、畸形精子症）。排除标准：①男方为无精子症；②ICSI助孕；③女方患有卵巢功能不良、卵巢功能早衰及其他影响卵子质量的疾病；④女方患有糖尿病、高血压等基础性疾病；⑤男方采用冻融精子；⑥夫妇任何一方接触有毒有害物质；⑦女方取卵时获卵无成熟卵子。

二、研究方法

（一）卵巢刺激

使用的卵巢刺激方案有黄体期长方案、卵泡期长方案、拮抗剂方案、微刺激方案、自然周期方案。

（二）精液采集

男方精液均为手淫取精，新鲜精液，容量≥2.0mL，pH正常，液化时间正常，禁欲天数为2～7天。

（三）分组

按照第5版《WHO人类精液检查与处理实验室手册》，以精液的密度、前向运动精子指标分成两组，凡是有一项异常为异常组，均正常为正常组，设置正常组为对照组。

（四）受精、胚胎质量评估

IVF后16～18小时观察受精情况，观察到双原核和两个极体则判断为正常受精。在体外继续培养48小时，于取卵后第3天进行卵裂期胚胎评分，胚胎细胞数目达到8～9个，卵裂球大小均匀、无多核现象，碎片＜10%，评分II级以上，或达第5天的胚胎评分3BB以上者为优质胚胎。

（五）胚胎移植

仅选用新鲜周期移植的数据纳入比较。新鲜周期移植：取卵后第3天选择优质卵裂期胚胎移植或第5天选择优质囊胚移植。

（六）妊娠确定

移植术后2周查血β-hCG阳性者为着床成功，再2周后查B超见孕囊者为临床妊娠。B超下所见总孕囊数/移植胚胎总数×100%为胚胎种植率。临床妊娠周期数/胚胎移植周期数×100%为临床妊娠率。

三、统计学方法

采用SPSS 25.0统计软件处理数据。计数资料以均数±标准差（）表示，行两独立样本t检验，计量资料以率（%）表示，行卡方检验和Fisher确切概率法进行统计，以P＜0.05为差异有统计学意义。

结果

一、一般资料

本研究共纳入693例IVF周期，其中正常组607例，少弱精子症组86例。

正常组男方平均年龄为（36.17±5.86）岁，少弱精子症组男方平均年龄为（36.55±5.65）岁，两组年龄差异无统计学意义（P＞0.05）。正常组女方平均年龄为（34.25±5.14）岁，少弱精子症组女方平均年龄为（34.40±5.55）岁，两组年龄差异无统计学意义（P＞0.05）。正常组获卵总数平均数为（9.80±6.82），少弱精子症组获卵总数平均数为（9.37±6.63，两组无统计学差异（P＞0.05）。见表1。

正常组与少弱精子症组在禁欲天数、液化时间、精液量均无统计学差异（P＞0.05）。正常组精子密度平均数为（45.18±19.05）百万/mL，少弱精子症组平均数为（27.21±17.61）百万/mL，差异具有统计学意义（P＜0.05）。正常组前向运动精子平均数为（50.28±10.89）%，少弱精子症组前向运动精子平均数为（32.71±13.40）%，差异具有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表1 基础资料比较（）

表1 基础资料比较（）

表2 精液基础资料比较（）

表2 精液基础资料比较（）

二、受精、胚胎情况

正常组使用卵子总数为5921，正常受精率为70.19%，少弱精子症组使用卵子数为791，正常受精率为68.27%，正常组正常与少弱精子症组受精率与无统计学差异（P＜0.05），见表3。

表3 使用卵子数、正常受精数、正常受精率比较

正常组优质胚胎率为79.96%，少弱精子症组优质胚胎率为79.61%，差异无统计学意义（P＞0.05）。正常组囊胚形成率为51.77%，少弱精子症组囊胚形成率为58.56%，差异有统计学意义（P＜0.05），见表4。

表4 优质胚胎率与囊胚形成率比较[（），%]

表4 优质胚胎率与囊胚形成率比较[（），%]

三、妊娠结局

正常组移植胚胎数为390，胚胎着床数为94，少弱精子症组移植胚胎数为38，胚胎着床数为11，正常组胚胎着床率为24.10%，少弱精子症组胚胎着床率为28.95%，差异无统计学意义（P＞0.05）；正常组临床妊娠率为35.02%，少弱精子症组临床妊娠率为30.43%，差异无统计学意义（P＞0.05），见表5。

表5 正常组与少弱精子症组妊娠结局的比较

讨论

文献显示，近来全球男性精子质量正在逐年下降[6]，数据表明，我国大部分地区男性精子质量也在逐渐下降[7，8，9]。影响男性精子质量的因素很多，常见病因有遗传因素和先天性异常，如染色体或基因异常、生殖器官先天性异常、内分泌因素、年龄因素、代谢异常和免疫因素、生殖系统感染、环境及理化因素等等[6，10，11，12，13]。

目前，关于影响精液质量的因素研究越来越多。有研究发现，男性精液质量亦随着年龄增加而逐年下降，其精子活力在40岁以后下降明显[14]。Luque,Em等研究了体重指数（BMI）和人类精子质量的关系，发现体重不足（BMI＜20）和病态肥胖（BMI≥40）的男性人群精子浓度、精子总量和前向运动精子显著低于正常体重（BMI 20～24.9）、超重（BMI 25～29.9）和肥胖（BMI 30～39.9）的男性人群，且病态肥胖人群患少精子症和畸形精子症的风险较其他人群增加[15]。Sharma，R等发现吸烟影响精子数量和精子活力，中重度吸烟者的精子质量下降尤为明显[16]。一项在小鼠体外受精模型的研究发现，医源性输精管损伤也可能有损于精子的产生，导致不育[17]。

关于精液与胚胎质量的关系也逐渐受到关注。有研究发现正常精子形态率与优质囊胚形成率呈正相关[18]。还有研究表明不育男性精液质量及体外受精结局与男性体脂率相关，体脂率过高或过低均会影响精液质量、受精率及优质胚胎率[19]。动物研究在雄性小鼠模型中证实长期高脂饮食将降低雄鼠精子质量和生育能力[20]。精子DNA碎片指数升高也将导致精子前向活动力降低，从而降低优质胚胎率、囊胚形成率，影响妊娠结局[21]。有临床研究表明精索静脉曲张通过增加男性不育患者的精子DNA碎片率而改变精子的活力和形态，从而降低体外受精率和卵裂率，影响受精结局[22]。

本研究显示，在IVF助孕中男性少弱精子症组的囊胚形成率高于正常精液组，然而，在正常受精率、优质胚胎率、胚胎种植率和临床妊娠率上，男性正常精液组与少弱精子症组无统计学差异。本研究中，样本均来自于IVF夫妇，研究结果也许存在偏倚。且目前监测胚胎质量的方法为根据形态学判断，研究结果或有偏差。在远期研究中，进行前瞻性研究结果将更加准确。需要更多的临床研究来发现男性少弱精子症与妊娠结局的相关关系。

综上，在IVF助孕中，男性精子的质量对胚胎质量和妊娠结局的影响并不明显。随着不孕不育症发病率的升高，关于其影响因素的研究逐渐增多，其中以女性不孕症的研究更为多见。而关于男性生育力、适育年龄的分析，目前却研究甚少。因此，关于男性因素影响胚胎质量及妊娠结局的研究应当受到重视，制定男性生育年龄标准也十分重要。