猪肉中42种兽残的快速筛查

陈彬，管彬彬，石敏，蒋林惠，何薛纯，陈煜

南通市食品药品监督检验中心（南通 226006）

近年来，由于有些农户缺乏合理的用药知识，且受经济利益的驱动，存在兽药乱用滥用以及不遵守休药期等现象，导致动物农产品中兽药大量残留；这不仅对消费者的健康产生潜在的巨大危害，动物的排泄物释放入环境后对土壤、水体和大气等生态环境也会造成污染，此外，因兽药残留引起的食品安全问题也会制约中国农产品的出口贸易[1-2]。国内外食用农产品的兽药残留检测方法主要有酶联免疫法、分子印记技术、生物传感器法、气相色谱-串联质谱法和夜相色谱-串联质谱法等[3-8]，其中酶联免疫法在检测过程中存在药物交叉反应，适用范围窄；分子印迹技术专一性过强，因此无法同时检测多种药物残留；生物传感器法成本高，且稳定性需要进一步提高；液相色谱质谱联用技术可以集高效分离和结构鉴定于一体，是兽药残留检测中最主要的确证分析手段。

中国兽药残留检测方法存在的不足主要有对于非检测项目药物残留筛查能力不足、检测范围窄、现有农药、兽药残留检测方法多数仅能对规定的检测药物种类进行测定、无法对外源未知的农药、兽药残留进行筛查检测、缺乏筛查能力等，使食品安全监控存在隐患；对同一样品的不同种类的农药、兽药残留检测项目，需采用不同的前处理及检测方法，难以体现产品整体特征，且费时费力，增加了检测成本；传统检测方法提取净化过程繁琐、成本高，而且耗时费力，难以满足大批量样品测定的需求。因此，试验开展基于QuEChERS与质谱联用技术的食用农产品兽药多残留检测技术研究，以期建立一套快速、准确、覆盖面广的食用农产品中兽药残留的筛查方法。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

标准品：强力霉素（纯度99.1%）、土霉素（纯度96.02%）、金霉素（纯度99.5%）、四环素（纯度94.23%）、克伦特罗（纯度99.34%）、沙丁胺醇（纯度99.92%）、莱克多巴胺（纯度95.01%）、特布他林（纯度96.70%）、氯霉素（纯度99.24%）、氟苯尼考（纯度99.90%）、甲砜霉素（纯度99.43%）、孔雀石绿（纯度91.0%）、隐性孔雀石绿（纯度98.7%）、地西泮、甲硝唑（纯度99.80%）、地美硝唑（纯度99.64%）、洛硝哒唑（纯度99.10%），羟基甲硝唑（纯度99.4%）、羟甲基甲硝咪唑（纯度99.5%）、地塞米松（纯度99.18%）、恩诺沙星（纯度99.9%）、环丙沙星（纯度92.31%）、洛美沙星（纯度99.42%）、培氟沙星（纯度92.19%）、氧氟沙星（纯度99.31%）、诺氟沙星（纯度97.29%）、沙拉沙星（纯度99.7%）、林可霉素（99.6%）、氯丙嗪（纯度98.51%）、替米考星（纯度80.71%）、尼卡巴嗪（纯度98.79%）、五氯酚酸钠（100 μg/mL，甲醇）、甲氧苄啶（纯度99.9%）、磺胺嘧啶（纯度99.7%）、磺胺甲基嘧啶（纯度99.6%）、磺胺甲恶唑（纯度99.7%）、磺胺二甲嘧啶（纯度99.5%）、磺胺邻二甲氧嘧啶（纯度99.0%）、磺胺氯哒嗪（纯度99.6%）、磺胺间二甲氧嘧啶（纯度97.0%）、磺胺地索辛（纯度99.4%）、磺胺喹沙啉，标准品购自于德国Dr. Ehrenstorfer公司、上海安谱实验科技股份有限公司、坛墨质检-标准物质中心。

猪肉样品（南通市市售）。

乙腈（色谱纯，德国Merck公司）；甲醇（色谱纯，德国Merck公司）；甲酸（分析纯，阿拉丁试剂上海有限公司）；缓冲盐包SBEQ-CA8802-B、SBEQ-CA8803-25（上海安谱科学仪器有限公司）；超纯水（Milli-Q Element超纯水系统制备）。

液相色谱质谱联用仪（Vanqusih-F+TSQ ALTIS，赛默飞世尔科技）；电子天平（BSA224S，赛多利斯科学仪器有限公司）；氮吹浓缩仪（Xcelvap，美国Horizon）；离心机（MIKRO 220R，德国Hettich）；多管旋涡混合仪（VM-2500，广东安胜仪器有限公司）。

1.2 标准溶液的配制

分别称取适量标准品，置于50 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，分别得到母液质量浓度约1 000 μg/mL的四环素类、地塞米松、喹诺酮类单标标准溶液和100 μg/mL的β-受体激动剂类、氯霉素类、孔雀石绿、地西泮、硝基咪唑类、林可霉素、氯丙嗪、替米考星、尼卡巴嗪和磺胺类单标标准溶液；用移液枪分别移取适量兽残单标母液，用甲醇水（1+1）溶解，制成兽残混标工作溶液，其中四环素类质量浓度10 μg/mL，β-受体激动剂类、硝基咪唑类、喹诺酮类、磺胺类质量浓度1 μg/mL，尼卡巴嗪质量浓度0.4 μg/mL，其余质量浓度0.2 μg/mL。

1.3 样品前处理

取适量样品，充分均匀，准确称取2 g（精确至0.000 1 g）样品于50 mL塑料离心管中，加入15 mL乙腈溶液，加入缓冲盐包SBEQ-CA8802-B，涡旋混合5 min，超声波提取10 min，以6 000 r/min离心5 min，吸取上清液至需要的净化管，重复提取2次，合并2次提取液。上述提取步骤中的2次提取液按先后顺序依次加入到净化管中，旋涡混合5 min，以6 000 r/min离心5 min。取出净化管中所有上清液，氮吹至近干。加入1 mL乙腈-水溶液（1∶1）溶解，涡旋混合1 min，过0.22 μm滤膜，供液相色谱-质谱测定。

1.4 分析条件

1.4.1 色谱条件

色谱柱，RP-C18，150 mm×2.1 mm×2.6 μm；流动相：A，水-0.1%甲酸；B，乙腈-0.1%甲酸；梯度洗脱如表1所示；柱温30 ℃；流速0.3 mL/min；进样体积5 μL。

表1 梯度洗脱

1.4.2 质谱条件

喷雾电压3 500 V（ESI+），2 500（ESI-）；鞘气流量0.175 L/s；辅助气流量0.025 L/s；吹扫挡锥气流量0.005 L/s；蒸发温度450 ℃；离子传输管温度200℃；扫描循环时间1.2 s；碰撞气压0.2 Pa。

2 结果与分析

2.1 定性测定

参考相关标准和文献并结合仪器的实际情况，氯霉素类、尼卡巴嗪和五氯酚酸钠采用负离子模式，其他均为正离子模式，利用TSQ TUNE软件对定量离子、定性离子、透镜电压、碰撞能量进行优化，42种兽药的质谱分析优化参数如表1所示，42种兽残混合标准溶液的特征离子色谱图如图1所示。从表2和图1中可以看出42种兽药残留的出峰时间在2.42～14.51 min之间，分离效果较好、离子干扰少。

2.2 定量测定

2.2.1 标准曲线、线性范围和检出限

试验方法采用猪肉空白基质加标的方式建立标准曲线，以定量离子的峰面积Y为纵坐标、相应质量浓度X为横坐标绘制标准曲线，以信噪比大于3计算方法的检出限，检测结果见表3。42种兽药在各自的线性范围内，峰面积与质量浓度呈良好的线性关系，相关系数为0.990 8～0.999 8，42种兽药的检出限在0.5～25 μg/kg。

2.2.2 准确度和精密度

称取2 g空白猪肉样品，添加42种兽药的标准溶液做加标回收率试验，前处理方式同1.3所述，每个水平做6个平行样品。42种兽残的添加水平、平均回收率和δRSD结果如表4所示。从表4中可以看出，42种兽药在猪肉中的平均回收率75.1%～106.9%，δRSD5.3%～19.4%，符合GB/T 27404—2008《实验室质量控制规范 食品理化检测》[9]的技术要求。

表2 42种兽残的质谱分析优化参数

图1 42种兽残混合标准溶液的特征离子色谱图

表3 42种兽残的线性范围、线性方程、相关系数和检出限

接表3

表4 猪肉空白基质中42种兽残的加标回收率和精密度

3 结论

主要针对猪肉中未知兽药的残留问题，建立基于QuEChERS与质谱联用技术的一种快速、高通量、准确的筛查方法，该方法的相关系数为0.990 8～0.999 8，检出限在0.5～25 μg/kg之间；在猪肉空白基质中进行检出限水平加标，回收率和精密度均满足GB 27404要求；相比于传统检测方法，该方法前处理简便快捷，且可同时处理多种农药兽药项目，缩短检验周期，降低检测成本，提高检测效率，减少大量有机试剂的使用，属于环境友好型检测方法；可同时筛查多种兽药残留，提高食品安全监控能力，降低监控风险，可用于市场监管风险监测评估预警领域、食品安全保障的快速筛查、应急事件处理的快速筛查等领域。