饲料中喹乙醇检测方法研究进展

2021-03-28李玉卡陈素梅赵永坡

今日畜牧兽医 2021年4期

杨洁，刘冰，李玉卡，陈素梅，赵永坡，赵博

（1.石家庄市畜产品和兽药饲料质量检测中心 050000；2.石家庄市农林科学研究院 050000；3.石家庄市动物卫生监督所 050000）

喹乙醇（Olaquindox），也叫倍育诺、快育灵，是德国拜耳公司于1967年研制合成的一种化学药物，是喹啉的衍生物。其在常温下为淡黄色结晶粉末，味苦、无臭。溶于热水，冷水微溶，几乎不溶于氯仿、甲醇和乙醇。在高温下性质稳定，光照会引起其氧化。

喹乙醇能抑制革兰氏阳性菌和阴性菌的生长，可作抑菌剂使用。还能促进蛋白质同化，提高饲料转化率，促进动物生长，加入饲料中使用。但喹乙醇能在动物体中富集，具有生物毒性，能造成染色体变异，动物受刺激时，会应激出血引发死亡。由于喹乙醇的这些特性，我国农业部（现农业农村部）在2001年168号公告中规定，喹乙醇能用于体重35kg以下的仔猪，在猪饲料中添加量低于100mg/kg；家禽和水产禁用，在鸡料和鱼料中不得检出。2002年农业部（现农业农村部）发布《无公害食品渔药使用准则》中规定，喹乙醇是禁用渔药。2005版《中国兽药典》也明确规定，家禽和水产养殖禁用喹乙醇。GB 31650-2019《食品安全国家标准食品中兽药最大残留限量》中规定，喹乙醇在动物（猪）体内的最大残留限量为4g/kg（肌肉）、50μg/kg（肝）。喹乙醇在美国和欧盟都被禁止用作饲料添加剂。但由于喹乙醇的促生长效果较好，我国有些养殖从业人员不遵守国家有关规定，私自增加喹乙醇添加量，在禽类、水产饲料中添加喹乙醇。造成动物体内喹乙醇残留，在食用者体内富集从而对健康造成危害。

由于喹乙醇及其代谢产物对人体有较大危害，对于饲料中喹乙醇含量的检测就尤为重要。饲料中喹乙醇的检测方法主要包括：胶体金免疫层析法、酶联免疫吸附法、高效液相色谱法、高效液相色谱-串联质谱法。

1 饲料中喹乙醇的检测方法

1.1 胶体金免疫层析法

将特异性的抗原或抗体以条带状固定在膜上，胶体金标记试剂(抗体或单克隆抗体)吸附在结合垫上，将样品溶液加到试纸条一端的样本垫上后，通过毛细作用向前移动，溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应，再移动至固定的抗原或抗体的区域时，待检物与金标试剂的结合物又与之发生特异性结合而被截留，聚集在检测带上，可通过肉眼观察到显色结果。

胶体金免疫层析法操作简便、快捷，不需检测仪器，对检测人员要求不高，特异性和敏感性都较高，适合在基层现场快速检测时使用。

1.2 酶联免疫吸附法

还可以用酶联免疫吸附法检测喹乙醇。制作酶联免疫试剂盒时，用纯化的抗体包被微孔板，然后微孔中加入抗原，再与HRP标记的抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，洗涤后加底物TMB显色。TMB加HRP酶的催化作用变成蓝色，最后加酸变成黄色。黄色深浅与样品中的喹乙醇含量呈正相关。在450nm波长条件下，用酶标仪测定微孔板中样品的吸光度值，然后对照标准曲线计算样品中喹乙醇的浓度。

酶联免疫吸附法实验方法简便，用时短，所需仪器较少，主要是酶标仪，所用实验试剂主要是酶联免疫试剂盒中的试剂。如果样品中喹乙醇浓度超出最高检出限，要稀释到检测范围才能进行检测。酶联免疫吸附法能在实验室内进行快速批量检测，适合检测任务较大作初筛方法使用，对待测物质进行定性。但酶联免疫吸附法还存在交叉反应，可能产生假阳性和假阴性，其检测结果的准确度还有待提高。

1.3 高效液相色谱法

液相色谱法是用液体作流动相的色谱法，其分离原理是混合物中各组分对两相亲和力不同。高效液相色谱法是指在液相柱色谱系统加上高压液流系统，流动相在高压作用下快速流动，提高分离效率的方法。不同组分分离出来后，在特定紫外吸收波长下，与标准物质进行比较来确定组分成分。

GB/T 8381.7-2009《饲料中喹乙醇的测定高效液相色谱法》中规定，此法适用于检测配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料中的喹乙醇含量，最低定量限为1mg/kg，检出限为0.1mg/kg。待检样品中的喹乙醇用甲醇溶液提取，固相萃取小柱净化，反相液相色谱柱分离测定，紫外检测器检测，用外标法定量分析。

高效液相色谱法检测速度快、灵敏、选择性好，可同时测定多组分。但因饲料中成分复杂，可能会干扰喹乙醇出峰，所以对于疑似阳性样品，需要用其他方法进行进一步检测。