狼毒大戟根中的萜类成分研究△

陈虎，历明辉，陶平德，陈黎

湖北医药学院 附属太和医院 药学部，湖北 十堰 442000

狼毒大戟EuphorbiafischerianaSteud.为大戟科大戟属多年生草本植物，主产于我国西北、东北及内蒙古等地，为传统的外用药物。其药理活性主要有抗肿瘤、抗病毒、抗菌、抗结核、降血糖、杀虫等[1-5]。狼毒大戟化学成分结构丰富多样，文献对狼毒大戟中结构新颖的化学成分研究主要集中在萜类[1，3-7]。为了分离得到结构新颖的萜类化合物，在前期研究基础上[8]，本研究选取了狼毒大戟的根进行了进一步深入研究，从80%丙酮提取物中分离鉴定了7个化合物，包括5个二萜类化合物和2个三萜类化合物，分别鉴定为7-羰基脱氢松香酸(7-oxodehydroabietic acid，1)、trogopteroid F(2)、陶塔二酚(totaradiol，3)、18-羟基弥罗松酚(18-hydroxy-8，11，13-abietatrien-12-ol，4)、19-羟基弥罗松酚(19-hydroxy-8，11，13-abietatrien-12-ol，5)、环木波罗-22-烯-3β，25-二醇(cycloart-22-ene-3β，25-diol，6)和羽扇豆醇(lupeol，7)。除了化合物6和7，其余化合物均为首次从狼毒大戟中分离得到。

1 材料

1.1 药材

狼毒大戟为2016年9月采摘于湖北十堰市武当山，由湖北医药学院药学院叶方教授鉴定为狼毒大戟EuphorbiafischerianaSteud.，样本现保存在湖北医药学院附属太和医院武当药物研究所(标本号为20160925)。

1.2 仪器与试剂

AM-400型核磁共振波谱仪(Bruker公司)；P2000型旋光仪(JASCO公司)；HP-845型紫外可见光谱仪(Hewlett-Packard公司)；1100型半制备液相(Agilent公司)；氘代试剂(J&K Chemical Ltd.公司)；Cambridge Isotope Laboratories，Inc.半制备型液相色谱，色谱柱为YMC(RP-C18，250 mm×10 mm，5 μm)；正相柱色谱硅胶(100目、200～300目，青岛海洋化工厂)；色谱纯甲醇及分析纯甲醇、三氯甲烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、石油醚(国药集团化学试剂有限公司)；纯净水(杭州娃哈哈集团)。

2 提取与分离

干燥的狼毒大戟根4 kg，粉碎，在室温条件下反复用80%丙酮冷浸提取4次，真空浓缩得总浸膏140 g。将总浸膏用2 L温水混悬，依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取。乙酸乙酯萃取物真空浓缩后得到乙酸乙酯部位45 g。将乙酸乙酯部位用正相硅胶柱，二氯甲烷-丙酮(1∶0→1∶1)梯度洗脱，分成6个组分A～F。B组分用ODS柱(甲醇-水，3∶7→10∶0)梯度洗脱，分为5个亚组分B1～B5。B3亚组分又经凝胶柱、正相硅胶柱(二氯甲烷-丙酮，8∶2→1∶1)及半制备HPLC(甲醇-水，1∶9→10∶0)分离纯化得到化合物6(7.2 mg)、7(4.8 mg)。C组分用RP-C18柱(甲醇-水，3∶7→9∶1)梯度洗脱，分为3个亚组分C1～C3。C2亚组分又经正相硅胶柱及半制备HPLC(甲醇-水，4∶6)分离纯化得到化合物4(10.5 mg)。C3亚组分经半制备HPLC(甲醇-水，1∶1)分离纯化得到化合物5(8.2 mg)。D组分依次用ODS柱(甲醇-水，3∶7→7∶3)、正相硅胶柱(甲醇-水，6∶4→1∶9)和半制备HPLC(甲醇-水，6∶4)分离得到化合物2(10.3 mg)。E组分反复用RP-C18色谱柱(甲醇-水，3∶7→9∶1)、正相硅胶柱及半制备HPLC(甲醇-水，65∶35)分离纯化得到化合物1(7.6 mg)和3(12.1 mg)。

3 结构鉴定

化合物1：白色无定形粉末，分子式为C20H26O3，ESI-MSmz：315.20[M+H]+；1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：1.26(6H，d，J=6.9 Hz，H-16，17)，1.27(3H，s，H-20)，1.34(3H，s，H-19)，7.41(1H，d，J=8.2 Hz，H-11)，7.50(1H，dd，J=8.2，2.1 Hz，H-12)，7.80(1H，d，J=2.1 Hz，H-14)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：38.7(C-1)，19.8(C-2)，38.2(C-3)，47.8(C-4)，45.8(C-5)，39.2(C-6)，201.2(C-7)，131.9(C-8)，155.4(C-9)，38.9(C-10)，125.4(C-11)，134.4(C-12)，148.5(C-13)，125.8(C-14)，35.1(C-15)，24.5(C-16，17)，181.7(C-18)，17.0(C-19)，24.1(C-20)。以上数据与文献报道一致[9]，故鉴定化合物1为7-羰基脱氢松香酸。

化合物2：白色无定形粉末，分子式为C20H30O2，ESI-MSmz：303.23[M+H]+；1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：1.02(3H，s，H-18)，1.15(3H，s，H-20)，1.17(3H，d，J=1.5 Hz，H-16)，1.19(3H，d，J=1.5 Hz，H-17)，1.34(1H，m，H-1α)，1.40(1H，dd，J=12.7，1.7 Hz，H-5)，2.32(1H，dt，J=12.8，3.8 Hz，H-1β)，2.72(2H，m，H-7)，3.18(1H，m，H-15)，3.42(1H，d，J=11.0 Hz，H-19a)，3.84(1H，d，J=11.0 Hz，H-19b)，6.35(1H，s，H-14)，6.98(1H，s，H-11)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：40.8(C-1)，20.3(C-2)，36.7(C-3)，40.1(C-4)，53.6(C-5)，20.6(C-6)，32.1(C-7)，133.8(C-8)，142.5(C-9)，38.8(C-10)，123.2(C-11)，134.1(C-12)，153.2(C-13)，115.7(C-14)，28.4(C-15)，23.4(C-16)，23.6(C-17)，27.8(C-18)，65.2(C-19)，26.7(C-20)。以上数据与文献报道一致[10]，故鉴定化合物2为trogopteroid F。

化合物3：白色无定形粉末，分子式为C20H30O2，ESI-MSmz：325.21[M+Na]+；1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：0.87(3H，s，H-19)，1.07(3H，s，H-18)，1.16(3H，s，H-20)，1.31(3H，d，J=7.0 Hz，H-16)，1.32(3H，d，J=7.0 Hz，H-17)，1.21(1H，dd，J=12.3，1.5 Hz，H-5)，1.42(1H，dd，J=13.0，4.3 Hz，H-1α)，2.28(1H，dt，J=13.0，3.3 Hz，H-1β)，2.67(1H，ddd，J=16.8，11.3，7.4 Hz，H-7α)，2.95(1H，dd，J=16.8，5.9 Hz，H-7β)，3.23(2H，m，H-3，15)，6.52(1H，d，J=8.6 Hz，H-12)，6.91(1H，d，J=8.6 Hz，H-11)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：39.5(C-1)，29.2(C-2)，79.7(C-3)，40.1(C-4)，51.2(C-5)，20.7(C-6)，30.5(C-7)，134.3(C-8)，142.5(C-9)，38.6(C-10)，124.1(C-11)，115.5(C-12)，155.3(C-13)，132.3(C-14)，30.0(C-15)，20.7(C-16)，20.7(C-17)，28.9(C-18)，16.3(C-19)，25.9(C-20)。以上数据与文献报道一致[11]，故鉴定化合物3为陶塔二酚。

化合物4：无色针晶(甲醇)，分子式为C20H28O2，ESI-MSmz：301.22[M+H]+。1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ：0.86(3H，s，H-19)，1.19(3H，s，H-20)，1.21(3H，d，J=7.2 Hz，H-16)，1.23(3H，d，J=7.2 Hz，H-17)，1.37(1H，m，H-1α)，1.38(2H，m，H-3)，1.62(1H，dd，J=11.9，1.8 Hz，H-5)，1.62～1.82(4H，m，H-2，6)，2.17(1H，dt，J=12.7，3.4 Hz，H-1β)，2.81(2H，m，H-7)，3.10(1H，m，H-15)，3.20(1H，d，J=10.9 Hz，H-18a)，3.45(1H，d，J=10.9 Hz，H-18b)，6.62(1H，s，H-11)，6.80(1H，s，H-14)；13C-NMR(CDCl3，100 MHz)δ：38.6(C-1)，18.8(C-2)，35.2(C-3)，37.4(C-4)，44.2(C-5)，19.3(C-6)，29.7(C-7)，127.4(C-8)，148.7(C-9)，38.2(C-10)，111.3(C-11)，150.7(C-12)，131.8(C-13)，126.7(C-14)，27.1(C-15)，22.7(C-16)，23.1(C-17)，72.5(C-18)，17.6(C-19)，25.5(C-20)。以上数据与文献报道一致[12]，故鉴定为化合物4为18-羟基弥罗松酚。

化合物5：白色无定形粉末，分子式为C20H28O2，ESI-MSmz：301.22[M+H]+；1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：1.01(3H，s，H-18)，1.14(3H，s，H-20)，1.15(3H，d，J=7.2 Hz，H-16)，1.16(3H，d，J=7.2 Hz，H-17)，1.36(1H，m，H-1α)，1.40(1H，dd，J=12.7，1.7 Hz，H-5)，2.23(1H，dt，J=12.3，3.4 Hz，H-1β)，2.70(1H，ddd，J=16.4，11.6，6.9 Hz，H-7α)，2.80(1H，ddd，J=16.4，5.8，1.0 Hz，H-7β)，3.17(1H，m，H-15)，3.43(1H，d，J=11.1 Hz，H-19a)，3.84(1H，d，J=11.1 Hz，H-19b)，6.65(1H，s，H-11)，6.74(1H，s，H-14)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：40.4(C-1)，20.4(C-2)，36.3(C-3)，40.5(C-4)，53.3(C-5)，20.8(C-6)，31.8(C-7)，126.9(C-8)，149.3(C-9)，38.9(C-10)，112.0(C-11)，153.4(C-12)，133.7(C-13)，127.3(C-14)，28.0(C-15)，23.5(C-16)，23.4(C-17)，27.8(C-18)，65.2(C-19)，26.6(C-20)。以上数据与文献报道一致[13]，故鉴定化合物5为19-羟基弥罗松酚。

化合物6：无色针晶(甲醇)，分子式为C30H50O2，ESI-MSmz：443.39[M+H]+；1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ：5.59(1H，m，H-22)，5.58(1H，m，H-23)，3.31(1H，m，H-3)，1.25(3H，s，H-27)，1.23(3H，s，H-26)，1.03(3H，s，H-30)，0.95(3H，s，H-18)，0.92(3H，s，H-29)，0.90(3H，s，H-28)，0.81(3H，d，J=6.4 Hz，H-21)，0.55(1H，d，J=5.0 Hz，H-19a)，0.35(1H，d，J=5.0 Hz，H-19b)；13C-NMR(CDCl3，100 MHz)δ：26.5(C-1)，30.5(C-2)，79.3(C-3)，40.5(C-4)，47.3(C-5)，21.1(C-6)，28.1(C-7)，47.9(C-8)，20.2(C-9)，26.1(C-10)，26.0(C-11)，35.6(C-12)，45.3(C-13)，48.8(C-14)，32.7(C-15)，32.1(C-16)，52.0(C-17)，18.1(C-18)，29.8(C-19)，36.4(C-20)，18.3(C-21)，125.6(C-22)，139.4(C-23)，39.0(C-24)，70.8(C-25)，30.1(C-26)，30.0(C-27)，19.4(C-28)，14.1(C-29)，25.4(C-30)。以上数据与文献报道一致[14]，故鉴定化合物6为环木波罗-22-烯-3β，25-二醇。

化合物7：白色粉末，分子式为C30H50O，ESI-MSm/z：427.39[M+H]+；1H-NMR(CDCI3，400 MHz)δ：0.77(3H，s，H-24)，0.80(3H，s，H-28)，0.85(3H，s，H-25)，0.93(3H，s，H-27)，0.95(3H，s，H-23)，1.03(3H，s，H-26)，1.68(3H，s，H-30)，3.20(1H，dd，J=11.4，4.8 Hz，H-3)，4.58(1H，m，Ha-29)，4.70(1H，m，Hb-29)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：38.8(C-1)，27.5(C-2)，79.1(C-3)，39.0(C-4)，55.4(C-5)，18.4(C-6)，34.2(C-7)，40.8(C-8)，50.4(C-9)，37.3(C-10)，21.0(C-11)，25.0(C-12)，38.0(C-13)，42.7(C-14)，27.5(C-15)，35.6(C-16)，43.1(C-17)，48.4(C-18)，48.0(C-19)，151.1(C-20)，29.8(C-21)，40.1(C-22)，28.0(C-23)，15.3(C-24)，16.2(C-25)，16.0(C-26)，14.5(C-27)，18.1(C-28)，109.5(C-29)，19.3(C-30)。以上数据与文献报道一致[15]，故鉴定化合物7为羽扇豆醇。

4 结论

狼毒大戟中化合物的结构类型丰富多样，文献对其中萜类化合物的报道相对较多，为该植物的研究热点。但新结构类型的萜类主要集中在其地上部位，根部的研究相对较少。本实验从狼毒大戟根80%丙酮提取物中分离鉴定了7个萜类化合物，包括5个二萜类化合物和2个三萜类化合物，除了化合物6和7，其余化合物均为首次从狼毒大戟的根中分离得到。本实验为狼毒大戟化学成分的研究及开发利用提供了参考。