三种替抗产品对肉雏鸡生长性能和免疫功能的影响

陈璟怡 孙弟芬 徐 丹 任少均 肖祥金 舒 刚*

（1.四川农业大学动物医学院，四川成都611130；2.四川庆琳农业技术开发有限公司，四川内江641000）

临床常用抗生素，是指由微生物培养液中提取物以及用化学方法合成或半合成得到的化合物。大量抗生素被作为添加剂广泛应用于畜、禽、水产动物饲料，其显著促进动物生长性能、提高饲料转换效率、疾病控制与治疗的积极作用等，为养殖业发展做出了重要贡献[1-2]，但长期使用抗生素也带来药物残留、耐药菌产生、动物免疫功能下降等危害，甚至影响公共健康安全、威胁人类身体健康。2020年是我国迈向无抗养殖时代的关键时期，据农业农村部第194 号公告，按照《遏制细菌耐药国家行动计划（2016—2020 年）》和《全国遏制动物源细菌耐药行动计划（2017—2020年）》部署，将全面停止生产、进口、经营、使用促生长药物饲料添加剂（中草药类除外），抗生素的替代品研究逐渐成为热点。

随着禁抗进程深入，市场对安全、高效的饲用替抗产品需求度激增。自2006 年欧盟提出饲料禁抗后积累的饲用替抗经验、饲用植物及其提取物是很重要的饲用替抗产品和技术来源[3]。本试验所使用的甘草提取物、藿香正气散，各成分均具有抗菌促生长、提高免疫性能的作用；同时，益生菌作为一种微生态制剂，能够平衡动物肠道菌群并分泌活性物质提高机体免疫力，作为抗生素可能的替代物，益生菌也得到了广泛的研究[2]，常用的枯草杆菌与地衣芽孢杆菌，能够产生有利于动物消化吸收的酶来促进动物机体生长和保护机体的健康。因此为进一步阐明甘草提取物、益生菌及藿香正气散提取物这三种替抗产品促进生长性能和免疫功能效果，试验考察基础日粮中添加替抗产品对肉雏鸡生长性能和免疫功能的影响，以期为临床合理运用提供科学依据。

1 材料

1.1 试验动物

1 日龄健康科宝肉鸡400 只，由成都林海禽业有限公司提供。

1.2 主要药品

甘草提取物干粉（1∶20提取）、益生菌组（干酪乳杆菌K1 含量为1.0×108CFU/g、枯草芽孢杆菌JS01 含量为1.0×108CFU/g）、藿香正气散提取物（由藿香、白芷等中药按1∶20提取）由四川永诺生物科技有限公司提供。

1.3 主要疫苗和试剂

新支二联疫苗（生产批号：20625），新流灭活疫苗(生产批号：200513），鸡新城疫血凝抑制试验抗原、阴性血清和阳性血清，禽流感病毒H9亚型血凝抑制试验抗原、阴性血清和阳性血清，均由洛阳慧中生物技术有限公司提供。免疫因子白细胞介素-2（IL-2）、干扰素-γ（IFN-γ）检测试剂盒，购自南京建成生物工程研究所。

1.4 主要仪器

电子天平、高速冷冻离心机，均购自美国Thermo Fisher 公司；多功能酶标仪，购自美国Varioskan Flash公司；恒温培养箱，购自上海赫田科学仪器有限公司。

2 方法

2.1 试验设计

将1 日龄健康科宝肉鸡400 只随机分成4 组，每组4 个重复，每个重复25 只。对照组饲喂基础日粮；甘草提取物组在基础日粮中添加0.1%甘草提取物；益生菌组在基础日粮中添加0.1%的益生菌；藿香正气散组在基础日粮中添加0.1%的藿香正气散提取物。试验从雏鸡1 日龄开始，观察7 d 后开始添加以上产品，试验期为28 d。基础日粮组成及营养水平见表1。

2.2 饲养管理

饲养方式采用三层重叠式笼养，雏鸡自由采食和饮水。室内温度为：1～3 日龄35～34 ℃；4～7 日龄34～32 ℃；8～14 日龄30～29 ℃；以后室内保持恒温（28～25 ℃），每天清除粪便。

免疫程序如下：6日龄，用新支二联苗二倍量对雏鸡滴鼻点眼，用新流(H9N2)二联灭活疫苗0.3 mL/只颈部皮下注射。

2.3 观察指标

2.3.1 生长性能测定

表1 基础日粮组成及营养水平

每天观察、记录各组雏鸡的日常活动、饮水、采食等基本情况，记录各组雏鸡的死亡情况；在试验第14、28 d 称量雏鸡体重。按照公式：平均日增重(g)=总增重(g)/(试验天数×只数)，平均日采食量(g)=总采食量(g)/(试验天数×只数) ，料重比=总采食量(g)/总增重(g)，计算平均日增重、平均日采食量，并计算料重比。

2.3.2 器官指数测定

于试验结束时，每组每个重复随机选取2 只鸡，解剖并摘取主要实质器官，剥离周围脂肪，用滤纸吸干水分后称重并计算器官指数，按照公式计算胸肌率、腿肌率、腹脂率。

器官指数（g/kg）=器官重（g）/体重（kg）

全净膛率(%)=(全净膛重/活重)×100

胸肌率(%)=(胸肌重/全净膛重)×100

腿肌率(%)=(大小腿净肌肉重/全净膛重)×100

腹脂率(%)=(腹脂重/全净膛重)×100

2.3.3 抗体和免疫因子检测

参考《新城疫诊断技术规范》(GB 16550—1996)、《高致病性禽流感诊断技术方法》(GB /T 18936—2003)进行新城疫和禽流感（H9N2 型）抗体效价的检测。细胞因子IL-2、IFN-γ按照说明书进行检测。

2.4 数据的统计分析

试验数据利用SPSS 19.0 单因素方差分析(One-Way ANOVA)，用Duncan's 法多重检验分析组间差异显著性，数据以“平均值±标准差”表示，P＜0.05作为差异显著性判断标准。

3 结果与分析

3.1 日常观察

试验过程中雏鸡精神活跃，日常饮水、采食正常，生长良好，未发生传染性疾病。

3.2 替抗产品对雏鸡各阶段生长性能的影响（见表2）

表2 替抗产品对雏鸡生长性能的影响

由表2 可知，各试验组在平均日采食量差异不显著（P＞0.05）的情况下末重、平均日增重显著提高（P＜0.05），说明3 种替抗产品对肉雏鸡的生长性能影响显著。且益生菌组、藿香正气散组相比于对照组，料重比显著降低（P＜0.05），其饲料报酬明显提高。

3.3 替抗产品对雏鸡主要实质器官指数的影响（见表3）

由表3可知，三种替抗产品对雏鸡的主要实质器官指数并无显著影响（P＞0.05）。

3.4 替抗产品对雏鸡屠宰指标的影响（见表4）

表3 替抗产品对雏鸡主要实质器官指数的影响（g/kg）

表4 替抗产品对雏鸡部分屠宰指标的影响

由表4 可知，各组胴体重与对照组比较，各试验组显著高于对照组（P＜0.05）；各组全净膛率与对照组比较，益生菌组、藿香正气散组显著高于对照组（P＜0.05），甘草提取物组与对照组差异不显著（P＞0.05）；益生菌组、藿香正气散组的胸肌率、腿肌率显著高于对照组（P＜0.05）；甘草提取物组腹脂率与对照组差异不明显（P＞0.05），益生菌组、藿香正气散组显著降低（P＜0.05）。

3.5 替抗产品对雏鸡免疫器官指数、血清抗体效价和免疫因子的影响（见表5和表6）

表5 替抗产品对雏鸡免疫器官指数的影响(g/kg)

表6 替抗产品对雏鸡血清抗体效价和免疫因子水平影响（第28 d）

由表5可知，与对照组相比，胸腺指数甘草提取物组、藿香正气散组显著提高（P＜0.05），益生菌组影响不显著（P＞0.05）；脾脏指数益生菌组、藿香正气散组显著提高（P＜0.05），甘草提取物组影响不显著（P＞0.05），其中藿香正气散组提高最明显；对于法氏囊指数，除益生菌组无显著差异（P＞0.05），甘草提取物组、藿香正气散组均有显著提高（P＜0.05）。胸腺、脾脏和法氏囊是肉鸡最重要的三种免疫器官，其指数是可粗略估计免疫功能强弱和优质肉鸡健康发育程度的重要指标[4]。

由表6可知，第28 d，与对照组相比，对于新城疫（ND）抗体效价指标，试验组均有显著提升（P＜0.05）；对于H9N2抗体效价，甘草提取物组、藿香正气散组提升显著（P＜0.05），益生菌组无明显提升（P＞0.05）；对于IL-2 水平，试验组均有显著提高（P＜0.05）；对于IFN-γ水平，试验组也都有显著提高（P＜0.05）。

4 讨论

4.1 替抗产品对雏鸡生长性能的影响

雏鸡在育雏阶段生长性能良好将提高后期经济效益，目前在雏鸡阶段常用金霉素、脱霉剂等来提高生长性能，但长期使用容易产生耐药性和药物的残留，威胁人类健康[5-7]。据研究表明甘草具有增强机体免疫调节以及抗氧化等作用[8]，甘草的活性成分主要为三萜皂苷(由甘草酸、甘草次酸组成)、甘草多糖和黄酮。张晓静等[9]研究表明，甘草可促进肉鸡消化吸收营养物质的能力，提高其生长性能，发酵黄芪-甘草水提物可显著提高肉鸡平均日增重。枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌是当前广泛使用的益生菌，它们能够产生有助于动物消化吸收的酶来促进动物机体生长和保护机体的健康，作为饲料替抗添加物在动物生产中具有重要意义。陆俊贤等[10]研究表明，在饲粮中添加枯草芽孢杆菌能明显提高肉鸡的平均日增重和饲料转化效率。孙全友等[11]研究表明添加地衣芽孢杆菌可使肉鸡生长性能明显提高，且增加了肉鸡胸肌持水性, 提高嫩度；目前关于甘草、藿香正气散加入饲料作为替抗产品的研究还较少。本试验在基础日粮中加入0.1%甘草提取物、0.1%的益生菌和0.1%的藿香正气散，雏鸡生长各阶段平均日增重、料重比、成活率都优于对照组。

4.2 替抗产品对雏鸡实质器官器官指数和屠宰性能的影响

屠宰性能反映畜禽产肉性能，不仅可以直观地看到家禽的产肉能力，还可以作为重要的指标衡量经济性状。文献表明我国地方优质肉用鸡的标准屠宰率为80%以上，标准全净膛率为60%以上[12]，本试验中，4组的全净膛率均达到标准，益生菌组、藿香正气散组使全净膛率有明显提高，但甘草提取物组无明显影响；同样的益生菌组、藿香正气散组让产肉性能明显提高，其中藿香正气散组胸肌率、腿肌率最高，甘草提取物组无明显影响；益生菌组、藿香正气散组的腹脂率显著降低。三种替抗产品对雏鸡的主要实质器官指数都无不良的影响。

4.3 替抗产品对雏鸡免疫器官、血清抗体效价和免疫因子的影响

在考察家禽免疫状态时，可以用胸腺、脾脏及法氏囊指数来评价鸡的免疫状态[13]。胸腺、法氏囊和脾脏是禽类重要的免疫器官, 胸腺作为中枢器官反映细胞免疫指标，脾脏是禽类最大的外周免疫器官，法氏囊则是禽类特有的体液免疫器官, 脾脏会参与整个机体的细胞免疫和体液免疫。胸腺和脾脏免疫器官的发育状态及机能强弱，直接决定着禽类全身的免疫水平[14]。这些免疫器官在正常范围内增大说明功能增强，对维持机体的体液免疫功能有重要意义[15]。张瑞等[16]证明甘草残渣能促进番鸭免疫器官的生长；黄文清[17]研究表明，甘草颗粒可显著提高胸腺、脾脏和法氏囊的指数；马璐等[18]证明日粮中添加甘草多糖可以促进肉鸡免疫器官的发育，这可能与甘草多糖通过增强T 淋巴细胞表达、分泌和刺激细胞增殖，显示出对免疫器官的免疫调节作用有关；林显华等[19]证明芽孢杆菌能够增强肉鸡的免疫功能。目前有关藿香、白芷对免疫器官影响的报道较少。本试验对肉雏鸡使用替抗产品后，观察免疫器官的生长发育情况，对于胸腺指数，甘草提取物组、藿香正气散组明显提高，益生菌组无明显影响；脾脏指数，益生菌组、藿香正气散提明显提高，其中藿香正气散提取物组提高最明显，甘草提取物组无明显影响；对于法氏囊指数，甘草提取物组、藿香正气散组明显提高，益生菌组无明显影响。免疫器官重量的增加表明机体生长发育快，器官指数提高则意味着免疫系统成熟较快[20]，说明使用这三种替抗产品可促进肉雏鸡免疫器官生长发育、迅速成熟，肉雏鸡整体的免疫机能得到加强，使其抵抗病原微生物感染和各种应激的能力得到提高。

机体接受抗原产生抗体效价的高低就能体现鸡特异性体液免疫功能的高低。甘草多糖通过增强雏鸡的体液免疫功能，显著提高抗体水平，辅助疫苗提高抗体效价，试验表明甘草多糖能够提高新城疫疫苗的抗体水平[18]；推测甘草粗提物主要通过提高机体免疫力，从而抑制受病毒侵染的胸腺、脾脏萎缩病变，而间接起到抵抗病毒的作用[21]，与本次试验结果一致。藿香正气散对禽流感[22]、新城疫[23]均具有一定的抵抗作用，因藿香的主要成分黄酮类化合物具有抑制病毒生长增殖的作用，同样与本次试验中藿香正气散组对血清效价有较大提高的结果一致。芽孢杆菌已在多项试验中被证实会促新城疫的抗体效价显著提高，与本次试验结果一致，而结果中益生菌制剂对禽流感抗体效价无明显影响的结果与卢龙娣[24]的研究结果一致。

细胞因子包括了白细胞介素、干扰素、肿瘤坏死因子超家族、集落刺激因子等。而白细胞介素是动物机体内一类重要的细胞因子，在机体的免疫应答过程中发挥着重要作用[25]。IL-2 和TNF-γ属于Th1 细胞，其中IL-2 是机体免疫调节的核心物质，具有增强细胞免疫的作用；IFN-γ在机体体液免疫和细胞免疫中发挥重要作用，可以抑制炎症反应的发生，提高机体的免疫机能[26]。

很多植物多糖都能促进细胞因子分泌从而提高机体的免疫功能。甘草提取物中的甘草多糖可作用于IFN-γ分泌细胞，促使细胞分泌IFN-γ增多或活性增强，或增强T细胞、B细胞、NK细胞和单核巨噬细胞对IFN-γ的合成、分泌与活性，进而通过IFN-γ发挥其增强免疫的作用，将机体免疫水平上调，推测是甘草多糖调节免疫系统的有效途径[27-28]。藿香正气散对免疫因子的调节机制暂无报道，从本试验看，其对IL-2水平以及IFN-γ水平均呈现显著提高。据研究表明益生芽孢杆菌能够参与调节吞噬功能的一系列非特异性免疫细胞的活性和细胞因子的分泌，促进干扰素、补体成分等细胞因子的生成,从而增强机体的非特异性免疫机能[29]。Lee 等[30]发现在饲料中添加枯草芽孢杆菌能显著提高肉鸡的IL-1、IL-12 和IFN-γ水平，与本试验结果一致。说明三种替抗产品均能促进IL-2、INF-γ分泌增加而提高雏鸡的抗病能力，从而达到较高成活率。

5 结论

本试验通过在对肉雏鸡的基础日粮中添加三种不同类型的替抗产品，结果显示0.1%甘草提取物、0.1%的益生菌、0.1%的藿香正气散，都可以提高肉雏鸡生长性能，同时提高免疫器官指数和ND、H9N2 疫苗的抗体效价，促进IL-2 和INF-γ的分泌，可以在肉鸡生产中进行推广使用。