双特异性酪氨酸磷酸化调节激酶2在胃癌组织中表达及临床意义

侯铁伟， 张 成， 单永琪

北部战区总医院 普外科，辽宁 沈阳 110016

胃癌是我国发病率、病死率均较高的恶性肿瘤[1-2]。胃癌术后肿瘤复发和进展是患者的重要临床终点[3-5]。目前，肿瘤术后病理分期等相关参数可以预测胃癌患者的生存预后情况，但复发和进展患者仍较多。因此，寻找新的预后评估指标和治疗靶点尤为重要。双特异性酪氨酸磷酸化调节激酶2[dual-specificity tyrosine(Y)-phosphorylation regulated kinase 2，DYRK2]是DYRK家族成员之一[6]。近年来，多项研究表明，DYRK2在多种肿瘤中表达明显降低，导致肿瘤的发生发展[7-13]。但是目前，少见DYRK2在胃癌预后中的作用相关研究报道。本研究旨在探讨DYRK2在胃癌组织中的表达及临床意义。现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象 回顾性分析北部战区总医院普外科自2015年1月至2017年9月收治的100例胃癌手术患者的临床资料。获取患者的胃癌组织样本(n=100)及癌旁组织样本(n=30)。纳入标准：(1)首次确诊并行手术者；(2)术后病理证实为胃癌者；(3)具有完整的相关临床资料者；(4)仅诊断为胃癌者；(5)卡氏评分≥70分者。排除标准：(1)术后病理切缘阳性者；(2)具有自身免疫性疾病及其他恶性肿瘤病史者；(3)术前已经进行过放化疗等肿瘤治疗措施者；(4)姑息性手术者。

1.2 研究方法

1.2.1 试剂与仪器 试剂：PBS缓冲液、0.01 mol/L柠檬酸盐缓冲液、0.5 mol/L EDTA缓冲液、1 mol/L TBS缓冲液、酶消化液、3%甲醇-过氧化氢溶液、封裱剂。仪器：18 cm不锈钢高压锅或电炉或医用微波炉；水浴锅。

1.2.2 免疫组化 对胃癌组织及癌旁组织进行苏木精-伊红(HE)染色，在显微镜下选择最典型的特征在固定点进行标记[14]。使用DYRK2兔多克隆抗体(1:200，美国Proteintech，美国)进行免疫组化。采用双盲的方法，由两名经验丰富的病理科医师对组织切片进行检查。根据阳性染色细胞比例进行评分：0分，阴性；1分，阳性染色细胞比例≤25%；2分，阳性染色细胞比例25%～50%；3分，阳性染色细胞比例51%～75%；4分，阳性染色细胞比例>75%。染色强度评分：0分，阴性或无染色；1分，弱阳性；2分，中阳型；3分，强阳性。最后染色强度与阳性细胞百分比积分相乘，获得每个标本对应的最终分数，计算均数，将最终得分<8分的标本定义为DYRK2低表达。

1.3 观察指标 记录患者的总生存期(overall survival，OS)和无进展生存期(progression free survival，PFS)。PFS定义为首次确诊并手术至术后首次进展时间或患者死亡时间。

1.4 统计学方法 采用SPSS 22.0统计学软件对数据进行分析。计数资料以例(百分率)表示，组间比较采用χ2检验。Kaplan-Meier法分析患者OS和PFS。Cox回归模型分析影响胃癌患者预后的影响因素。采用R 3.1.2软件绘制列线图，构建预测模型[15]。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 DYRK2在胃癌组织及癌旁组织中表达情况 DYRK2在胃癌组织中表达上调(图1)。使用在线数据库GEPIA验证结果显示，胃癌组织DYRK2的mRNA表达水平显著高于正常组织，差异有统计学意义(P<0.05；图2)。

图1 DYRK2在胃癌组织及癌旁组织中表达(a.癌组织；b.癌旁组织；HE×400) 图2 GEPIA验证胃癌组织及正常组织DYRK2表达

2.2 DYRK2表达与临床病理特征关系 DYRK2表达与肿瘤大小、肿瘤分化程度、临床病理分期有相关性(P<0.05)，与性别、年龄、体质量减轻、癌胚抗原、血清白蛋白、肿瘤部位、浸润深度、是否化疗、远处转移、淋巴结转移、神经侵犯无相关性(P>0.05)。见表1。

表1 DYRK2表达与临床病理特征关系/例(百分率/%)

2.2 生存分析结果 Kaplan-Meier分析结果显示，DYRK2低表达患者中位OS与中位PFS分别为30个月、21个月，均高于DYRK2高表达患者的23个月、20个月，差异有统计学意义(P<0.05)。见图3。

图3 DYRK2低表达患者与DYRK2高表达患者OS、PFS比较

2.3 胃癌患者预后影响因素 DYRK2低表达、肿瘤分化、是否化疗是影响胃癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。见表2。

表2 胃癌患者预后影响因素分析

2.4 列线图构建 在Cox回归分析的基础上构建列线图，进行内部验证，同时构建预测模型，C-指数为0.886 8(95%可信区间0.838～0.936)。见图4。

图4 列线图构建预测模型

3 讨论

DYRK2是DYRK的家族成员之一，该家族中的部分成员已经被鉴定作为致癌基因参与肿瘤发生发展的多个过程，如DYRK1、DYRK1A、DYRK1B等[16-17]。但是，该家族也有部分成员的高表达与某些肿瘤的良好预后呈正相关，如DYRK2表达减少与肝癌的不良预后和奥沙利铂耐药有关[18]。Yamashita等[19]研究表明，DYRK2阳性表达组患者的5年无疾病存活率显著高于DYRK2阴性组。

预测结果及发现导致不良结果的生物学机制是癌症研究中的两个重要部分[20]。DYRK2参与了多种肿瘤的发生发展，如肝癌、神经胶质瘤、大肠癌等。但是，关于DYRK2在胃癌预后中的作用少见报道。本研究结果显示，DYRK2的mRNA表达在胃癌组织中上调；Cox多因素分析结果显示，DYRK2低表达、肿瘤分化和是否化疗均是影响胃癌的独立预后因素；但是Kaplan-Meier生存分析结果发现，与DYRK2低表达的患者相比，DYRK2高表达者OS和PFS更低，与相关研究报道[21]结果不一致。而另有研究表明，DYRK2作为肿瘤抑制因子，通过降解Snail调节癌症的侵袭和转移[7]，敲除DYRK2可以促进上皮间质转化和体内外癌症侵袭[11]。本研究在COX回归分析的基础上，绘制了列线图，进行了内部验证，对胃癌患者的3年存活率进行预测，在内部验证中，列线图C-指数为0.886 8(95%可信区间0.838～0.936)，提示此预测模型具有较好的准确性。

综上所述，DYRK2在胃癌组织中显著上调，可作为胃癌患者预后的独立预测因素，有必要进一步研究阐明其具体的分子机制。