血清AFP、AFP-L3、HSP90α表达水平在肝细胞癌诊断中的价值

段 云，杨颖卓，杨 雯，王 乔，徐蓉生

四川省肿瘤医院核医学科，四川成都 610041

肝细胞癌(HCC)在全球癌症病死率中排第4位，占所有癌症死亡人数的8.2%，在国内其主要风险因素是乙型肝炎病毒(HBV)[1-3]。HCC筛选是基于血清甲胎蛋白(AFP)及成像技术和组织学,在临床实践中许多医生使用AFP来诊断肝癌,但是多达40%的HCC患者中AFP水平是正常的，尤其是在疾病的早期阶段，这表明其灵敏度较低[4]。甲胎蛋白异质体(AFP-L3)能区分由于HCC或良性肝病引起的AFP升高，AFP-L3更特异性地诊断HCC[5-6]。热休克蛋白90(HSP90)是进化上高度保守的细胞内分子伴侣，通常在细胞应激反应中被诱导。HSP90家族由4个主要成员HSP90α、HSP90β、Grp94和TRAP1组成。HSP90α和HSP90β主要位于细胞质中，其他两种蛋白质分别主要位于内质网和线粒体基质中。由于HSP90α在调节信号传导，特别是在肿瘤细胞中的关键作用，已成为研究热点[7]。许多研究探讨肿瘤标志物AFP、AFP-L3在诊断HCC中的价值，但HCC与肝硬化(LC)患者的肿瘤标志物之间比较却较少报道[7-9]。本文通过对HCC患者与LC患者的肿瘤标志物AFP、AFP-L3、HSP90α及其联合检测的灵敏度，特异度等进行检测，并探讨上述3个肿瘤标志物在HCC诊断中的价值。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2017年1月至2019年10月在本院住院治疗的HCC患者191例(观察组)作为研究对象，其中男158例、女33例，年龄27～84岁，平均 (54.82±12.27)岁。纳入标准：(1)均经病理证实HCC；(2)无其他重要功能障碍。排除标准：(1)不符合纳入标准；(2)转移性肝癌；(3)合并有其他恶性肿瘤；(4)处于妊娠期或哺乳期的女性。另选取同期的28例LC患者作为对照组，根据组织学检查或门脉高压检测结果诊断LC，对照组患者接受了影像学检查(MRI、B超和CT)已排除HCC。所有患者均检查了其临床症状及血清肿瘤标志物水平。另外，在诊断时没有患者接受任何抗肿瘤治疗或手术切除治疗。临床特征是从电子记录中获得的。根据巴塞罗那临床肝癌(BCLC)分期对患者进行分类，分为BCLC-A期(早期,包含最早期0期)、BCLC-B期(中期)、BCLC-C期(晚期)、BCLC-D期(终末期)[8]。本研究经本院伦理委员会批准。

1.2方法 所有受检者清晨空腹抽取静脉血3 mL，分离血清，采用罗氏诊断医疗设备(上海)有限公司cobas e 411全自动化学发光免疫仪测定AFP、AFP-L3水平，如果样品的AFP、AFP-L3>1 210 ng/mL，则根据制造商的说明根据先前的结果手动稀释原始样品。采用烟台普罗吉生物科技发展有限公司酶联免疫吸附试验测定HSP90α水平。所用检测试剂均为相应配套试剂，严格按照说明书操作。各指标的正常参考范围：AFP 0～7 ng/mL、AFP-L3<1 ng/mL为阴性，AFP-L3≥1 000 ng/mL为阳性，其余由AFP-L3/AFP比值判定，HSP90α<82.06 ng/mL。

2 结 果

2.1两组患者临床病理特征和肿瘤标志物水平比较 两组病因学中HBV、酒精、原因不明、丙型肝炎病毒(HCV)占比比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)水平高于观察组，对照组清蛋白(ALB)水平低于观察组，差异均有统计学意义(P<0.05)；两组丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)。两组肿瘤标志物AFP、AFP-L3、HSP90α水平比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1。

2.2肿瘤标志物AFP、AFP-L3和HSP90α的诊断HCC价值比较 3种肿瘤标志物的ROC曲线分析结果显示，AFP+AFP-L3+HSP90α联合检测诊断HCC的曲线下面积(AUC)最大，高于各项指标单独检测。见表2、图1。在191例HCC患者中BCLC-A期96例(50.26%)，BCLC-B期52例(27.23%)，BCLC-C期34例(17.80%)，BCLC-D期9例(4.71%)。

图1 肿瘤标志物的AUC值比较

2.3各肿瘤标志物对HCC患者BCLC分期的诊断能力比较 血清AFP-L3诊断HCC患者BCLC-A期的AUC最大，高于其他指标。3个肿瘤标志物在BCLC-A期中HSP90α灵敏度最高，AFP-L3特异度最高，见表3。ROC曲线分析评估AFP、AFP-L3、HSP90α在确定HCC 患者BCLC各分期与LC的诊断效率，AFP、AFP-L3、HSP90α诊断BCLC-D期的AUC大于BCLC-C期AUC；AFP、AFP-L3、HSP90α诊断BCLC-C期的AUC大于BCLC-B期AUC；AFP、AFP-L3、HSP90α诊断BCLC-B期的AUC大于BCLC-A期AUC，见图2。

表1 各组患者临床病理特征和肿瘤标志物水平比较

续表1 各组患者临床病理特征和肿瘤标志物水平比较

表2 AFP、AFP-L3、HSP90α诊断HCC价值的ROC曲线分析

表3 AFP、AFP-L3、HSP90α诊断HCC患者BCLC-A分期的ROC曲线分析

注：A为BCLC-A期HCC与LC 的ROC曲线分析；B为BCLC-B期HCC与LC的ROC曲线分析；C为BCLC-C期HCC与LC的ROC曲线分析；D为BCLC-D期HCC与LC的ROC曲线分析。

3 讨 论

慢性乙型肝炎被认为是LC和HCC的主要原因[9-10]。GIANNINI等[11]研究了肝癌患者AFP升高的决定因素,这项研究表明，病毒性感染与肝癌患者的AFP升高独立相关。本研究中，HCC患者与对照患者之间的感染可能是由HBV引起的。

以前研究证实了AFP、AFP-L3作为检测HCC的肿瘤标志物的价值，而且LC患者中AFP、AFP-L3的升高是发展为HCC的危险因素[12-14]。HSP90α被广泛识别为具有调节致癌蛋白的构象、稳定性和功能的作用，并且它参与细胞增殖、凋亡、细胞周期进程、迁移和侵袭，在HCC细胞、血清和组织中的高表达，与肝癌转移行为之间有一定的相关性[15]。

本研究中发现AFP-L3是区分HCC和LC的最佳肿瘤标志物，与单独检测肿瘤标志物相比，AFP+AFP-L3+HSP90α联合检测的诊断价值明显更高，可提高LC患者HCC的诊断准确性，与其他研究报道结果一致[16]。因此，推测血清AFP+AFP-L3+HSP90α联合检测有助于区分诊断HCC和LC。本研究中联合检测诊断性能不高可能是与LC患者比较，且部分LC患者的AFP、HSP90α水平升高有关。

本研究中，研究者重点比较3个肿瘤标志物对LC和BCLC-A期HCC的诊断能力，3个肿瘤标志物在BCLC-A期中HSP90α灵敏度最高，AFP-L3特异度最高，与先前的研究结果一致[5-6]，AFP-L3水平能区分肝脏良性病变与HCC的BCLC-A期病变。此外，本研究分析了血清AFP、AFP-L3和HSP90α水平与BCLC分期比较，随着其BCLC分期发展，AUC值越来越大，诊断能力越来越明显。

近年来诊断HCC的肿瘤标志物较多，除了常见AFP、AFP-L3外，还有异常凝血酶原、骨桥蛋白等对其诊断有帮助[17]。文献[17]还建议在良性结节对HCC的鉴别诊断中，AFP-L3比单独使用AFP更有用，同时对于LC患者，建议采用动态CT或动态MRI进行检测。本研究有一些不足：它为回顾性设计，数据在单个中心获得，研究人群小，入组患者病因学占比不同。

AFP、AFP-L3和HSP90α 肿瘤标志物联合检测可提高HCC诊断性能，在BCLC-A期AFP-L3是区分HCC和LC病变较好的指标，随着其BCLC分期的发展，肿瘤标志物AFP、AFP-L3和HSP90α的诊断能力越明显。