有毒蜜源植物博落回花粉颗粒电镜扫描观察

姚丹 张锦华 袁扬 赵恬 张定红 徐祖荫 王胤晨

（1 贵州省现代农业发展研究所；2 贵州省农科院畜牧兽医研究所；3 贵州省养蜂学会，贵阳 550006）

1 引言

博落回（学名：Macleaya cordata(Willd.)R.Br.）是罂粟科，博落回属，别名号筒杆、喇叭筒、空洞草等。茎光滑呈绿色，多白粉；叶片宽卵形或近圆形；裂片半圆形、方形，边缘波状[1]；大型圆锥花序多花，顶生和腋生，花浅黄色，雄蕊花丝丝状，花药条形[2]；每年6～11月开花结果。喜生长于温暖湿润的山林边缘，路边、二荒地中。主要分布于我国长江以南，南岭以北，海拔150～1000 m 的地区，分布不均，如贵州东部地区较为常见，而西部地区较少[3]。

博落回全草有大毒[4,5]，不可内服。植株及花蜜、花粉皆有毒，含血根碱、白屈菜红碱、博落回碱等[6-8]。20世纪80年代，贵州省梵净山区曾发生过三家夏季食蜜中毒死亡的事件，这三家蜂蜜中，昆明山海棠（有毒蜜源）成分检出均呈阳性，其中一家蜂蜜中还检出有博落回花粉，占比为40%～80%[9]。人中毒后主要为轻者出现口渴、头晕、恶心、呕吐、胃烧灼感及四肢麻木、乏力，重者出现烦躁、嗜睡、昏迷、心律失常甚至死亡[5]。

博落回花粉量大，每年开花时间正值外界缺粉季节，蜜蜂大多会采集其花粉。本次研究将夏季收集到的博落回花粉，通过扫描电镜观察花粉形状，丰富有毒蜜源植物的鉴定标记，同时为养蜂实践生产提供理论基础。

2 材料和方法

2.1 实验材料

博落回花粉由贵州省畜牧兽医研究所提供。实验时间：2020年6～10月。

2.2 实验方法

将采集到的新鲜花粉投入电镜固定液（厂家：Servicebio，货号：G1102）固定，并用真空泵抽气直至沉底，室温放置2 小时，0.1M 磷酸缓冲液PB（pH7.4）漂洗3 次，每次15 分钟；随后用1%的锇酸·0.1M 磷酸缓冲液PBS（pH7.4）室温（20℃）固定5 小时。0.1M磷酸缓冲液PB（pH7.4）漂洗3 次，每次15 分钟。组织依次入30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%酒精上行脱水，每次1 小时。丙酮（厂家：国药集团化学试剂有限公司）：812 包埋剂（厂家：SPI，货号：90529-77-4）=3∶1 渗透4 小时，将样品插入包埋板后37℃烤箱过夜；60℃烤箱聚合48 小时；超薄切片机切片60～80 nm 超薄切片（厂家：Leica，型号：Leica UC7）；铀铅双染色（2%醋酸铀饱和酒精溶液，枸橼酸铅，各染色15 分钟），切片（厂家：Daitome，型号：Ultra 45°）室温干燥过夜；透射电子显微镜（厂家：hitachi，型号：HT7700）下观察，采集图像分析。

3 结果与分析

电镜在放大1000x 时的扫描结果，博落回花粉颗粒有的呈圆球形、长球形等，呈圆球形的大都呈串珠状相连，呈长球形的大都呈簇状，花粉表面有突起，形似羊肚菌（图1-1）；当电镜放大4000x 时，扫描结果为博落回花粉颗粒呈圆球形，表面布满蜂窝状的小孔（图1-2）；对花粉颗进行粒表面切片后，在扫描电镜下放大20000x 时，其花粉表面纹饰呈结绳状或姜块状，或核桃表面的突起（图1-3），期间有许多小孔。

图1 博落回花粉颗粒扫描电镜结果

4 讨论

蜜蜂能够采集，但其花粉或花蜜对蜜蜂或人有毒的蜜粉源植物统称为有毒蜜源植物[11]。判断一种植物是否是有毒蜜源植物的标准，就是其花蜜、花粉是否对人或蜜蜂有毒。误食有毒蜂蜜致人中毒死亡事件，已见报道的有云南（1977、1983、2005～2013）、广西（1972、2014）、贵州（1988）、广东（1992）、重庆（2011、2015）、湖北（2015）等省市[12]，因此，对特定地区（有毒蜜源分布区）、特定时间（夏季）采收到的蜂蜜，应当进行鉴定。

蜜蜂在采集某种植物的花蜜时，一定会混入少量该种植物的花粉，所以花粉鉴定也是一个重要方法。王宪曾[13]曾对雷公藤、钩吻的花粉通过扫描电镜的观察，进行过报道描述。这次对我省发生过蜂蜜中毒的博落回花粉开展了电镜观察进一步丰富了花粉鉴别有毒蜂蜜的鉴定标记，同时，对蜂蜜安全检测具有重要的指导意义。