胃肠胰神经内分泌肿瘤患者血清CgA、PKB的水平及其临床意义

刘 倩 马艳庆 陈 宁 陈晓亮 侯俊杰 杨鹿鸣 李军娜

胃肠道胰腺神经内分泌肿瘤(gastroenteropancreatic neu-roendocrine neoplasm，GEPNEN)是一组起源于消化道弥散神经内分泌系统的异质性肿瘤群，具有生长缓慢、低度恶性，直至高转移性等的恶性生物学行为[1-2]。目前，临床上对此疾病的诊断以影像学检查、某些相关因子检测为主[3]。蛋白激酶B(Protein kinase B，PKB)，是一种存在于胞质中的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，在调控细胞生存、凋亡中发挥着重要作用，与许多肿瘤的发生发展存在关联[4-5]。嗜铬粒蛋白A(ChromograninA,CgA)可作为1种特征性标志物用于肿瘤患者的诊断和随访[6]。CgA充当具有多个蛋白水解位点的前激素，允许产生具有各种生理功能的多种肽，它广泛分布于支气管和胃肠道和皮肤的NE系统中。研究表明[7]血清CgA的水平与肿瘤负荷相关并可预测患者的存活率，一些相关研究[8]已经阐明了血浆CgA水平与某些肿瘤严重程度之间的相关性。但关于CgA与GEPNEN之间的关系的研究很少，本次试验将GEPNEN患者作为研究对象，分析PKB、CgA与GEPNEN病理特征的相关关系。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取我院在2016年1月至2019年2月收治的胃肠胰神经内分泌肿瘤患者87例作为观察组，纳入标准：①均经病理学确诊；②未接受放化疗等抗肿瘤治疗；③患者及家属知情同意。排除标准：合并有其他恶性肿瘤、肝肾功能障碍、免疫系统疾病等。选取同期健康体检者80例作为对照组。2组研究对象的性别、年龄比较，无统计学差异(P>0.05)，见表1。

表1 2组临床资料上的比较

1.2 检测方法

用免疫放射分析法检测血清中CgA水平，清晨采集所有受试者空腹时的静脉血5 ml，静置1 h后，3 000 r/min 离心10 min，分离血清，置于-20 ℃冰箱中保存，待测。使用法国 CISBio的CgA-RIACT试剂盒，操作严格按照说明书进行。

ELISA法检测入组患者血液中PKB水平：抽取所有受试者空腹时的静脉血5 ml，1 500 r/min 离心10 min后取上清，保存于-20 ℃冰箱中待测。试剂盒常温放置0.5 h，按试剂盒说明书稀释标准品，每个浓度均设3个复孔，加样、配液、洗涤、显色、终止，最后用酶标仪测量在450 nm波长处的吸光值，绘制线性回归方程，可计算出样品浓度。

1.3 统计学方法

本文相关的数据采用了SPSS 22.0软件包进行分析，其中得出的计量资料采用均数±标准差描述，行t检验，多组间比较行方差分析，两两行LSD-t检验；计数资料行卡方检验；相关性采用Pearson相关分析。检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 2组血清CgA、PKB水平比较

观察组血清CgA、PKB水平明显高于对照组，具有统计学差异(P<0.05)，见表2。

表2 2组血清CgA、PKB水平比较

2.2 GEPNEN患者血清CgA、PKB水平与临床病理特征关系

低分化、肿瘤大小>3 cm患者血清CgA和 PKB明显高于中高分化、肿瘤大小≤3 cm患者(P<0.05)。见表3。

表3 血清CgA、PKB水平与临床病理特征关系

2.3 相关性分析

将观察组血清CgA、PKB进行相关分析，结果显示：血清CgA与PKB呈正相关(γ=0.438，P<0.05)，见图1。

图1 相关分析图

3 讨论

神经内分泌肿瘤是1种不常见的肿瘤，起源于肽能神经元及神经内分泌细胞的一组异质性肿瘤，有研究显示，胃肠道的神经内分泌信号传导系统的缺陷和异常活化与肿瘤发生、发展及预后有着密切的关系。

CgA 属于分泌蛋白家族，存在于内分泌组织中的酸性糖蛋白，其由肽激素和神经肽共同分泌。已有研究[9]阐明了血清CgA水平与疾病严重程度之间的相关性，可作为内分泌肿瘤的组织、血清标志物。

PKB，也称为Akt，是人激肽组中的多面激酶之一，PKB信号可反映细胞增殖相关信号，在关于乳腺癌、肺癌等的研究中已得到证实[10-11]。它以3种亚型存在，PKB在磷酸肌醇3激酶(Phosphoinositide 3-kinase,PI3K)介导的各种恶性肿瘤中起着重要作用。研究发现，不同的PKB亚型在肿瘤细胞侵袭和迁移中各发挥着作用[12]。PKB激活在上皮间充质转化过程中起着中心作用，这是癌细胞侵袭和迁移所必需的细胞程序。然而，每一种PKB亚型的差异行为已经在上皮间充质转换的调节中表现出来。最近的研究表明[13]，PKBα(akt1)通过抑制凋亡机制或通过限制肿瘤侵袭作为促癌因子在肿瘤发生中起着相互冲突的作用。PKBβ(akt2)促进细胞迁移和侵袭，同样，PKBγ(akt3)也促进肿瘤迁移。但目前对CgA与PKA在GEPNEN中的研究较少。本研究试图分析CgA与PKA如何在GEPNEN中作用以及其的相关性，探究其临床意义。

本研究结果显示，观察组血清CgA、PKB水平明显高于对照组，越来越多的研究表明血清CgA水平与肿瘤负荷呈正相关。肿瘤定位可以确定患者血清CgA水平的总量。PKB是调控细胞生存与凋亡的重要信号物质之一，同人类多种肿瘤的发生发展密切相关。血清CgA升高的检测表明肿瘤的恶性也可能是由于神经内分泌细胞的增殖，这通常与预后不良有关，并且可能需要不同的治疗方法。因此，GEPNEN患者治疗期间监测血清PKB和血清CgA是重要的。

研究显示，低分化、肿瘤大小>3 cm患者血清CgA、PKB高于中高分化、肿瘤大小≤3 cm患者；PKB信号通路被激发，在GEPNEN的发生发展中担任着重要的角色。如PKB在患者中过度表达，那么其恶性程度就较高，且影响预后。在其他相关研究中也发现[14]，PKB信号通路的表达情况能够衡量出患者肿瘤的恶性的程度，因此其对肿瘤患者的诊断、治疗及预后都存在一定的参考价值。CgA是在神经内分泌细胞中发现的糖蛋白，可用作神经内分泌肿瘤的肿瘤标志物。在疾病严重程度高的患者中发现血清CgA增加，对于患有GEPNEN的患者，血清CgA比血清PKB早得多，血清CgA的早期升高为GEPNEN患者提供了早期信号，这一先进信号可以为疾病进展到致命阶段之前的治疗变化创造一个关键窗口。单独监测血清PKB可能无法提供足够的疾病指征。血清CgA升高的检测表明肿瘤的恶性也可能是由于神经内分泌细胞的增殖，这通常与预后不良有关，并且可能需要不同的治疗方法。在接受激素治疗的患者中，通过早期观察到血清CgA的升高预测耐药性，以便在发病早期择取合适的治疗方法[15]，通常，如果仅监测血清PKB，则检测发生得太晚，无法更改治疗方法。血清CgA与PKB呈正相关，两种指标联合检测对GEPNEN的诊断及治疗均有重要的临床意义。

本研究结果提示，GEPNEN患者血清中CgA、PKB呈现高表达，CgA、PKB与肿瘤侵袭、转移密切相关。在下一步的研究中，需要适当扩大样本含量，进一步从分子生物学、细胞学等方面确定CgA、PKB蛋白与GEPNEN的关系，为深入确定 CgA、PKB能否作为GEPNEN的诊断分子标志物提供依据。