OTUD1在非小细胞肺癌中的表达及其与临床病理特征的相关性

王延朋 王启船 柳云飞 谢 阳 陈涛利 高新雅

目前，随着环境恶化、吸烟人口及职业暴露的上升，肺癌发病率已居世界癌症首位，其中75%～80%患者为非小细胞肺癌(NSCLC)，因其5年生存率低，病死于浸润转移和复发的患者占90%以上，其中，NSCLC不良预后的重要原因为相关基因异常表达[1-2]。泛素-蛋白酶体系统(UPS)是细胞内蛋白降解途径，其降解途径属于可逆过程；去泛素化酶(DUBs)在细胞生长、凋亡、遗传性肿瘤、神经退行性疾病等中发挥着重要作用，其主要成员为卵巢癌结构域蛋白酶(OTUD)，在人类脑、肺、肾等组织内有广泛表达[3-4]。然而，肺癌组织病理与OTUD1基因表达相关性的报道尚不多见。本研究旨在探究OTUD1在NSCLC中的表达情况。现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年2月至2019年10月在南阳市第二人民医院治疗的70例NSCLC患者，选取其癌组织石蜡标本(n=70)及对应癌旁组织(n=70)。男性44例，女性26例；年龄50～75岁，平均(58.05±0.20)岁；病理类型：腺癌32例，鳞癌32例，其它6例；TNM分期：Ⅰ期10例，Ⅱ期17例，Ⅲ期20例，Ⅳ期23例；40例有吸烟史，25例有淋巴结转移。所有标本均于手术中采集。本院医学伦理委员会审核并通过本研究。

1.2 免疫组织化学染色及评分

NSCLC及癌旁正常组织切片均应用免疫组织化学S-P法对其进行染色。滴加一抗兔抗人OTUD1抗体4 ℃过夜，室温将其置于生物素化的二抗辣根过氧化物酶中继续孵育30 min。DAB显色，苏木精复染，封片后观察并摄片。由2名专业病理科医生独立评估免疫组织化学结果，根据切片中细胞是否显色、深浅评分，对染色强度进行详细的分类：无着色为0分；浅黄色为1分；深黄色为2分；棕褐色为3分。计算每100个细胞中阳性细胞所占百分比，其中占比<1/3为1分；>1/3～2/3为2分；>2/3为3分。2组评分相乘，阴性(-)<1分；阳性(+)2～4分；强阳性(++)>5分。OTUD1低表达0～4分，OTUD1高表达5～7分。

1.3 观察指标

(1)比较肺癌组织、癌旁正常组织OTUD1表达水平。(2)采用COX回归分析性别、年龄、吸烟与否、淋巴结有无转移、TNM分期、病理类型与OTUD1蛋白表达的相关性。(3)经Kaplan-Meier及COX回归分析影响患者预后的相关因素。

1.4 统计学方法

使用SPSS 22.0分析数据。计数资料使用频数表示，卡方检验进行比较；使用Kaplan-Meier及COX进行相关性分析。P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 肺癌组织、癌旁正常组织OTUD1表达水平比较

肺癌组织的OTUD1高表达率为48.57%(34/70)，显著高于癌旁正常组织的5.71%(4/70),差异有统计学意义(χ2=35.840，P<0.05)。

2.2 OTUD1与非小细胞肺癌临床病理特征的关系

非小细胞肺癌淋巴结转移者组织中OTUD1表达率高于无淋巴结转移者，TNM分期Ⅰ～Ⅱ者低于TNM分期Ⅲ～Ⅳ者(P<0.05)。见表1。

表1 不同临床特征间OTUD1表达水平比较/例

2.3 NSCLC患者生存的影响因素分析

经Kaplan-Meier及COX回归分析显示：淋巴结转移、TNM分期、OTUD1表达是患者生存的影响因素(P<0.05)，见图1。见表2。

表2 NSCLC患者生存的影响因素分析表

图1 NSCLC患者OTUD1表达情况与生存分析图

3 讨论

随着外科手术方式的改进及综合治疗方案的实施，以及分子生物靶向药物的出现，肺癌患者的临床治疗取得较大的进展，但总体5年生存率仍不乐观，因此倡导个体化和精准化治疗成为目前的主流治疗模式[5-6]。

近几年，临床广泛关注泛素化酶与DUBs对于细胞周期调控及其与肿瘤发生的关系[7]。OTUDs属于去泛素化酶家族一个重要成员，OTUD1为最早在体外证实可以发挥去泛素化酶活性作用的OTUD蛋白，包含1个由130个氨基酸组成的OTUD结构域，且高度保守[8-10]。去泛素化酶可将泛素从泛素连接底物上移除，发挥调节细胞的增殖、周期进程、转录激活及信号传导等过程。目前关于OTUD1作用机制有以下两种观点，一种观点认为[11]，OTUD1可诱发p53依赖的细胞凋亡及抑制细胞增殖；另一种观点认为[12]，OTUD1可以与SMAD2/3结合，被抑制磷酸化的SMAD2/3可以通过蛋白酶体途径进行降解。姜维娜等[13]研究报道，OTUD1在结肠癌组织中的表达较癌旁组织高3.5倍，癌组织中OTUD1的蛋白表达水平也明显高于癌旁组织。段菲[14]、熊金升[15]等分别在乳腺癌及胶质细胞瘤中发现OTUD1在癌细胞组织中高表达的生物学行为。OTUD1高表达可作为预后不良的标志物，其在卵巢癌和胃腺癌中促进癌细胞的侵袭、转移，通过抑制RAS泛素化促进肺癌的发展。本次研究证实了OTUD1在NSCLC组织中的表达显著高于正常肺组织，然而，其与其他临床及病理特征之间的相关性不显著，表明在NSCLC的发生发展中OTUD1高水平与之有着重要关系，上述研究的发现，可为以后关于肺癌的个体化及精准化治疗提供新的治疗方向。国外学者研究报道[16]，OTUD1在结直肠癌组织中的表达水平与TNM分期、淋巴结转移、肿瘤浸润深度呈正相关，且可作为无进展生存期和总生存期的一个独立预后因素。本次研究发现淋巴结转移、TNM分期及OTUD1高表达与患者的生存质量相关，与上述研究报道相一致。本次研究中，与OTUD1低表达患相比，OTUD1高表达患者预后较差，进一步表明，OTUD1高表达患者可能为预后高危人群。本研究对OTUBl蛋白在NSCLC中的作用机制提供了初步的实验依据，相信进一步深入研究将为NSCLC的诊治及新型化疗药物的研制提供新的方向。

综上，OTUD1在NSCLC组织中高表达，与不良预后显著相关，可以作为评估预后的独立因素，并为NSCLC的生物靶向治疗提供了一个新的思路。