牙龈癌组织中VEGF和PTEN的表达与患者血清中炎性指标水平的相关性

王祥军 王 进 孟娜娜

牙龈癌是临床常见口腔恶性肿瘤之一，具有较强的颈淋巴结转移能力，因此治愈难度较大[1]。临床上通常采用手术方式彻底切除病变组织以达到治疗的目的，但术后并发症发生率较高，从而对治疗效果和患者手术预后造成不利影响[2-3]。相关研究表明：不良饮食习惯、口腔疾病史、HPV感染以及不良修复体的使用均增加了牙龈癌的发生风险[4-5]。相关研究表明：血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)及张力蛋白同源基因(phosphatase and tensin homolog，PTEN)与牙龈癌的发生和进展密切相关[6]。本研究通过分析不同分化程度牙龈癌患者癌组织中VEGF和PTEN的表达与患者血清中炎性指标的相关性，从而为牙龈癌诊断提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择60例2017年1月至2020年1月于我院进行牙龈癌根治术的患者为研究对象，根据其癌组织分化程度将其分为高分化组(27例)、中分化组(18例)和低分化组(15例)，另取癌旁组织作为对照组(60例)。4组患者一般资料见表1，差异均无统计学意义(P>0.05)，可进行比较。本研究经本院伦理委员会批准，所有患者及其家属均知情同意，并签署同意书。

表1 患者一般资料

1.2 方法

(1)免疫组织化学染色(SP法)检测牙龈癌组织中VEGF和PTEN的阳性表达情况：采用免疫组化试剂盒(两步法)、DBA显色试剂盒和鼠抗人VEGF和鼠抗人PTEN单抗，按照试剂盒说明书操作，光学显微镜下观察并拍照。阳性染色结果采用双盲法，由本院病理科两位医师独立进行评判：VEGF在癌组织细胞膜或胞质中呈棕黄色；PTEN则在胞质或细胞核内呈棕黄色，单个切片中以上两个指标表达阳性面积分别≥25%即判定为阳性；Motic Med 6.0软件分析图像中积分光密度值(integrated optical density，IOD)[6]。(2)牙龈癌根治术前1 d清晨，所有患者空腹状态抽取静脉血5 ml，室温下离心分离血清，人ELISA试剂盒分别检测各组患者血清中IL-10和TNF-α的含量。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 各组患者牙龈癌组织中VEGF和PTEN的阳性表达情况比较

各组患者牙龈癌组织中VEGF和PTEN的阳性表达率比较差异有统计学意义(P均<0.05)。与对照组、中分化组和高分化组相比，低分化组VEGF阳性表达率显著增加，PTEN阳性表达率显著减少(P均<0.05)；对照组、中分化组和高分化组VEGF阳性表达率相比差异不具有统计学意义(P均>0.05)；中分化组和高分化组PTEN阳性表达率均较对照组显著下降，而该2组相比差异不具有统计学意义(P均>0.05)。见表2。

表2 各组患者牙龈癌组织中VEGF和PTEN的阳性表达结果比较(例，%)

2.2 各组患者牙龈癌组织中VEGF和PTEN表达的IOD值比较

各组患者牙龈癌组织中VEGF和PTEN表达的IOD值比较差异有统计学意义(P均<0.05)。与对照组相比，高、中、低分化组牙龈癌组织中VEGF表达的IOD值均显著增加，PTEN表达的IOD值均显著降低(P均<0.05)；与高分化组相比，中、低分化组牙龈癌组织中VEGF表达的IOD值均显著增加，PTEN表达的IOD值均显著降低(P均<0.05)；与中分化组相比，低分化组牙龈癌组织中VEGF表达的IOD值均显著增加，PTEN表达的IOD值均显著降低(P均<0.05)。见表3。

表3 各组患者牙龈癌组织中VEGF和PTEN表达的IOD值比较

2.3 各组患者血清中炎性因子含量比较

各组患者血清中炎性因子IL-10和TNF-α含量比较差异有统计学意义(P均<0.05)。与对照组相比，高、中、低分化组患者血清中IL-10含量均显著降低，TNF-α含量均显著增加(P均<0.05)；与高分化组相比，中、低分化组患者血清中IL-10含量均显著降低，TNF-α含量均显著增加(P均<0.05)；与中分化组相比，低分化组患者血清中IL-10含量均显著降低，TNF-α含量均显著增加(P均<0.05)。见表4。

表4 各组患者血清中炎性因子含量比较

2.4 相关性分析

相关性分析结果显示：VEGF表达与IL-10含量呈显著负相关(γ=-0.994，P=0.003)，与TNF-α含量呈显著正相关(γ=0.990，P=0.005)；PTEN表达与IL-10含量呈显著正相关(γ=0.933，P=0.034)，与TNF-α含量呈显著负相关(γ=-0.949，P=0.026)。

3 讨论

牙龈癌是发病率、转移率和复发率均较高的口腔恶性肿瘤之一，目前该肿瘤无靶向药物可用于治疗，虽手术治疗有效率较高，但预后不佳[7]。因此牙龈癌发病机制及诊断的相关研究对其精准治疗具有重要意义。

血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是刺激血管生成的细胞因子之一，通常在癌组织中高表达[8]，目前其受体酪氨酸激酶抑制剂(VEGFR-TKIs)的使用已使得各种肿瘤类型患者的临床结局得到了显着改善[9]。磷酸酶和张力蛋白同源物(phosphatase and tensin homolog，PTEN)是一种抑癌基因，是人类癌症遗传缺陷的最常见靶标之一，参与细胞增殖、分化、凋亡等一系列生理病理过程[10-11]。牙龈癌相关研究显示，不同分化程度的牙龈癌组织中PTEN甲基化和蛋白表达均存在显著差异[12]。牙龈癌高分化是指癌细胞分化程度接近于正常细胞，成熟度高，而高分化牙龈癌其恶性肿瘤级别低，恶性程度低，属于早期，以手术切除为主。本研究对不同分化程度牙龈癌患者癌组织中VEGF和PTEN表达进行检测和比较，结果显示：与对照组、中分化组和高分化组相比，低分化组VEGF阳性率显著增加，PTEN阳性率显著减少，中分化组和高分化组PTEN阳性率均较对照组显著增加(P均<0.05)，其余分组以上两个指标相比差异不具有统计学意义(P均>0.05)，表明随着肿瘤分化程度的降低(即肿瘤恶性程度的增加)，VEGF阳性的患者例数逐渐上升，PTEN阳性患者例数逐渐下降。而与对照组相比，高、中、低分化组牙龈癌组织中VEGF表达的IOD值均显著增加，PTEN表达的IOD值均显著降低(P均<0.05)；与高分化组相比，中、低分化组牙龈癌组织中VEGF表达的IOD值均显著增加，PTEN表达的IOD值均显著降低(P均<0.05)；与中分化组相比，低分化组牙龈癌组织中VEGF表达的IOD值均显著增加，PTEN表达的IOD值均显著降低(P均<0.05)，表明：随着肿瘤分化程度的降低(即肿瘤恶性程度的增加)，癌组织中VEGF表达显著增加，PTEN表达显著降低。与上述前人研究结果一致。另外，本研究中，牙龈癌患者血清中炎性指标研究结果显示：患者血清中抗炎因子IL-10的含量随肿瘤分化程度的降低而显著降低，促炎因子TNF-α的含量随肿瘤分化程度的降低而显著增加(P均<0.05)，且相关性分析结果显示：VEGF表达与IL-10含量呈显著负相关，与TNF-α含量呈显著正相关(P均<0.05)，PTEN表达与IL-10含量呈显著正相关，与TNF-α含量呈显著负相关(P均<0.05)。以上表明：炎症因子与牙龈癌的发生、分化及进展密切相关，与前人相关研究结果一致[13-14]，因此可考虑将牙龈癌患者血清中炎性因子水平变化作为癌症诊断和预测的参考指标，也可将其用于对牙龈癌术后患者预后的评估。

另外，本研究不足之处在仅分析了炎性因子水平变化对牙龈癌的预测价值，并未深入分析其判定具体数值范围，需在后续扩大样本量进行深入探讨。总而言之，牙龈癌患者血清中炎性因子含量与癌组织中VEGF和PTEN的表达具有显著相关性，因此患者血清中炎性因子变化可能与牙龈癌发生、进展相关，也可能一定程度反映患者的预后。