蜜蜂人工授精技术（二）——蜜蜂人工授精设备与器材

薛运波│文

1.设备器材

必需有的设备器材包括蜂王人工授精仪、电子天平、体视显微镜、生物显微镜、蒸馏水器、血球计数板、酸度计、离心机、紫外线灭菌灯、高压灭菌锅、CO2钢瓶、气体洗瓶、常用玻璃器皿、注射器、医用方盘、手术剪刀、镊子、雄蜂飞翔笼、混精设备等。

图1 授精仪和体式显微镜

2.人工授精仪附件

蜜蜂人工授精需要制备的器材有背钩、腹钩、探针、微量进样器、授精针头、诱入管、麻醉管、通气活塞、CO2钢瓶、气体洗瓶、雄蜂飞翔笼等。

（1）背钩、腹钩和探针：背钩、腹钩、探针是打开蜂王背腹板及阴道的附件，均是用直径1～2mm不锈钢丝手工制作而成，首先把不锈钢丝用什锦锉加工成毛坯，然后用油石磨去锉痕，再用天然油石进行加工，直至加工到合适的尺寸为止，最后用直尖镊子及钳子加工成需要的形状。

（2）精液注射器：有麦肯森设计膜片式、微调螺旋式、水压式和柱塞式微量进样器。目前国外使用较多的是麦肯森注射器，国内使用较多的是l00μl微量进样器。

（3）授精针头：一般情况下，采集雄蜂精液和给蜂王人工授精均使用同一型号的授精针头，习惯上人们均称之为授精针头。授精针头有麦肯森式有机玻璃针头、不锈钢针头、玻璃针头、聚乙烯针头，无论何种材料的授精针头其针尖尖端外径不大于0.3mm，内径不小于0.17mm。

麦肯森式授精针头是用有机玻璃材料经机器加工而成，其优点是透明，能够看到采集精液情况；针尖圆锥形，授精时不易使精液外溢，授精成功率较高，缺点是授精针头容纳精液量较少，安装、拆卸、清洗比较麻烦，成本较高。

不锈钢授精针头是选择外径0.27mm、内径0.20mm 的4 号头皮针为材料手工制作而成。加工方法是将4 号头皮针用什锦挫从中部截断，然后在天然油石上把针尖磨成半球状，在磨制授精针头之前在针头管芯内插入一根铁丝，以防在磨制过程中堵塞针芯。磨制好的授精针头后部用胶管与微量进样器相接，再用玻璃管或不锈钢丝加固使授精针头与微量进样器的中心线在同一条直线上。不锈钢授精针头的优点是坚固耐用，针头上能够加工上进针刻度，便于掌握进针深度，该授精针头易于加工，针尖容易磨制成半球状，不易损伤蜂王。缺点是不透明，采精时容易吸入气泡，安装到注射器上需要再次加固。

玻璃授精针头是以外径8～10mm 的玻璃管为材料手工拉制而成的。首先将玻璃管在酒精灯上加热拉制成所需的针头状，然后将针头的后端在酒精灯上封闭，封闭的后端继续加热，直至加热到在玻璃管的另一端吹气时能将其吹成气泡，并使气泡破裂呈毛边的喇叭状，用什锦挫将毛边除掉，再加热到喇叭口圆滑为止。授精针头后端的喇叭口制成后，在酒精灯上加热拉制针尖部分，使针尖尖端外径不大于0.27mm，内径不小于0.17mm。玻璃针头的优点是透明，采精时能够及时发现吸入的气泡或粘液，可根据需要拉制成不同规格的针头。缺点是容易破碎，初学者不易拉制成功。

聚乙烯授精针头是以外径2mm 的聚乙烯管为材料手工拉制而成的。首先在酒精灯上将聚乙烯管拉制成针头状，然后在粗端把多余部分切割掉，再将粗端加热至圆滑的喇叭状。后端喇叭口制成后再拉制针尖部分，使针尖的尖端达到所需的标准。

（4）二氧化碳麻醉系统：由CO2钢瓶、胶管、气体洗瓶、蜂王固定器构成。麻醉蜂王使用的是CO2气体，实验室一般使用是饮料厂常用CO2钢瓶，体积较大，贮存CO2较多，可以安装气压表及减压阀控制流量。蜂场使用钢瓶受其流动放蜂条件制约，一般选择体积较小为宜。消防器材修配厂有内装200g CO2气体钢瓶，可以随身携带。另外内装5kg CO2钢瓶，也比较适用于转地蜂场。CO2气体在蜜蜂人工授精方面有两种作用，一是麻醉蜂王，短时间内使蜂王处于静止状态；二是通过CO2麻醉的蜂王，能够降低发情反应，促进授精蜂王早日产卵，没有毒副作用。气体洗瓶是清洗CO2中杂质及其他有害离子之用。

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蜂王固定器由诱入管、通气活塞、麻醉管和固定底座构成。麻醉蜂王时先让蜂王爬入诱入管，然后将麻醉管与诱入管对接，待蜂王退入麻醉管后，立即将通气活塞推入麻醉管。当通气活塞接近蜂王头部时，需小心慢慢推进，以免损伤蜂王的触角和头部其他器官，一直推至蜂王腹部露出3～4 节为止。通气活塞的后端用胶管与气体洗瓶、钢瓶相通。

（5）雄蜂飞翔笼：用来从蜂场捕捉雄蜂在笼内进行飞翔排泄及采集精液时使用的木制铁纱笼。用木方做成长×宽×高为330mm×280mm×250mm 的框架，两侧及后壁钉上铁纱，上盖安装隔王栅，前壁钉上纤维板，纤维板上开个直径100mm的圆洞，供捉取雄蜂用，圆洞处用布帘遮严，防止雄蜂从圆洞飞出笼外（图2）。

图2 雄蜂飞翔笼和铁纱笼

3.人工授精药品及试剂

（1）常用药品及试剂：0.9%氯化钠溶液、来苏儿、75%酒精、灭菌蒸馏水、氯化钠、氯化钾、氯化钙、果糖、葡萄糖、水合柠檬酸三钠、磺胺、碳酸氢钠等。

（2）精子生理液配方：蜜蜂精子生理液的配方有多种，常用的几种保护液配方如下：

A 碳酸氢钠0.21g，氯化钾0.04g，水合柠檬酸三钠2.43g，磺胺0.3g，D-葡萄糖0.3g，蒸馏水定容至1000ml。加热灭菌时，温度不超过90℃。

C 氯化钠1.6g，氯化钾0.2g，葡萄糖0.6g，用蒸馏水定容至200ml，pH 调至7.5，装瓶后高压灭菌15 分钟。

4.实验室及器械的消毒灭菌

实验室内要求洁净无菌。采精和授精前后地面要求用5%的煤酚皂溶液（来苏儿）喷洒消毒，操作台面用75%的酒精擦拭，空间用紫外线灯照射灭菌15 分钟，金属及耐高温的器械和附件用消毒锅煮沸灭菌15～20 分钟，不耐高温的器械用75%酒精擦拭或灌洗灭菌。塑料注射器及授精针头等用酒精消毒灭菌后，再用无菌蒸馏水加压冲洗4～5 次

授精仪、体视显微镜、生物显微镜、光源、CO2钢瓶等一切器具应事先安装调试好。所有与授精操作接触的器具，经消毒后均应放入无菌医用托盘内，加盖备用。用作消毒的酒精和消毒剂等，不得和雄蜂、蜂王及精液直接接触。