输血前患者不规则抗体筛查及鉴定的临床意义探讨

詹廷西 王 静 徐丹丹 李 鑫 孙 静 余泽波

(重庆医科大学附属第一医院输血科，重庆 400016)

不规则抗体又称意外抗体，是指血清中除常见的抗-A、抗-B以外的其他血型抗体，这类抗体多为IgG抗体，主要经输血或妊娠等免疫刺激产生，是引起免疫性溶血性输血反应、新生儿溶血病、血型鉴定正反不符、交叉配血不相容以及血液输注无效的主要因素[1-2]。因此，输血前进行不规则抗体的筛查与鉴定对输血安全性和有效性尤为重要。随着输血医学发展，我国对输血安全愈加重视，由ABO、RhD引起的输血不良反应已大大减少[3]。然而，其他血型抗原如RhC、c、E、e未能在采供血机构及输血科纳入常规检测项目并进行同型输注，患者反复多次输血后产生免疫性不规则抗体，引起输血不良反应时有报道，严重影响了输血安全性[4-7]。据此，《医疗机构临床用血管理办法》(卫生部令第85号)《临床输血技术规范》《关于印发医疗质量安全核心制度要点的通知》等一系列政策法规相继出台，明确规定医疗机构在输血前应进行不规则抗体筛查，以降低患者输血不良反应的发生率。本研究通过85 645例输血前患者不规则抗体筛查和鉴定结果分析，探讨不规则抗体产生及分布情况，分析Rh五项、年龄、科室、性别、输血史、妊娠史对不规则抗体检出率的影响及其临床意义。

1 资料与方法

1.1资料

1.1.1一般资料 选取本院2017年9月至2018年12月计划输血和手术备血患者共85 645例，于交叉配血前进行不规则抗体筛查。

1.1.2试剂与仪器 Diana Gel Coombs抗人球蛋白微柱凝胶卡购自西班牙GRIFOLS公司(批号17613.01)；低离子溶液购自英国Ortho-Clinical Diagnostics公司(批号481479)；Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号筛选细胞(批号8000151495)、不规则抗体鉴定16株谱细胞(批号8000248526)、各种血型系统抗体血清(包括Rh、Kell、Duffy、Kidd、Lewis、P、MNS、Luther血型系统血清)均购自荷兰Sanquin血站；WA Diana全自动血型鉴定仪、DG Therm孵育器和DG Spin离心机均购自西班牙GRIFOLS公司；血型血清学专用离心机购自珠海贝索生物技术有限公司。

1.2方法 抽取患者静脉血4 ml置于EDTA真空抗凝管，3 000 r/min离心10 min。在抗人球蛋白微柱凝胶卡上标记3孔，每孔加入40 μl低离子溶液后依次加入10 μl不规则抗体筛选细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号，分别加入50 μl患者血浆，放入37℃孵育器中孵育15 min后，专用离心机990 r/min离心9 min，观察并判定结果。对不规则抗体阳性样本进行抗体鉴定，根据谱细胞反应格局，判定不规则抗体特异性，采用对应抗体血清检测患者红细胞，反向验证不规则抗体特异性。

2 结果

2.1不规则抗体的产生及其分布 共有85 645例输血前患者进行不规则抗体筛查，筛查出阳性患者313例，阳性率0.37%。进一步鉴定抗体特异性，其中特异性抗体201例，主要涉及Rh、Kell、Duffy、Kidd、Lewis、P、MNS等血型系统，Rh系统最多，为121例，占38.67%。自身抗体74例，占23.64%；无特异性抗体38例，占12.14%；混合抗体19例，占6.07%。见表1。

表1 313例不规则抗体特异性鉴定结果(%)

2.2Rh五项对不规则抗体检出率的影响 85 645例不规则抗体筛查患者中共有47 151例进行了Rh五项分型检测，各表现型中以CCDee最多，共23 039例，占48.86%，其次为CcDEe，共15 376例，占32.61%；CcDee共4 051例，占8.59%。上述3种表现型共占所有表现型的90.06%。针对RhC、c、D、E及e抗原进行分析，47 151例住院患者中，RhC抗原阴性患者共4 242例，占9.00%；Rhc抗原阴性患者共23 339例，占49.50%；RhD抗原阴性患者23例，占0.05%；RhE抗原阴性患者共27 216例，占57.72%；Rhe抗原阴性患者共2 860例，占6.07%，差异均具有统计学意义(P<0.05)。313例不规则抗体阳性样本中，含有抗-C抗体为1例，抗-c为8例，抗-D为7例，抗-E为113例，无抗-e。见表2。

表2 住院患者Rh五项分型结果

2.3年龄对不规则抗体检出率的影响 根据患者年龄不同，对85 645例不规则抗体筛查患者进行分组比较，各组间两两比较差异无统计学意义(P>0.05，表3)。

表3 年龄对不规则抗体产生的影响

2.4不同科室对不规则抗体检出率的影响 将不规则抗体筛查的患者根据不同的科室进行分组，分为妇产科、内科、外科共3组。313例不规则抗体阳性患者中，外科人数最多，共156例，占49.84%；内科97例，占30.99%；妇产科阳性例数最少，仅为60例，占19.17%。然而，各科室不规则抗体阳性率由高到低排列依次为外科(0.53%)、妇产科(0.36%)和内科(0.25%)。3组不规则抗体阳性率经卡方检验，差异具有统计学意义(P<0.05)，各组间阳性率的两两比较差异具有统计学意义(P<0.05)。见表4。

表4 不同科室对不规则抗体产生的影响

2.5输血史、妊娠史对不规则抗体检出率的影响 313例不规则抗体阳性患者中，有输血史92例，占29.39%；有妊娠史207例，占66.13%；有输血史或妊娠史的242例，占77.32%；差异均具有统计学意义(P<0.05)。见表5。

表5 输血史及妊娠史对不规则抗体产生的影响

2.6性别对不规则抗体检出率的影响 共有 85 645例住院患者进行了不规则抗体筛查，其中男性36 086例，占42.13%；女性49 559例，占57.87%。313例初筛阳性患者中，男性患者98例，阳性率0.27%，占比31.31%；女性215例，阳性率0.43%，占比68.69%。不规则抗体阳性率经卡方检验，两组间比较差异有统计学意义(P<0.05，表6)。

表6 性别对不规则抗体产生的影响

3 讨论

依据国家相关政策法规，我院针对85 645例计划输血和手术备血患者进行了不规则抗体筛查，共检出313例不规则抗体阳性患者，阳性率0.37%，接近于文献报道的0.3%～2%[8-10]。其中特异性抗体201例，主要涉及Rh、Kell、Dufy、Kidd、Lewis、P、MNS等血型系统，Rh系统最多，为121例，占38.67%。混合抗体19例，占6.07%；自身抗体74例，占23.64%；非特异性抗体38例，占12.14%。产生自身抗体的原因多种多样，可与恶性肿瘤、免疫性疾病、感染以及药物有关。此类患者在血型鉴定时首先需排除自身抗体对准确测定ABO及Rh血型的影响，再进行多份同型血的交叉配血，选择反应最弱即最小不相容的血液输注。此次不规则抗体鉴定时，发现38例无特异性抗体。这可能与检测样本为血浆而非血清、样本储存时间较长致使抗体减弱、16株谱细胞未能包含所有抗原等情况有关。

特异性抗体中，含有抗-E抗体患者人数最多，共有113例，其次为抗Lea(27例)、抗-M(24例)、Jka(11例)等。抗-E的产生主要与E抗原的分布情况及我国尚未将E抗原的检测纳入常规检测项目中，未实施Rh五项同型输注有关。文献报道我国汉族血型中E抗原阴性率为48.23%-70%[11-13]。同时RhE的抗原性仅次于RhD，从而导致抗-E在不规则抗体中占有最大比重。我院47 151例住院患者的Rh五项分型检测结果发现，表现型中以CCDee最多，共23 039例，占48.86%；其次为CcDEe，共15 376例，占32.61%；CcDee共4 051例，占8.59%，与文献报道相似[3,14-15]。临床实践时，在随机交叉配血的情况下，RhE阴性患者会接受RhE阳性血液概率较大。进一步统计各抗原阴性率时，研究发现，RhE抗原阴性率最高为57.72%，这也进一步解释了抗-E高比重的原因，同时也提示在各地血液中心及医院开展Rh五项常规检测及Rh五项同型输注的必要性。另外，值得注意的是，在我国已严格开展RhD同型输注的情况下，依旧有6例单纯抗-D，1例混合抗-D。查阅这7名患者临床信息，提示均为有妊娠史的RhD阴性妇女。此类情况提示我们，在临床实践中，有必要针对RhD阴性妇女进行RhD阴性相关知识的宣讲，以便其日后怀孕生产计划的制定。

针对可能影响不规则抗体检出率的因素进行分析，发现不同年龄段对不规则抗体的检出率不存在统计学差异。不同科室中不规则抗体的检出率不同，本研究显示按照阳性率从高到低依次为外科、妇产科及内科(P<0.05)。出现这种现象的原因可能是由于我院外科各类手术尤其三、四级手术及器官移植手术呈逐年增加趋势，手术患者输血几率较大，同一患者同次住院输血次数较多，多次输血后产生免疫性不规则抗体。因此，每次输血前均进行不规则抗体筛查对输血安全性和有效性尤为重要。

分析其他影响不规则抗体检出率的因素显示：就性别而言，女性患者不规则抗体阳性率高于男性(P<0.05)。造成上述差异的原因主要是女性在其特有的妊娠或流产的情况下容易受到免疫因素影响产生不规则抗体[16-18]。在后续的输血及妊娠史研究中，发现具有输血/妊娠史的患者检出不规则抗体的概率显著高于对照组(P<0.05)。因此，对拟输血的患者，特别是多次妊娠、输血的患者，在输血前进行不规则抗体筛查及鉴定非常重要，能有效减少输血不良反应(轻者发热寒战，重者溶血性输血反应)发生的概率，提高临床输血的安全性及有效性。

随着输血医学的发展，针对ABO及RhD的同型输注已落实到每个输血医生的临床实践中。但此次研究发现，Rh系统不规则抗体比重最大，以抗-E所比最高(113例患者体内含抗-E)，同时Rh五项表现型第一位CCDee及第三位CcDee之和高达57.45%(第二位为CcDEe，占32.61%，交叉配血时可不予考虑)。针对RhE阴性患者，建议采取同型输注原则在献血员中筛选RhE阴性血液，以减少输血后抗-E的产生。随着人们对Rh抗体产生的深入了解，RhC、c、E、e抗原的检测及其同型输注，将在各地血液中心及医院中得到逐步普及，以减少Rh系统不规则抗体的产生，进一步保障患者输血安全。