盐酸苯达莫司汀原料药含量测定方法的比较

2021-02-23沈红梅

广州化工 2021年3期

沈红梅

(四川科伦药物研究院有限公司，四川成都 611130)

盐酸苯达莫司汀是一种烷化剂类抗肿瘤药，用于恶性淋巴瘤(何杰金氏病HD和非何杰金氏淋巴瘤NHL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、多发性骨髓瘤(MM)和乳腺癌的治疗[1-2]。由于盐酸苯达莫司汀对多种血液系统肿瘤和实体瘤具有良好疗效，且毒副作用低[3-4]，目前已批准用于多种癌症的治疗[5-6]。

为了确保该原料药的质量，探索盐酸苯达莫司汀原料药含量测定方法的多元化，本研究参考相关文献[7]，首先，建立了高效液相色谱法测定盐酸苯达莫司汀的含量，考察线性关系、稳定性、精密度等；然后，根据盐酸苯达莫司汀的性质，建立了非水滴定法测定其含量，进一步通过实验比较两种测定方法的差异性。

1 仪器与试剂

1.1 仪器

Aglient 1100液相色谱仪，二极管阵列SPD-10MAVP(DAD)检测器及Aglient 1100紫外检测器，定量进样阀，Aglient 1100色谱工作站；Shimadzu VP-ODS 150 L×4.6 mm 5 μm色谱柱。

1.2 试药

盐酸苯达莫司汀(批号: 20190901、20190902、20190903)、盐酸苯达莫司汀对照品(批号：20190701s)均来自于四川科伦药物研究院有限公司；乙腈为色谱纯，三乙胺为分析纯，水为重蒸馏水。

2 实验方法

2.1 HPLC法测定

2.1.1 色谱条件及仪器

仪器为Aglient 1100，检测器为Aglient 1100 UV检测器，流动相为乙腈-0.25%三乙胺溶液(用H3PO4调pH至2.4±0.2)(体积比为30：70)，色谱柱为Shimadzu VP-ODS 150 L×4.6 mm 5 μm，流速为1.0 mL·min-1，UV检测波长为233 nm，色谱工作站为Aglient 1100色谱工作站(AGLIENT公司)；进样量20 μL。

2.1.2 测定方法

精密称取经五氧化二磷干燥过夜的苯达莫司汀对照品约20 mg，置100 mL量瓶中，加冰浴中放置后的流动相振摇使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取10 mL置100 mL量瓶中，加上述溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

精密称取本品约20 mg，置100 mL量瓶中，加冰浴中放置后的流动相振摇使溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密量取10 mL置100 mL量瓶中，加上述溶液稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

分别取上述对照品溶液和供试品溶液20 μL注入液相色谱系统，记录色谱图。按外标法以峰面积计算，即得。

2.1.3 线性范围考察

精密称取盐酸苯达莫司汀对照品25.71 mg置100 mL量瓶中，加入流动相溶解，稀释至刻度，得1号溶液(257.1 μg/mL)。精密吸取得1号溶液各10 mL、8 mL、6 mL、5 mL、4 mL、3 mL、2 mL于50 mL量瓶中，稀释至刻度，得2号(51.420 μg/mL)、3号(41.136 μg/mL)、4号(30.852 μg/mL)、5号(25.710 μg/mL)、6号(20.568 μg/mL)、7号(15.426 μg/mL)、8号(10.284 μg/mL)溶液。分别取上述溶液按含量测定法测定，结果见表1。

表1 线性测定结果

从表1可以看出，苯达莫司汀浓度在10.284～41.1 μg/mL线性范围内峰面积与浓度呈良好的线性关系，线性方程为A=86.6862C+13.3345(其中：A-HPLC图中主峰峰面积，C-样品溶液浓度)，相关系数为0.99992。

2.1.4 稳定性考察

按“1.2”法制得供试品溶液，分别于0、1、2、3、4 h测定，试验结果见表2。由表2可知，供试品溶液在1 h内主峰面积下降1%，故含量测定在1 h内测定。

表2 稳定性试验结果

2.1.5 精密度考察

为考察随机变动因素对精密度的影响，由不同分析人员在不同日期各取同一批样品适量(批号：20190701)9份，精密称定，加冰浴中放置的流动相使溶解，并配制成每1 mL约含盐酸苯达莫斯汀16～24 μg的溶液，在不同仪器上照含量测定项下，依法进行测定。试验结果见表3。由表3可知，精密度试验表明，精密度好，符合高效液相色谱法含量测定要求。该方法精密度高，能达到仪器分析要求。

表3 精密度试验结果

2.1.6 含量测定

精密称取5种不同批号盐酸苯达莫司汀约20 mg，分别置20 mL量瓶中，稀释至刻度；分别取10 μL注入高效液相色谱仪，并记录峰面积，用外标法计算盐酸苯达莫司汀的含量，结果见表4。

表4 含量测定结果

2.2 非水溶液滴定测定

2.2.1 测定原理

根据本品结构特点及性质，可采用非水滴定法测定其含量。其机理如下：

2C16H21Cl2N3O2·HCl+Hg(Ac)2→C16H21Cl2N3O2H+·Ac-+HgCl2

2.2.2 测定方法

精密称定本品30 mg，加冰乙酸5 mL使溶解后，加醋酐25 mL与醋酸汞试液5 mL，按照电位滴定法(中国药典2020年版二部附录Ⅶ A)，用高氯酸滴定液(0.1 mol/L)滴定，并将滴定结果用空白试验校正。每1 mL高氯酸滴定液(0.1 mol/L)相当于39.47 mg的C16H21Cl2N3O2·HCl，滴定数据见表5。