食品中黄曲霉毒素Bsub1/sub检测方法研究

孙 涛

（泰安市食品药品检验检测研究院 食品工程，山东泰安 271099）

由黄曲霉毒素（AF）导致的食品生产安全问题已经成为人们十分关注和重视的问题之一。本文以ELISA检测技术对5类食物中黄曲霉毒素B1进行测定，探究该种检测技术针对食品中黄曲霉毒素Bsub1/sub检测价值。

1 材料与方法

1.1 材料与设备

此次试验中涉及到的试剂以及仪器如表1所示。

表1 设备以及仪器介绍

1.2 试验方法

1.2.1 采集样本

此次研究中相关食品样品均由当地超市中随机购买，共计10样，其中酱油3样，醋2样，大米2样，面粉2样，食用油1样。

1.2.2 样本提取

在对样本进行提取过程中，严格按照国家标准《食品中黄曲霉毒素的测定方法》（GB/T 5009.22—1996）[1]中的相关要求进行处理。

（1）酱油提取。取出5.0 g样本放置在小烧杯中，加入蒸馏水（5 mL）后放置250 mL漏斗中，向其中加入三氯甲烷（20 mL）并且滴入1 g氯化钠溶液，摇匀，静置。使用无水硫酸钠进行过滤（50 mL），加入三氯甲烷后进行漏斗过滤，将蒸发皿放置通风良好环境，进行65 ℃水浴后冷却，向其中加入甲醇（25 mL）保证凝结物溶解获得待检测样本。

（2）醋提取。获得醋（10 mL）放置容量瓶（50 mL）内部，加入蒸馏水（10～12 mL）振荡摇匀，且加入氢氧化钠（10 mol/L）保证pH数据为7.0，加入甲醇（25 mL）使用蒸馏水（50 mL）定容，放置15 min待检测。

（3）面粉提取。取面粉（5.0 g）于三角瓶（100 mL）中，加入甲醇水（25 mL，1∶1），振荡0.5 h，过滤，获得检验样本。

（4）大米提取。取大米（5.0 g）于三角瓶（100 mL）中加入甲醇水（25 mL，1∶1），振荡0.5 h，过滤，或者检测样品。

（5）食用油提取。取食用油（5.0 g）于小烧杯（25 mL），加入石油醚（20 mL）放置在分液漏斗（250 mL）中，加入甲醇水（25 mL，1∶1）振荡5 min，提取甲醇水进行稀释。依据试验需要将该溶液进行10 μg/mL标准溶液配制，用甲醇、PBS溶液将该标准溶液稀释至0.05 μg/kg、0.10 μg/kg、0.50 μg/kg、1.50 μg/kg 和 10.00 μg/kg。

1.2.3 试验过程

使用常温下黄曲霉毒素B1酶联免疫试剂盒，对酶标抗原使用酶标稀释液进行稀释，完成酶标抗原后，准备洗涤液。利用洗涤液进行洗板，洗板次数为2次，选择两孔加入AFB1阴性对照液，以及阳性对照液体各50 μL，在其他孔加入50 μL待检测样本液。分别在所有的孔中加入基质液以及显色剂，各50 μL，显色时间15 min，温度保持37 ℃，同时分别在所有孔中加入终止液50 μL，保证酶标仪450 nm波长，测定各个孔的吸光度值。

2 结果与分析

2.1 最低浓度测定

该方法的灵敏度是指测得最低浓度的A值与0.0 μg/kg测得的A值之差＞0.1读数。由表2可知，AFB1最低检测浓度为 0.1 μg/kg。

表2 AFB1的最低检测浓度

2.2 线性范围

分别将AFB1标准溶液浓为0 μg/kg、0.1 μg/kg、0.5 μg/kg、1.5 μg/kg、10.0 μg/kg、20.0 μg/kg 依 次 加 到 酶 标 板 的孔中，测定吸光度值。计算结果显示当AFB1标准溶液浓范围在0.1～10 μg/kg存在线性关系，相关系数r=0.990 5。

2.3 回收率

通过回收率计算，发现样本多次加标测定的平均回收率在78%～170%，回收率计算结果见表3。

表3 回收率计算

3 结论与讨论

现阶段针对食品中AFB1检测方法有很多种，例如薄层色谱法，高效液相色谱法，酶联免疫吸附方法等[2]。尽管前两种使用食品检验较多，但是检验方法内容较为复杂且检验时间较多，很难大范围使用，而且一旦出现检验样本制备提纯过程中出现问题，极易导致样本污染[3]。ELISA是一种具有较好特异性的食品测定方法，该种检测方法灵敏度高，重复性强[4]。而且其测定过程较为简单，可以同时检测一种或者多种食品，而且食品检测种类较为全面[5]。本文使用ELISA检测方法测定5种食品，检测结果显示最低检测浓度为0.1 μg/kg。同时观察样本回收率，结果发现各种样品加标平均回收率为78%～170%，回收率较高，同时该种检测方法具有较好的重复率，可以大范围在食品检验中推广使用。

综上所述，黄曲霉毒素Bsub1/sub检测是保证食品安全的重要方法，ELISA检测方法可以实现同时检测多种食品，可满足食品检验需求。