羊新疫苗免疫效果评价

张 啸，何妍萍★，赵崇学★，聂 英，王 斌，石 岩

（1.武威市畜牧兽医总站，甘肃 武威733000；2.民勤县畜牧兽医工作站，甘肃 武威733300；3.天祝县动物疫病预防控制中心，甘肃 武威733200；4.甘肃康承动物保健有限公司，甘肃 兰州730030）

近年来，羊小反刍兽疫和羊痘免疫都使用单价活疫苗，去年秋季小反刍兽疫、山羊痘二联活疫苗（以下简称“新疫苗”）投放市场进行免疫实验。羊痘活疫苗和小反刍活疫苗注射方法不同，羊痘疫苗需皮内注射，小反刍疫苗需皮下注射，小反刍兽疫、山羊痘二联活疫苗又该如何注射，是否安全，免疫效果如何。为了评价新疫苗免疫效果，在武威市民勤县和天祝县各设置了新疫苗、山羊痘活疫苗、小反刍兽疫活疫苗三种疫苗单打和小反刍兽疫活苗和山羊痘活疫苗双打（同时分点注射）四组试验，通过对比，对新疫苗的安全性、对羊羔生产性能的影响以及新疫苗的免疫效果进行全面评价，得出结论，为新疫苗的推广和应用提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物在武威民勤县和天祝县各选择一个规模养殖场进行试验。注射疫苗前对试验用羊先进行羊痘、小反刍兽疫抗体检测，全阴性健康羊方可选用。

1.2 分 组选择民勤县某某养殖场湖羊120只（3月龄以上），分4组，每组30只羊。天祝县选择某某养殖场藏羊200只(6月龄左右)，分4组，每组50只羊。详见表1、表2。

表1 民勤县实验组 单位：只

表2 天祝县实验组 单位：只

1.3 免疫注射小反刍兽疫、山羊痘二联活疫苗（国药集团扬州威克生物工程有限公司），用灭菌生理盐水稀释为每0.5mL含1头份，每只羊尾根内侧皮内注射0.5mL。小反刍兽疫活疫苗（天康生物股份有限公司），用灭菌生理盐水稀释为每1mL含1头份，每只羊颈部皮下注射1mL。山羊痘活疫苗（山东绿都生物科技有限公司）用生理盐水稀释为每头份0.5mL，尾根内侧或股内侧皮内注射。小反刍兽疫活疫苗和山羊痘活疫苗联合免疫实验，同时免疫时严格按照疫苗说明书用量和方法分点注射。

1.4 疫苗免疫安全性及生产性能的测定免疫后观察各组羊的采食量，精神状况，疫苗应激反应和死亡情况。免疫后前3d测体温1次/d，每隔7d称一次体重与免疫前比较。

1.5 采血分离血清免疫后对各试验组的羊，每7d进行一次采血，使用一次性真空采血管，一羊一管，详细标记，实验室分离血清后进行抗体检测，全程严格按照规定无菌操作。

1.6 检测方法羊痘用间接ELISA抗体检测试剂盒（中国农业科学院兰州兽医研究所）进行检测，生产批号：20200918119。小反刍兽疫用病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒（青岛立见诊断技术发展中心）进行检测，生产批号020172003。

1.7 结果判定标准当小反刍兽疫阳性血清阻断率PBPC＞60，阴性血清阻断率PBNC＜40实验成立。样品阻断率PBS＞50，判定为阳性，样品阻断率PBS≤50，结果判定为阴性。当羊痘阴性对照血清孔平均光吸收值OD450＜0.2，阳性对照血清孔平均光吸收值OD450＞0.6时检测结果成立，样品OD450≥0.25，抗体阳性；样品OD450≤0.2，抗体阴性。若0.25＞OD450＞0.2，判定阳性可疑，重复检测后，若OD450≥0.23，判定为阳性，OD450＜0.23，则判定为阴性。

2 检测结果

实验数据运用SPSS.22.0软件处理系统汇总分析，检测结果详见表3、表4。

3 分析

3.1 通过对试验羊羔生产性能的观测，发现接种疫苗后每组内均有个别羊羔出现体温升高、采食量下降、反刍减弱的情况，1～2d内体温、采食即可恢复正常。羊羔精神状态在疫苗注射前后肉眼观察没有明显的变化。注射疫苗后个别羊羔有不同程度体重减轻的情况，约一周以后羊羔体重开始稳步上升。从表1、表2可知民勤县四组实验120只湖羊无疫苗应激反应死亡情况发生。天祝县200只藏羊，A2、C2、D2三组试验中均有疫苗应激反应死亡的情况，三组共死亡5只羊羔，疫苗应激反应死亡率为2.5%。实验中选用天祝藏羊6月龄左右，民勤的湖羊3月龄以上，按常理羊羔日龄越长抵抗力越强，但实验中应激反应死亡的均系6月龄左右的天祝藏羊。在天祝另一项实验（羊多种疫苗不同组合免疫实验）中选用了绵羊，不论羊痘，小反刍兽疫疫苗单打或者两种疫苗同时分点注射均未发生试验羊羔疫苗应激反应死亡的情况，这就说明了天祝的藏羊对于疫苗反应比较敏感，耐受性较差，对藏羊这种疫苗应激反应情况有待以后的工作和实践中更进一步的研究。

3.2 从实验室检测结果（表3、表4）可知，小反刍兽疫、山羊痘二联活疫苗试验和其它三组试验的免疫效果都很好。免疫7d后检测，羊痘、小反刍兽疫免疫抗体合格率均在90%以上，14d后达到高峰，免疫抗体合格率达100%；免疫21d、28d以后再检测，免疫抗体合格率维持在100%。对检测数据分析可知羊痘和小反刍兽疫OD平均值、标准差均符合实验结果，7～28d的实验数据呈规律性排列，并且组内实验数据离散度较小，说明实验成功，实验结果符合试验预期效果。

表3 羊痘免疫抗体合格率、OD450平均值及标准差

表4 小反刍免疫抗体合格率、OD450平均值及标准差

4 结论

从实验结果可知，除了藏羊对疫苗反应比较敏感以外，新疫苗在安全性和对羊羔其它生产性能的影响方面和现有已经推广使用的羊痘和小反刍兽疫单价苗一致，安全性良好。免疫抗体合格率在70%以上，达到了群体免疫的效果，免疫效果良好。新疫苗既可以预防小反刍兽疫又可以预防羊痘疫病，注射新疫苗“一针防两病”便捷省事，可减少工作量，提高工作效率，节约劳动成本，更容易被老百姓接受，有利于动物疫病防控工作的开展，因此小反刍兽疫、山羊痘二联活可以在以后的免疫工作和生产实践中可大力推广应用。