β-catenin在宫颈癌组织中的表达及与手术预后的关系

宋改让 胡 滨 崔金全

宫颈癌是女性常见恶性肿瘤之一，是由宫颈鳞状上皮内病变发展而来，我国新发病例约占世界发病率的1/3[1]。宫颈癌在发病早期的临床表现不典型，为此因此患者在就诊时已多为晚期，导致患者的死亡率一直居高不下[2-3]。现代研究显示宫颈癌的发生发展是一个从正常到炎性进而发展成肿瘤，同时伴有多基因改变逐渐积累的多步骤过程[4]。随着肿瘤分子生物学研究的不断发展，从分子机制上人们对肿瘤发生与发展的分子机制的认识不断加深，也为肿瘤的分子靶向治疗提供了1个全新的方向和目标[5]。当前研究表明Wnt/β-链蛋白(β-catenin)信号传导通路的异常活化可能在宫颈癌的发生和进展过程中发挥重要作用[6]。β-catenin能诱导Wnt激活多种靶基因的异常表达，从而参与多种肿瘤的恶性进展有关[7-8]。特别是当胞质中β-catenin大量积聚并转位入核，启动多个靶基因的转录，最终效应是加速细胞周期的运转，促进细胞增殖和转移[9-10]。本文具体探讨了β-catenin在宫颈癌中的表达及与手术预后的关系，以明确影响宫颈癌预后的机制。现总结报告如下。

1 材料与方法

1.1 研究对象

研究时间为2015年12月到2019年12月，选择本院进行手术治疗的宫颈癌患者72例，纳入标准：临床与病理资料完整；临床分期为Ⅰ期/Ⅱ期，年龄20～70岁；具有手术指征；医院伦理委员会批准了此次研究；患者签署了知情同意书。排除标准：临床与病理资料缺项者；术前接受放疗、化疗或激素治疗者；既往有宫颈癌病史；免疫缺陷疾病患者；妊娠与哺乳期妇女。年龄25～68岁，平均年龄(54.82±3.82)岁，年龄≥60岁30例；临床分期：Ⅰ期48例，Ⅱ期24例；组织学分化：低分化22例，中分化30例，高分化20例；病理类型：鳞癌60例，腺癌12例。

1.2 β-catenin表达检测

鼠抗人β-catenin单克隆抗体购自Santa Cruz Biotechnology公司，免疫组化通用型染色试剂盒购自北京中山生物技术有限公司。在手术中取所有患者的病灶组织标本(病灶组)与癌旁组织标本(癌旁组)，进行蜡块连续切片，厚度为2 μm，采用二甲苯、乙醇进行透明化与脱水处理，滴加鼠抗人β-catenin单克隆抗体(1∶250)，4 ℃过夜，复温后滴加二抗室温孵育30 min，显色后苏木精复染，封片后在光学显微镜下观察结果。以已有宫颈癌组织为阳性对照，以PBS代替一抗作为阴性对照。β-catenin在细胞核表达阳性，阳性信号均呈棕黄色。染色强度：阴性为0分，弱但强于阴性对照为1分，染色清晰为2分，染色强为3分；阳性细胞数<10%为0分，10%～30%为1分，31%～60%为2分，>60%为3分。评分相加0～1分为(阴性)，2分为(弱阳性)，3～4分为(中阳性)，5～6分为(强阳性)，弱阳性+中阳性+强阳性都判断为阳性。

1.3 随访预后

所有患者都给予宫颈癌根治手术治疗，随访至今(2020年4月1日)，记录预后与生存情况。

1.4 统计方法

在统计分析时应用的软件是SPSS 22.00，通过百分比以及均数±标准差来表示计量数据与计数数据，使用χ2检验和独立样本t检验来进行对比，相关性分析应用的是直线相关分析，多因素采用COX回归分析，检验水准α<0.05。

2 结果

2.1 β-catenin表达阳性率对比

病灶组β-catenin表达阳性率为50.0%，显著高于癌旁组的15.3%(χ2=19.741，P<0.05)。

2.2 预后情况

所有患者都顺利完成手术，随访到2020年4月1日，平均随访时间(16.72±1.28)个月，死亡18例，死亡率为25.0%。

2.3 β-catenin在不同临床特征宫颈癌阳性表达结果比较

在72例患者中，不同年龄和不同病理类型宫颈癌患者β-catenin表达阳性率差异无统计学意义(P>0.05)；Ⅱ期宫颈癌患者β-catenin表达阳性率显著高于Ⅰ期患者、低分化患者显著高于中低分化患者、预后不良患者显著高于预后良好患者(P<0.05)。见表1。

表1 不同临床特征患者β-catenin表达阳性率对比(例，%)

2.4 β-catenin表达阳性与宫颈癌临床特征、预后的相关性

β-catenin表达阳性与宫颈癌临床分期、组织分化程度和预后(赋值：死亡=1，生存=0)均存在显著相关性，与临床分期和预后呈显著正相关，与组织分化程度呈显著负相关，见表2。

2.5 影响因素分析

在72例患者中，以预后死亡作为因变量，以临床分期、组织学分化、病理特征、β-catenin表达作为自变量，COX回归分析显示：临床分期、组织学分化、β-catenin表达为影响患者预后死亡的重要因素(P<0.05)。见表3。

表3 影响宫颈癌患者手术预后的多因素分析

3 讨论

当前宫颈癌的发病人数逐年生生上升，且呈现趋于年轻化趋势。手术为早期宫颈癌的主要治疗方法，能显著提高患者的生存率[11]。本研究显示所有患者都顺利完成手术，随访到2020年4月1日，平均随访时间16.72±1.28个月，死亡18例，死亡率为25.0%。但是影响宫颈癌患者的预后因素比较多，早期预测预后在临床上具有重要的价值。

现代研究表明肿瘤的发生发展与细胞的增殖、凋亡、侵袭平衡有关，细胞过度增殖与侵袭，凋亡受抑均是影响肿瘤发生发展中的重要因素[12]。特别是在宫颈癌的发生进展过程中，生长因子及其受体介导的信号级联反应起到了重要的调节作用[13]。而从分子水平阐明宫颈癌的发病机制，探求方便有效的早期诊断指标，能促进改善患者的预后。β-catenin促进宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭是通过激活Wnt信号通路实现的，当β-catenin在表皮生长因子、肝细胞生长因子等诱导下，其氨基端的富含丝/苏氨酸残基被磷酸化后可使β-catenin被泛素化并进而被降解，造成β-catenin异常表达，促使肿瘤的侵袭、转移[14-15]。本研究显示病灶组的β-catenin表达阳性率为50.0%，显著高于癌旁组的15.3%(P<0.05)，表明宫颈癌患者多伴随有β-catenin的高表达。

宫颈癌发病的因素比较多，现代研究表明该病是1个多基因作用、多因素参与的复杂过程，细胞增殖与凋亡的平衡对于维持细胞内环境的稳定及组织形态至关重要，细胞凋亡的紊乱可促进基因突变的积累和细胞的恶性转化，导致宫颈癌的发生和发展[16-17]。正常成熟细胞中没有Wnt信号，大部分β-catenin和细胞膜上的E-cadhefin分子连接，调节细胞间粘附，当Wnt信号激活或者β-catenin基因突变时，通路中的信号分子Wnt能促进宫颈癌的发生[18]。本研究显示不同年龄、临床分期、组织学分化、预后的宫颈癌患者β-catenin表达阳性率对比差异都有统计学意义(P<0.05)；直线相关分析显示年龄、临床分期、组织学分化、预后与β-catenin表达阳性率都存在相关性(P<0.05)，表明β-catenin在宫颈癌中的表达与手术预后与临床特征显著相关。当前也有研究显示Wnt/β-catenin可激活Wnt信号通路，从而促进癌细胞的增殖[19]。特别是β-catenin也可以单独作为恶性肿瘤预后的一个标记物，有助于提高化疗敏感性的预测价值[20]。

肿瘤共同的生物学特征是失控性生长，其主要分子机制是机体的周期调控紊乱导致细胞过度增殖和凋亡受阻[21-22]。本研究COX回归分析显示年龄、临床分期、组织学分化、β-catenin表达为影响患者预后死亡的重要因素(P<0.05)。当前有研究显示β-catenin的作用不仅包括抑制细胞凋亡，而且通过促进肿瘤新生血管形成、参与细胞周期调控等机制参与肿瘤的发生和发展过程[23-24]。不过本研究限于患者数量少及收集标本时间较短的原因，只纳入了较少的病例，可能存在一定的研究偏倚，将在下一步进行深入分析。

总之，β-catenin在宫颈癌中呈现高表达状况，与患者临床病理特征显著相关，为影响患者手术预后的重要因素。