乳腺癌MRI诊断与Ki-67、P53表达的相关性

徐丽娜，唐竹晓，詹莹莹，李双标，戴士林，马红玉

河北省沧州中西医结合医院 a. 影像科；b. 病理科，河北 沧州 061001

引言

乳腺癌是全球范围内常见的恶性肿瘤，其发病率逐年升高且有年轻化的趋势，因此早期准确诊断乳腺癌有助于疾病的分期和评估，及时对患者给予适当治疗至关重要[1]。目前，乳腺影像检查方法包括乳腺X射线钼靶摄影，超声检查和磁共振成像（Magnetic Resonance Imaging，MRI），其中MRI是评价乳腺病变最有效的方法，对乳腺癌肿瘤大小，范围的评价也具由较高的准确率，但仍存在漏检误检的情况[2-3]。近年来，随着分子生物学技术的发展，人们发现乳腺癌的发生与多种基因蛋白的异常表达有关，其中Ki-67和P53是和乳腺癌密切相关的两种蛋白。Ki-67是一种核增殖蛋白，其表达的高低反映肿瘤细胞的增殖情况，与乳腺癌的发生与转移具有相关性[4]。P53是机体中一种抑癌基因，分为野生型和突变型，野生型具有DNA修复能力可抑制细胞增殖[5]；而突变型失去正常抑癌作用，促进细胞增殖进而诱发肿瘤[6]。研究发现，P53在正常乳腺组织中无表达，而在乳腺癌组织中过度表达，因此其对乳腺癌的分期分级具有重要意义[7]。目前影像学诊断与分子生物学诊断联合应用的研究较少，因此本研究探讨了MRI联合Ki-67、P53测定对于乳腺癌诊断的敏感性和特异性，并分析MRI评分与Ki-67、P53表达情况的相关性，旨在为乳腺癌的临床诊断治疗提供依据。

1 资料和方法

1.1 一般资料

选取2016年3月至2019年3月来我院就诊的120例疑似乳腺癌患者纳入本研究，按照随机数字表法随机分成两组，分别为对照组60例，观察组60例，年龄32～79岁，本研究经医院伦理委员会审批通过，患者均同意参与本研究，并签署知情同意书。两组患者一般资料无统计学差异（P＞0.05）（表 1）。

表1 两组患者一般资料比较

1.2 纳入和排除标准

（1）纳入标准：① 所有患者均为女性；② 患者检查时间均为手术前，且在月经后1～2周内进行，检查前未采取辅助化疗及放疗手段治疗；③ 患者均经手术或穿刺活检病理进行确证；④ 患者均经初步判断为乳腺疾病。

（2）排除标准：① 合并其他肿瘤史者；② 合并有精神疾病患者；③ 有认知障碍患者；④ 有乳腺切除手术史者。

1.3 方法

1.3.1 MRI 扫描技术及观察指标

对照组患者进行MRI检查，采用德国Siemens3.0T VERIO超导MRI扫描仪，患者俯卧位，双乳自然悬垂于乳腺专用相控阵表面线圈，分别使用常规平扫、动态增强扫描。扫描序列如下：快速反转恢复磁化准备自旋回波抑脂T2WI序列、快速小角度激发三维成像（FLASH-3D）T1WI序列、动态增强扫描，动态增强扫描采用FLASH-3D脂肪抑制T1WI序列，扫描6个时像，第1时像扫描后20 ms采用高压注射器经肘静脉注入对比剂钆喷酸葡胺注射液（Gd-DTPA），剂量0.1 mmol/kg，注射速度2.0 mL/s，并用20 mL 0.9%氯化钠冲洗导管内对比剂，行增强扫描。记录肿瘤的MRI表现，比如边缘轮廓、强化特点以及肿瘤边界和内部结构，并根据结果进行评分，评分标准如表2所示。

表2 MRI评分标准

1.3.2 Ki-67和P53测定

观察组患者在对照组基础上采用免疫组化方法检测组织中Ki-67和P53的表达。手术前结合MRI扫描技术确定病灶部位，穿刺，于病灶部位取样，将样本用10%甲醛固定24 h，然后经脱水和透明化处理后使用石蜡包埋制成切片并使用苏木精-伊红（Hematoxylin-Essence，HE）进行染色。将上述切片经过脱蜡处理后对组织抗原进行修复，室温下使用3%过氧化氢孵育10 min阻断过氧化物酶活性，蒸馏水冲洗后用PBS冲洗3次。使用山羊血清进行封闭，并添加Ki-67和P53一抗，37℃条件下孵育2 h，然后用PBS冲洗3次。添加DAB进行显色，然后使用苏木精进行复染。最后用梯度酒精进行洗脱，使用中性树脂进行封片，阴性对照使用PBS作为一抗，采用已知阳性标本作为阳性对照。其中Ki-67和P53阳性细胞细胞核内出现棕黄色颗粒，在随意10个高倍镜下，计数阳性细胞数，计算出占肿瘤细胞数的百分比，判定表达情况。

1.4 统计学方法

采用SPSS 20.0统计学软件对所得数据进行分析，计量资料以（±s）表示，比较采用t检验，计数资料以百分率（%）表示，采用χ2检验，对观察组患者的MRI评分与Ki-67、P53的相关性采用Spearman相关性分析。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同检查方案对乳腺癌检测的准确度

经过病理证实，120例患者中共有乳腺癌确诊患者96例，其中对照组检出乳腺癌患者59例，实际患病人数为49例，检查准确率为85.96%，观察组检出乳腺癌患者49例，实际患病人数为47例，检查准确率为90.38%。两组患者差异具有明显统计学意义（P＜0.05）（表3）。典型MRI图像，见图1。

表3 两组患者检查准确度比较

图1 乳腺癌MRI动态增强图像及病理图像

2.2 不同检查方法对乳腺癌检测的敏感性及特异性

分析结果显示对照组诊断敏感性为80.00%，特异性为71.67%，观察组患者诊断敏感性为93.33%，特异性为86.67%，两组患者差异均具有显著统计学差异（P＜0.05）（表4）。

表4 不同检测方法敏感性和特异性比较

2.3 MRI评分与Ki、P53的相关性

经Spearman秩相关分析发现，观察组患者的MRI评分与Ki-67、P53均表现出正相关性如表5所示。

表5 MRI评分与K-67i、P53的相关性

3 讨论

乳腺癌是一种女性常见的恶性肿瘤，随着人们生活水平的提高和对健康重视程度的增强，乳腺癌的诊断率也呈现逐年增高的趋势[8-9]。乳腺癌的发生不仅严重危害患者的身体健康，同时也会给患者造成巨大的精神压力，因此其早期诊断对于乳腺癌的治疗和预防具有重要意义[10-11]。目前乳腺癌的诊断方法主要有钼靶、超声以及MRI[12]，阳君等[13]研究表明，MRI检查较单一钼靶摄影及超声检查具有较高的诊断效能。随着对疾病的认知程度加深，不断有新的检测指标被发掘。国内外大量研究结果表明，乳腺癌患者体内Ki-67和P53水平变化与肿瘤的发生发展有较大关联[14-15]。因此本研究针对MRI联合Ki-67和P53测定对于乳腺癌诊断的敏感性和特异性进行了探讨。

本研究结果表明，单独使用MRI诊断，检测准确率为85.96%，联合使用MRI和Ki-67和P53测定检查准确率为90.38%，两组之间差异具有显著统计学意义，同时诊断的敏感性和特异性也有所提高。可能原因为乳腺癌的发生是多基因突变的结果，其乳腺组织癌变的过程中，涉及多种基因表达的改变，因此结合影像学和免疫组织学检查结果更可靠。P53基因是目前人类研究最多的肿瘤相关的抑癌基因之一，其突变与多种癌组织的发生密切相关。在正常细胞中P53基因通过下游P21、Bcl2等信号通路介导细胞凋亡，防止细胞过度增殖。正常P53基因可通过基因突变，缺失或甲基化的方式变成突变型，突变后的P53基因失去了抑制细胞增长和促进凋亡的功能，并且能诱导某些基因的异常表达，从而引起细胞的癌变，促进肿瘤的发生。通过分子生物学方法在肿瘤组织中检测到的P53基因均为突变型，Synnott等[16]人以突变型P53作为三阴性乳腺癌的治疗靶点开发了药物PK11007，初步研究结果表明该药物对乳腺癌患者具有较好的治疗效果，值得进一步开发。敖睿等[17]研究了三阴性乳腺癌P53突变热点及与预后的关系，结果表明P53热点突变在三阴性乳腺癌患者中发生率不高，均出现在有P53阳性蛋白表达的患者中，而出现P53热点突变的患者预后较好。同时也有研究表明，P53的表达与乳腺癌组织学分级有关，是患者预后不良的独立预测因素之一[18]，说明在手术前对患者进行P53测定有助于患者进一步的治疗和预后。

Ki-67是存在于细胞核内的一种非组蛋白性核蛋白，与细胞周期密切相关，在G0期不表达，G1后期出现，S期和G2后期表达增多，在M期达到高峰，而在有丝分裂结果后降解消失，因此其可准确反映细胞增生活性。在正常细胞中Ki-67表达水平很低，而在乳腺癌患者体内随着病情的发展逐渐上升。有研究结果表明，Ki-67高表达与腋窝淋巴结转移、高病理分期、大肿瘤直径、高组织学分级等具有一致性，可作为鉴别乳腺良恶性肿瘤的一个辅助指标或判断肿瘤侵袭能力、恶性程度的一种标志物[19]。虽然Ki-67抗原的免疫组织化学检测已用于评估癌症增殖多年，但是Penault-Llorca等[20]表示不推荐该标记用于乳腺癌的临床管理中的常规用途，因为目前仍缺乏Ki-67评估的标准化程序以及关于Ki-67测定的解释以及标记物临床效用的仍存在争议问题。但是，不可否认Ki-67是一个具有诸多临床价值的生物分子，有望成为乳腺癌的下一个重要标志物，为临床疗效及预后评估提供依据。

通过相关性分析也发现，MRI评分与Ki-67、P53的表达呈正相关性（P＜0.05），也提示MRI联合Ki-67、P53测定用于乳腺癌患者诊断，可提高诊断的敏感性和特异性，有助于患者进一步的治疗及预后，值得进一步推广。