三种常见漱口水对变形链球菌的体外抑菌效果研究

马小航 徐婧 杨一帆 刘伯阳

齐齐哈尔医学院

一、引言

众所周知，世界卫生组织已将癌症、心血管病、龋病 (dental caries)并列为当代危害健康的三大疾病。龋病已然成为了全世界人口共同关注的健康问题[1]。由于龋病进展缓慢、不易发现，常被人们忽视。龋病的产生取决于一些重要条件：在牙表面隐蔽的部位，保持高浓度的致龋菌，并处于能够持续发挥损害作用的口腔环境。变形链球菌(Streptococcus mutans,S.m)是公认的主要致龋菌，能够选择性地在牙齿表面粘附，形成细菌生物膜，促进菌斑形成，通过糖酵解产生能量时生成大量乳酸，使牙釉质脱矿形成龋齿，严重危害人体口腔健康[2]。因此抑制S.m生长可达到预防龋病的目的。

由于菌斑的生长是持续的过程，经常漱口可以有效控制菌斑。漱口水渗入牙间隙和窝沟，补充机械性清除菌斑的不足，逐渐被大众接受。我国市场上常见的非处方性漱口水种类繁多，宣传侧重点不同。

本研究选择了三种市面上常见的抑菌漱口水，分别为：漱口水A（有效成分：麝香草酚，对金黄色葡萄球菌、变形杆菌等都有抑制或杀灭作用；桉叶油素）不添加乙醇，适用人群更加广泛，易被大众接受；漱口水B（有效成分：西瓜霜，可有效抑制金黄色葡萄球菌和大肠杆菌[3]；乙醇）；漱口水C（有效成分：西吡氯铵，作为表面活性剂，主要通过降低表面张力而抑制和杀灭细菌；氟化钠，促进釉质再矿化防龋、抑制细菌产酸）。因其成分有所相差，故杀菌效果不一,本实验研究三种不同有效成分的漱口水对变形链球菌的抑菌效果差异，并希望选出能够适合日常口腔防龋的一款产品。

二、材料与方法

（一）试验材料

1.试验菌株

本次实验中所采用的菌株是S.mutans冻干粉（瑞楚生物ATCC 25175），于4℃冰箱内保存。

2.其他材料

漱口水A、漱口水B、漱口水C、无菌生理盐水、恒温培养箱、超净工作台、接种环、高压灭菌锅、电子显微镜、革兰染色染液、麦氏细菌浓度比浊管、小试管、滤纸。

（二）实验方法

1.菌株准备

首次活化后用接种环划板于TSB培养基内，利用烛缸法制造厌氧环境。在37℃温箱内培养48h后，挑选完整菌落进行革兰氏染色，在光镜下观察后能够鉴定为变形链球菌。挑取菌落接种于BHIA培养基内传代培养48h，将菌种放入试管中加入蒸馏水，用麦氏比浊管调整菌液浊度为1.5×106cfu/mL。

2.培养基

本实验采用脑心浸液琼脂培养基(Brain heart infusion AGAR，BHIA)，固相成分：牛脑浸粉4g，牛心浸粉4g，蛋白胨5g，酪蛋白胨16g，琼脂13.5g；液相成分：氯化钠5g，葡萄糖2g，磷酸氢二钠2.5g，蒸馏水1000ml。称BHIA培养基5.2g加热溶于100ml蒸馏水，121℃高压灭菌15min平均倒入4个培养皿后静置冷却。

3.实验观察与结果判断

将直径5.5mm的滤纸片高压灭菌后充分烘干，放于平皿内。用移液器将三组漱口水分别滴在纸片上。在TSB培养基上涂布已经调整好浓度的菌液，每皿放入4片无菌滤纸片，用无菌NaCl溶液作阴性对照，纸片间距≥20mm，纸片中点与平皿边缘间距≥15mm。分别置于37°恒温培养箱内厌氧环境与箱内有氧环境，静置培养48h，记录抑菌圈大小，取平均值。结果判断：抑菌环直径5.5～7.5mm为中度敏感，＞7.5mm为高度敏感，无抑菌圈出现为无效。选择具有中、高敏感度的漱口水，在厌氧环境下（实验证明此环境下抑菌效果更明显）重复试验，取平均值。

（三）统计学分析

应用SPSS22.0统计软件进行统计数据分析，计量资料符合正态分布以均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验，均以P＜0.05表示存在差异有统计学意义。

三、结果与分析

（一）不同环境下实验组漱口水对变形链球菌生长的影响

本研究用药敏实验检测了不同品牌漱口水在不同条件下对变形链球菌的抑菌效果。漱口水A对变形链球菌的抑制作用结果呈现高度敏感，漱口水B组的抑菌环结果表现为无效，漱口水C对变形链球菌的抑制结果为中度敏感。并且在厌氧环境下两组漱口水对变形链球菌抑效制果更加理想。

表1 不同品牌漱口水对变形链球菌的抑菌圈大小/mm

（二）抑菌结果较好的漱口水在厌氧条件下对变形链球菌生长的影响

将漱口水A与漱口水C重复试验，取平均值，结果证明，漱口水C对于变形链球菌的抑菌能力明显强于漱口水A。（见表2）

表2 漱口水A与漱口水C对变形链球菌生长的抑菌圈大小/mm

四、讨论

对口腔主要致龋菌变形链球菌的体外抑菌实验结果表明，漱口水C和漱口水A对于抑制S.m生长有一定作用。漱口水C的效果远优于其他两种品牌，针对龋病的预防作用更为可靠。

漱口水C的抗菌成分较为丰富，西吡氯铵为阳离子季铵化合物，作为表面活性剂添加其中，主要通过降低表面张力而抑制和杀灭细菌。梁红艳等的研究证明，西吡氯铵对如金黄色葡萄球菌、白色念珠菌的革兰阳性菌具有抑菌能力，能够有效减少牙菌斑[4]。报道称，其中添加的氟化钠能够降低釉质溶解度、阻止釉质进一步脱矿，同时促进釉质再矿化，抑制菌斑形成[5]。故此产品防龋抑菌效果优秀。

漱口水A主要抗菌成分有: 麝香草酚0．64 g /L，桉油精0.092%，冬青油0.060%，薄荷醇0.042%，具有广谱抗微生物活性作用，可以快速的渗透牙菌斑生物膜，原位杀死较广泛的G+菌和G-菌，还能缩小现有牙菌斑和牙龈炎的病灶。梁坚强的研究表明，牙龈炎病人在进行牙周基础治疗，辅佐以漱口水A治疗，可在一定程度上提高疗效，降低牙龈出血情况、减少牙龈炎复发[6]。因此产品安全性高，长期使用不易造成口腔菌株改化、牙垢增加和味觉衰退等明显副作用，也没有口腔肿瘤和口干症的风险。香料成分对于控制口腔异味有一定的改善作用。

随着人们对口腔保健的重视，漱口水渐渐走入大众的视野。细菌的存在是龋病发生的关键，抑制变形链球菌强大的产酸能力、耐酸能力和附着能力是突破龋病防治的关键。越来越多的研究重点转移到新型抑菌漱口水成分的开发中[7,8]，漱口水的市场前景可见一斑。