基于网络药理学探讨桃莲绞复方增强全成分肿瘤细胞疫苗抗结直肠癌作用分子机制

罗雪菲，王 伟，赵晓芳，运晨霞，冯秋瑜，骆 飞，高宏君，兰太进*

基于网络药理学探讨桃莲绞复方增强全成分肿瘤细胞疫苗抗结直肠癌作用分子机制

罗雪菲1，王 伟3#，赵晓芳1，运晨霞2，冯秋瑜4，骆 飞2，高宏君1，兰太进2*

1. 广西中医药大学附属瑞康医院，广西 南宁 530011 2. 广西中医药大学基础医学院，广西 南宁 530200 3. 广西中医药大学第一附属医院，广西 南宁 530012 4. 广西中医药大学瑶医药学院，广西 南宁 530200

采用网络药理学方法，探讨桃莲绞复方（Tao-lian-jiao Formula，TLF）增强全成分肿瘤细胞疫苗（Vaccine）抗结直肠癌作用的分子机制。观察TLF和全成分肿瘤细胞疫苗单用及联合使用对结肠癌CT26荷瘤小鼠体质量和肿瘤质量的影响，HE染色观察肿瘤组织病理变化。通过中药成分数据库（TCMSP、TCMID），PharmMapper数据库和OMIM数据库分别收集TLF化学成分，成分相关靶点和免疫相关靶点，对TLF调控免疫相关的靶点和通路进行预测分析。通过实时荧光定量PCR、Western blotting对预测结果进行实验验证。与模型组比较，TLF组对肿瘤生长无显著抑制作用，反而表现出促进肿瘤生长的趋势，抑制率−20.1%；Vaccine组对肿瘤生长亦无显著抑制作用（＞0.05），但有抑制趋势，抑制率19.1%；当TLF联合Vaccine（TLF＋Vaccine）则能显著抑制肿瘤生长（＜0.05），抑制率达51.4%。通过中药成分数据库共收集到TLF所含的57个化学成分，对应570个靶点，同时收集到免疫相关的168个靶点，比对找到TLF免疫调节的潜在作用靶点4个，分子互作后得到24个关键靶点，信号通路（pathway）和基因本体论（Gene Ontology，GO）生物学过程富集分析结果提示干扰素γ受体1（interferon gamma receptor 1，IFNGR1）及下游的JAK1/JAK2-STAT1可能是TLF发挥免疫调控的关键通路。验证实验结果显示，与Vaccine组比较，TLF＋Vaccine组肿瘤组织中IFNGR1、磷酸化酪氨酸蛋白激酶-1（phosphorylation of Janus kinase 1，p-JAK1）、磷酸化酪氨酸蛋白激酶-2（phosphorylation of Janus kinase 2，p-JAK2）、磷酸化信号转导和转录激活因子1（signal transducer and activator of transcription 1，p-STAT1）表达显著降低（＜0.05），与预测结果一致。TLF可增强Vaccine的抗结直肠癌作用，具有作为一种有效的肿瘤免疫治疗佐剂的潜力，其作用机制可能与下调表达，抑制JAK1/JAK2-STAT1信号通路活性有关。

桃莲绞复方（TLF）；结直肠癌；网络药理学；全成分肿瘤细胞疫苗；IFNGR1-JAK1/JAK2-STAT1信号通路

全成分肿瘤细胞疫苗作为多价抗原，因其丰富的肿瘤蛋白抗原而受到越来越多的关注。免疫系统可以针对全成分肿瘤细胞疫苗表达的多种肿瘤抗原同时产生免疫应答，从而有效避免因肿瘤细胞异质性造成的部分肿瘤抗原丢失而引起的免疫治疗响应率低下问题[1]。虽然全成分肿瘤细胞疫苗可以提供较好的肿瘤抗原来源，但依然存在几乎所有免疫治疗均存在的共性问题，即免疫原性较弱[2]。佐剂是增强疫苗免疫原性的关键，其赋予疫苗若干优势，包括减少所需的抗原数量，减少正常免疫反应所需的免疫次数，以及诱导更快速、更广泛和更强的免疫反应[3]。目前，多种肿瘤免疫治疗佐剂在临床前期的动物实验研究中取得了较好的效果[4]。基于该策略，开发针对全成分肿瘤细胞疫苗的佐剂将为提高其免疫治疗效率和增强其抗肿瘤作用起到促进作用。

研究证实，许多补益类中药如黄芪、人参、冬虫夏草等具有调节免疫功能，在不同疫苗策略下能诱导机体产生细胞和体液免疫应答，发挥着免疫佐剂活性，可辅助增强抗肿瘤作用[5-6]。随着对民族医药的发掘整理，很多民族药被发现跟某些中药有着相同或相似的功效，如壮药五指毛桃就俗称为“土黄芪”等。从民族药这个待开发的资源库中挖掘出具有较好效果且作用机制明确的肿瘤免疫治疗佐剂值得深入探索和研究。

桃莲绞复方（Tao-lian-jiao Formula，TLF）源于广西壮族民间验方，由五指毛桃、绞股蓝、旱墨莲、夏枯草4味壮药材组成，其中五指毛桃、绞股蓝益气补血、健脾护胃为主药；母药以旱莲草滋阴润燥、滋养龙路；帮药夏枯草软坚散结以助主药之力。如此主母帮带配伍，全方共奏提升正气，调理“三道两路”之功，可用于肿瘤患者免疫功能的提高。TLF为壮族民间验方，能否成为一种全成分肿瘤细胞疫苗佐剂尚待深入研究。为了科学探讨这个问题，本研究采用动物实验并结合网络药理学方法，探究TLF增强全成分肿瘤细胞疫苗抗结直肠癌作用的效果及其分子机制（实验流程见图1），为其后续开发应用提供参考。

1 材料与方法

1.1 TLF增强全成分肿瘤细胞疫苗抗结直肠癌效果观察

1.1.1 材料与仪器

（1）仪器：7500型实时荧光定量PCR仪（美国Applied Biosystems）；Tanon-5200型化学发光成像系统（上海天能科技有限公司）；PowerPac Universal型通用电泳仪（美国Bio-Rad）；SCQ-6201型超声波清洗仪（上海声彦超声波仪器有限公司）；BSA224S型分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；YRDC-0515型低温恒温槽（上海亚荣公司）；DHG-9203A型电热恒温干燥箱（上海齐欣科学仪器有限公司）；HWS-24型水浴锅（上海齐欣科学仪器有限公司）；UPK-II-20L型优普纯水制造机（四川优普超纯科技有限公司）；Centrifuge 5418型台式离心机（德国Eppendorf）；ST16R型台式高速冷冻离心机（美国Thermo Fisher）。

（2）实验动物及细胞：BALB/c雄性小鼠，SPF级，体质量18～22 g，购于湖南斯莱克景达实验动物有限公司，许可证号：SCXK（湘）2019-0004；小鼠CT26结肠癌细胞系，购自南京凯基生物科技发展有限公司。所有动物实验遵循相关动物管理和使用的规定，均符合3R原则。

（3）药物及试剂：4味药材均购自广西金秀药材市场，由广西中医药大学中药鉴定教研室滕建北教授鉴定。五指毛桃经为桑科植物粗叶榕Vahl.的干燥根，墨旱莲为菊科植物鳢肠L.的干燥地上部分，绞股蓝为葫芦科植物绞股蓝(Thunb.) Makino的干燥全草，夏枯草为唇形科植物夏枯草L.的干燥果穗。丝裂霉素C（MMC，批号A1400）购自上海士锋生物科技有限公司；总RNA试剂盒（批号EK0411）、Fast Quant cDNA第一链合成试剂盒（EK0411）、SuperReal荧光定量预混试剂增强版（批号EK0411）购自天根生化科技（北京）有限公司；p-JAK1 Rabbit mAb（批号74129）、p-STAT1 Rabbit mAb（批号9167）、p-JAK2 Rabbit mAb（批号3771）、β-Actin Rabbit mAb（批号4970）、Goat anti-rabbit IgG-HRP（批号7074）、Signal Fire™ ECL Reagent （批号6883）购自美国CST公司；其余试剂均为分析纯。

1.1.2 TLF的制备及剂量设置 称取五指毛桃、墨旱莲、绞股蓝、夏枯草（图2-A）适量，加10倍量水，室温浸泡0.5 h，武火煮沸后文火继续煎煮1 h，提取3次，合并3次滤液，得到TLF药液，减压浓缩至每克浸膏生药量2.0 g，置4 ℃冰箱保存待用。

TLF临床每日给药剂量为50 g生药（按成人体质量60 kg计算），即0.833 g生药/kg。根据体表面积折算动物等效剂量[7]，设定小鼠给药量为临床日用剂量（0.833 g生药/kg）的10倍，即8.33 g生药/kg。实验时用蒸馏水配制成所需浓度药液供动物ig给药，ig容积为20 mL/kg。

1.1.3 CT26全成分肿瘤细胞疫苗的制备 取对数生长期的CT26细胞，加入MMC至质量浓度为100 μg/mL，37 ℃孵育2 h，PBS洗3遍，计数后调整细胞浓度为5×105/mL。

sc-皮下注射 ig-灌胃 MMC-丝裂霉素C 与模型组比较：*P＜0.05；与Vaccine组比较：#P＜0.05

1.1.4 荷瘤小鼠动物模型制备、给药处理及指标检测 将16只小鼠随机分为4组，每组4只，分别为模型组、TLF组、全成分肿瘤细胞疫苗（Vaccine）组、TLF联合全成分肿瘤细胞疫苗（TLF＋Vaccine）组。将MMC处理的CT26细胞注射到不同组小鼠右前肢后方皮下（1×105/只），进行全成分肿瘤细胞疫苗接种，共接种2次，2次接种间隔7 d。第2次全成分肿瘤细胞疫苗接种7 d后，所有小鼠左前肢腋下均sc处于对数生长期的CT26细胞（1×106/只），建立荷瘤小鼠模型。模型建立后，TLF组和TLF＋Vaccine组给予TLF，8.33 g生药/kg，连续14 d。末次给药后1 h，称定小鼠体质量并通过公式计算体质量增长率，异氟烷麻醉小鼠后迅速取出肿瘤组织称定质量，然后将其分成2部分，一部分经甲醛固定后进行HE染色用于病理学观察，余下部分经液氮速冻后用于相关基因和蛋白分子表达情况的检测，通过公式计算体质量增长率。造模及给药过程见图2-B。

体质量增长率=(给药后体质量－给药前体质量)/给药前体质量

1.2 网络药理学分析

1.2.1 网络药理学相关数据库及软件 TCMID数据库（http//www.megabionet.org/tcmid）；PubChem数据库（https://pubchem.ncbi.nlm. nih.gov/）；TCMSP数据库（http://tcmspw.com/tcmsp.php）；Pharmmapper数据库（http://lilab-ecust.cn/pharmmapper/）；Pubmed 基因数据库（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/）；OMIM数据库（http://www.omim.org/）；DAVID数据库（https://david.ncifcrf.gov/）；Cytoscape3.7.1软件；Microsoft Excel 2010软件。

1.2.2 TLF化学成分的收集 将TLF的五指毛桃、绞股蓝、墨旱莲、夏枯草4味药材分别录入TCMID数据库和TCMSP数据库收集TLF的主要化学成分，以类药性（drug-like，DL）值≥0.17为化学成分筛选标准。另外，“补骨脂素（Psoralen）”DL值为0.10，因其含量较高，且作为药材五指毛桃含量测定成分，同时亦具有多种药理作用，故在筛选TLF化学成分时将其纳入分析。

1.2.3 TLF组成成分-靶点关系网络的构建 将TLF所含化学成分Smile数据输入PharmMapper数据库进行数据挖掘，获得与TLF各成分直接相关的靶点，通过Cytoscape构建成分-靶点关系网络。

1.2.4 免疫相关靶点收集 以“Immunity”为关键词，在OMIM数据库（http://omim.org/）检索得到免疫相关靶点，通过Cytoscape构建免疫相关靶点网络。

1.2.5 TLF与免疫共有靶点的筛查 对比TLF相关靶点与免疫相关靶点发现二者共有靶点，即是TLF增强全成分肿瘤细胞疫苗抗结直肠癌作用的可能靶点。

1.2.6 共有靶点PPI互作网络分析 将TLF和免疫共有靶点导入Cytoscape，应用插件GeneMANIA进行共有靶点PPI互作网络分析。

1.2.7 共有靶点互作网络的信号通路（Pathway）和基因本体论（Gene Ontology，GO）生物学过程富集 通过DAVID（https://david. ncifcrf.gov/）对TLF与免疫共有靶点互作网络进行Pathway和GO生物学过程富集分析。

1.3 实验验证

1.3.1 材料 实验用仪器和试剂见“1.1.1”项。

1.3.2、、和mRNA表达水平的检测 各组肿瘤组织匀浆，采用总RNA提取试剂盒提取得到肿瘤匀浆组织总RNA，Fast Quant cDNA第一链合成试剂盒对总RNA进行反转录得到cDNA，配制反应体系：2×SuperReal PreMix Plus 10 μL，////正向引物（10 μmol/L）0.6 μL，////反向引物（10 μmol/L）0.6 μL，cDNA模板1 μL，50×RO×Reference Dye 1 μL，RNase-free ddH2O 6.8 μL。将反应体系置于荧光定量PCR仪中进行扩增，采用2−△△Ct分析方法，每个标本重复3次，t值取平均值，、、、为目的基因，为内参基因，Vaccine组作为对照组，△t值＝目的基因t值－内参基因t值，△△t值＝TLF＋Vaccine组△t值－Vaccine组△t平均值。以Vaccine组目的基因表达量为1，2−△△Ct即为TLF＋Vaccine组相对Vaccine组目的基因表达的倍数。所用引物见表1。

1.3.3 p-JAK1、p-JAK2和p-STAT1蛋白表达水平的检测 Western blotting检测肿瘤组织中p-JAK1、p-JAK2和p-STAT1的表达。肿瘤样品在液氮中研磨，裂解缓冲液中溶解，辅以磷酸酶和蛋白酶抑制剂。用BCA蛋白检测试剂盒定量测定蛋白浓度。蛋白质样品（30 μg）在10% SDS-polyacrylamide凝胶电泳分离，然后转移到PVDF膜。5%脱脂乳封闭膜1 h，4 ℃孵育过夜，抗p-JAK1（1∶500）、p-JAK2（1∶500）和p-STAT1（1∶500）抗体。冲洗后，用辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗（1∶500）在室温下孵育1 h，使用Tanon-5200型化学发光成像系统进行化学发光观察，拍照。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 TLF增强全成分肿瘤细胞疫苗抗结直肠癌作用

与模型组比较，TLF＋Vaccine组能显著抑制肿瘤生长（＜0.05，图2-C、D），肿瘤抑制率达51.4%，而TLF组和Vaccine组对肿瘤生长均无显著抑制作用（＞0.05，图2-C、D），肿瘤抑制率分别为−20.1%和19.1%。从肿瘤抑制率结果可以看出，单独采用TLF不仅不能抑制肿瘤生长，反而有促进生长的趋势；而单独采用全成分肿瘤细胞疫苗虽然具有抑制肿瘤生长的趋势，但作用不强。体质量增长率指标显示，各组小鼠体质量增长无显著差异（＞0.05，图2-E）。上述结果表明，TLF可增强全成分肿瘤细胞疫苗的抗结直肠癌作用，其作用机制可能与免疫调节相关。

石蜡切片染色结果（图2-F）显示，模型组和TLF组肿瘤细胞排列致密，未见细胞变形，形态呈球形，体积不等，弥散，染色深。Vaccine组部分肿瘤细胞体积缩小，细胞核染色较浅，观察到有坏死细胞，肿瘤细胞生长受到一定的抑制。TLF＋Vaccine组肿瘤细胞坏死大、核碎裂、核固缩，说明细胞生长受到严重抑制。石蜡切片染色的病理观察结果与肿瘤质量比较结果一致。

2.2 网络药理学分析

2.2.1 TLF免疫调节靶点预测结果 从TCMSP、TCMID数据库中收集到TLF所含主要化学成分57个（表2），其中五指毛桃15个、墨旱莲16个、夏枯草13个、绞股蓝13个、墨旱莲与五指毛桃共有成分2个，墨旱莲与夏枯草共有成分2个，绞股蓝与夏枯草共有成分1个，3味药材共有化学成分1个（图3-A）；从PharmMapper数据库中收集到50个成分对应靶点570个（图3-B）；通过OMIM数据库收集到168个与免疫相关靶点（图3-C）；将收集到的TLF相关靶点与免疫相关靶点进行比对，筛选出4个TLF发挥免疫调节作用的潜在作用靶点（图3-D）。2.2.2 Pathway和GO生物学过程富集分析结果 使用Cytoscape插件GeneMANIA对共有靶点进行互相作用分析，构建包含24个靶点的互作网络（图4-A）。通过DAVID数据库，对互作网络进行Pathway信号通路富集，预测得到16条通路（图4-B），其中前3条分别为inflammatory bowel disease （IBD）、leishmaniasis、JAK-STAT signaling pathway。GO生物学过程富集，预测得到19个生物学过程（图4-C），其中前3个分别为regulation of interferon- gamma-mediated signaling pathway、interferon-gamma- mediated signaling pathway、positive regulation of transcription from RNA polymerase II promoter。分析结果提示，TLF可能通过IFNGR1-JAK1/ JAK2-STAT1信号通路发挥免疫调节作用，从而增强全成分肿瘤细胞疫苗抗结直肠癌作用。

表2 TLF中四味药材所含化学成分信息

续表2

编号成分DL值药材 27vitamin kDL0.66P. vulgaris L. 28daucosterolDL0.63E. prostrata L. 29daucosterolDL0.63F. hirta Vahl 30ruvosideDL0.63G. pentaphyllum (Thunb.) Makino 31lacceroic acidDL0.49E. prostrata L. 32wedelolactoneDL0.48E. prostrata L. 33hentriacontanolDL0.46E. prostrata L. 34pentatriacontaneDL0.42F. hirta Vahl 35oleanolic acid-28-O-beta-D- glucopyranosideDL0.41P. vulgaris L. 36methyl chlorogenateDL0.36F. hirta Vahl 37sericosideDL0.35P. vulgaris L. 38rosmarinic acidDL0.35P. vulgaris L. 39tricinDL0.34F. hirta Vahl 40ecliptasaponin dDL0.34E. prostrata L. 41ombuinDL0.34G. pentaphyllum (Thunb.) Makino 42quercetinDL0.28F. hirta Vahl 43quercetinDL0.28G. pentaphyllum (Thunb.) Makino 44physcioneDL0.27F. hirta Vahl 45eriodictyol 3'-methyl etherDL0.27G. pentaphyllum (Thunb.) Makino 46luteolinDL0.25E. prostrata L. 47luteolinDL0.25F. hirta Vahl 48luteolinDL0.25G. pentaphyllum (Thunb.) Makino 49gypenoside xxviiiDL0.25G. pentaphyllum (Thunb.) Makino 50kaempferolDL0.24F. hirta Vahl 51emodinDL0.24F. hirta Vahl 52acacetinDL0.24F. hirta Vahl 53gypenoside lDL0.22G. pentaphyllum (Thunb.) Makino 54apigeninDL0.21E. prostrata L. 55meranzin hydrateDL0.17F. hirta Vahl 56toddaculineDL0.17G. pentaphyllum (Thunb.) Makino 57psoralenDL0.10F. hirta Vahl

2.3 实验验证结果

根据网络药理学的预测结果，对、、、的mRNA表达水平进行了检测。PCR结果显示，与Vaccine组比较，TLF＋Vaccine组的mRNA表达水平显著降低（＜0.05，图5-A）；两组、和mRNA表达水平不具有显著性差异（图5-A）。

根据PCR实验结果，得到具有显著性变化的基因，而可通过磷酸化JAK1/JAK2- STAT1信号通路发挥作用。因此，采用Western blotting方法对磷酸化蛋白p-JAK1、p-JAK2、p-STAT1进行了检测。结果显示，与Vaccine组比较，TLF＋Vaccine组p-JAK1、p-JAK2、p-STAT1蛋白表达水平显著降低（＜0.05，图5-B）。

实验验证结果与网络药理学预测结果一致。

3 讨论

本研究以CT26结肠癌荷瘤小鼠为模型，考察了TLF单用和联合全成分肿瘤细胞疫苗对肿瘤生长的影响。结果显示，TLF单独使用无抗肿瘤作用，相反还有促进肿瘤生长的趋势；全成分肿瘤细胞疫苗虽然能一定程度上延迟模型小鼠的肿瘤生长，但作用强度较弱。而当TLF和全成分肿瘤细胞疫苗联合使用时，模型小鼠肿瘤生长受到了显著抑制。结果表明，TLF可增强全成分肿瘤细胞疫苗的抗结直肠癌作用，有潜力作为一种有效的肿瘤免疫治疗佐剂。

A-IFNGR1、JAK1、JAK2、STAT1 mRNA表达水平的检测 B-p-JAK1、p-JAK2和p-STAT1 蛋白表达水平的检测，与Vaccine组比较：*P＜0.05

为考察TLF作为佐剂的分子机制，本研究引入了网络药理学方法，并结合现代分子生物学技术，初步确定，TLF可能是通过IFNGR1-JAK1/ JAK2-STAT1信号通路发挥免疫调节作用，从而增强全成分肿瘤细胞疫苗抗结直肠癌作用。IFNGR1是一种膜分子，为IFN-γ的受体，定位于6号染色体，几乎表达于所有细胞表面[8]。JAK1和JAK2均为JAK家族成员，属酪氨酸激酶蛋白，对II型干扰素（IFN-γ）传递信号起着重要作用[9]。当IFN-γ与IFNGR1结合后，下游信号组件JAK1和JAK2相继发生磷酸化，继而导致STAT1活化形成复合物，诱导多种免疫分子的表达，如程序性死亡配体1（programmed death ligand-1，PD-L1）[10]。PDL-1是PD-1免疫抑制检查点的配体，是肿瘤诱导免疫耐受的主要原因[11]。在全成分肿瘤细胞疫苗激活免疫应答的情况下，TLF能通过降低表达，抑制JAK1/JAK2-STAT1信号通路活性，减少免疫抑制检查点配体PDL-1的表达（图6），从而促进细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic T cell，CTL）对肿瘤细胞的清除。

利益冲突 所有作者均声明不存在利益冲突

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Molecular mechanism of Tao-lian-jiao Formula (TLF) to enhance anti-colorectal tumor activity of whole tumor cell vaccine based on network pharmacology

LUO Xue-fei1, WANG Wei3, ZHAO Xiao-fang1, YUN Chen-xia2, FENG Qiu-yu4, LUO Fei2, GAO Hong-jun1, LAN Tai-jin2

1. Ruikang Hospital Affiliated to Guangxi University of Chinese Medicine, Nanning 530011, China 2. School of Basic Medical Science, Guangxi University of Chinese Medicine, Nanning 530200, China 3. The First Affiliated Hospital of Guangxi University of Chinese Medicine, Nanning 530012, China 4. College of Yao Medicine, Guangxi University of Chinese Medicine, Nanning 530200, China

To explore the molecular mechanism of Tao-lian-jiao Formula (TLF, 桃莲绞复方) in enhancing anti-colorectal tumor activity of whole tumor cell vaccine by using network pharmacology.To observe the effects of TLF and whole tumor cell vaccine alone or in combination on the body weight and tumor weight of CT26-bearing mice, and the pathological changes of tumor tissues were detected by H&E staining. The chemical ingredients of TLF, ingredients related targets and immune related targets were collected from traditional Chinese medicine (TCM) databases (TCMSP, TCMID), PharmMapper database and OMIM database, respectively. The targets and pathways related with TLF for regulating immunity were predicted and analyzed. The predicted results were verified by real-time fluorescent quantitative PCR and Western blotting.Compared with model group, TLF group had no significant inhibitory effect on tumor growth (＞ 0.05), while showed a tendency to promote tumor growth, with an inhibition rate of −20.1%; Whole tumor cell vaccine group (Vaccine group) also had no significant inhibitory effect on tumor growth (＞ 0.05), but there was a inhibition rate of 19.1%; And the combination of TLF and whole tumor cell vaccine (TLF＋Vaccine group) could significantly inhibit tumor growth (＜0.05), and the inhibition rate was 51.4%. Through the public databases, 57 ingredients of TLF which corresponding to 570 targets and 168 immune related targets were collected. After comparison, four potential targets of TLF regulating immunity were found, and 24 key targets were obtained after PPI interaction. Pathway signaling and GO biological processes enrichment analysis suggested thatinterferon gamma receptor 1 (IFNGR1) and its downstream JAK1/JAK2-STAT1 may be the key pathways for TLF to regulate immunity. Verification experiment results showed that the expressions of IFNGR1, phosphorylation of Janus kinase 1 (p-JAK1), phosphorylation of Janus kinase 2 (p-JAK2) and signal transducer and activator of transcription 1 (p-STAT1) in tumor tissue of TLF＋Vaccine group were significantly lower than that of vaccine group (＜ 0.05), which was consistent with the predicted results.TLF can enhance the anti-colorectal tumor activity of whole tumor cell vaccine, and has the potential to be an effective adjuvant for tumor immunotherapy. Its mechanism may be related to down-regulating the expression of IFNGR1 and inhibiting the activity of JAK1/JAK2-STAT1 signaling pathway.

Tao-lian-jiao Formula (TLF); colorectal tumor; network pharmacology; whole tumor cell vaccine; IFNGR1-JAK1/JAK2- STAT1 pathway

R285

A

0253 - 2670(2021)02 - 0459 - 10

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.02.020

2020-05-25

广西中医药民族医药传承创新专项课题（GZLC16-26）；广西自然科学基金项目（2020GXNSFAA238024）；广西区教育厅中青年教师基础能力提升项目（2017KY0320）

罗雪菲，女，硕士，主治医师，主要从事免疫相关科研、临床和教学工作。E-mail: fayluo@163.com。

兰太进，男，副教授，研究方向为中药免疫药理及中药产品开发研究。E-mail: lanbo130406@gmail.com。

#并列第一作者：王 伟，男，副主任医师。E-mail: wangweizx@163.com。

[责任编辑 王文倩]