银杏叶提取物调节高脂血症大鼠模型血脂的有效剂量研究

许麦成，程新梅，马吕丽

银杏叶提取物调节高脂血症大鼠模型血脂的有效剂量研究

许麦成，程新梅*，马吕丽

杭州胡庆余堂药业有限公司，浙江 杭州 311100

探索银杏叶提取物（ginkgo leaf extracts，GBE）调节高脂血症大鼠模型血脂的有效剂量。SD大鼠随机分为对照组、模型组、DBE（1.2、3.8、12.0、37.9、119.8、378.7 mg/kg‍）组、非诺贝特（20 mg/kg）‍组。除对照组，其余大鼠以高脂饲料饲养1周建立高脂血症大鼠模型。除对照组和模型组，其余各组大鼠ig相应药物，1次/d，连续6周。每2周检测大鼠血清中三酰甘油（triglycerides，TG）、总胆固醇（total cholesterol，TC）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）和高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）水平。给予GBE 2、4、6周后对大鼠调血脂的最低有效剂量分别为37.9、12.0、3.8 mg/kg‍；给予GBE（119.8、378.7 mg/kg）4、6周后对大鼠的调血脂作用无显著差异。GBE用于短期治疗高脂血症的有效剂量为37.9～119.8 mg/kg（相当60 kg成人每天用量为377.6～1 193.3 mg），用于预防或保健作用的最低剂量为3.8 mg/kg（相当60 kg成人每天用量为37.8 mg）。

银杏叶提取物；有效剂量；高脂血症；三酰甘油；总胆固醇；低密度脂蛋白胆固醇；高密度脂蛋白胆固醇

银杏叶提取物（ginkgo leaf extracts，GBE）作为食品补充剂，在美国连续多年处于销量前10名，2018年银杏叶制剂、保健食品和化妆品的全球市场总销售额超过70亿美元。文献报道‍[1]的GBE临床前药效学研究剂量和临床使用剂量范围极大，GBE调节大鼠血脂的最低剂量为4 mg/kg，最高剂量为5000 mg/kg。美国国立卫生研究院（NIH）数据库显示，GBE作为膳食补充剂每人的最小剂量为2.5 mg/d，最大剂量为660 mg/d。我国原国家药品食品监督管理局数据库显示，GBE作为药品的剂量为17.5～240 mg/d，作为保健食品的剂量为20～190 mg/d。GBE引发的不良反应如内出血‍等，提示应关注GBE临床使用的剂量和疗程，其不良反应与剂量和疗程呈正相关‍[2-5]。本研究对GBE调血脂作用剂量进行探索，旨在为其临床合理使用提供依据。

1 材料

1.1 药品与试剂

GBE（棕褐色粉末，批号GBE-202-201401003）含总黄酮醇苷25.57%、萜类内酯6.62%、银杏总酸1.24×10−6，购自浙江绍兴东灵保健食品有限公司；非诺贝特（批号18862，规格200 mg/粒）购自法国Abott Labratories Limited公司；三酰甘油（triglycerides，TG）测定试剂盒（批号07010/00000210）、总胆固醇（total cholesterol，TC）测定试剂盒（批号07014/00000267）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）测定试剂盒（批号17411/00000152）、高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）测定试剂盒（批号17410/00000156），购自德国DiaSys Diagnostic Systems GmbH公司；高脂饲料（添加20.0%蔗糖、15.0%猪油、1.2%胆固醇、0.2%胆酸钠），购自浙江省实验动物中心。

1.2 动物

清洁级SD雄性大鼠100只，7周龄，体质量190～240 g，由浙江省实验动物中心提供，动物合格证号1609180003。动物饲养于SPS级动物实验室，温度20～26 ℃，相对湿度40%～70%，光照明暗交替各12 h，通风每小时大于15次，自由摄食与饮水，动物实验设施条件合格证号SYXK（浙）2013-0188。动物实验操作遵循浙江省中药研究所实验动物管理和使用规定，符合3R原则。

1.3 仪器

7020全自动生化分析仪（日本日立株式会社）；L-550离心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司）。

2 方法

2.1 剂量设定依据

GBE临床用于调血脂的剂量中位数约为120 mg/d，根据60 kg成人体质量的体表面积折算，相当于200 g大鼠的剂量为12 mg/kg。以12 mg/kg作为中间剂量，以3.16倍级间距向下设置2个剂量：3.8、1.2 mg/kg‍；向上设置3个剂量：37.9、119.8、378.74 mg/kg‍‍[6]。

2.2 药物配制

称定0.12、0.38、1.20、3.79、11.98、37.87 g GBE粉末，加1000 mL蒸馏水，搅拌混匀，分别配制成质量浓度为0.12、0.38、1.20、3.79、11.98、37.87 mg/mL的溶液，于4 ℃保存。称定2 g非诺贝特，溶于1000 mL蒸馏水，配制成质量浓度为2 mg/mL的溶液，于4 ℃冰箱保存。

2.3 高脂血症大鼠模型的建立、分组与给药

10只SD大鼠给予基础饲料作为对照组，其余大鼠给予高脂饲料1周后，眼内眦采血，4000 r/min离心10 min，分离血清，测定血清中TC、TG水平。剔除血清TG＜3.0 mmol/L‍、TC＜2.0 mmol/L的10只大鼠，将余下大鼠按TG、TC水平随机分成模型组，GBE（1.2、3.8、12.0、37.9、119.8、378.7 mg/kg，按体表面积折算相当于60 kg成人每天用量为12.0、37.8、119.5、377.6、1 193.3、3 770.9 mg）组和非诺贝特（20 mg/kg，相当于人用剂量的6倍）组，每组10只。分组后各给药组与模型组比较TC、TG水平均无显著性差异，与对照组比较TC、TG水平有显著差异，表明模型制备成功‍[7]。

对照组大鼠给予维持饲料，其余各组给予高脂饲料。每天上、下午，各给药组ig相应药物（5 mL/kg），模型组与对照组ig等体积生理盐水，连续6周，每周测定并记录大鼠体质量。实验结束，麻醉后脱颈椎处死。

2.4 大鼠血清中TC、TG、LDL-C和HDL-C水平的检测

每2周测定1次大鼠血清中TC、TG、LDL-C和HDL-C水平。给药1 h后，各组大鼠眼内眦采血，4000 r/min离心10 min，分离血清，采用全自动生化分析仪测定血清中TC、TG、LDL-C和HDL-C水平。

2.5 统计分析

3 结果

3.1 GBE对高脂血症大鼠体质量的影响

如表1所示，各组大鼠体质量无显著性差异，表明GBE对大鼠体质量无明显影响。

3.2 GBE对高脂血症大鼠血清中TG和TC水平的影响

如图1、2所示，与对照组比较，模型组大鼠血清TG、TC水平显著升高（＜0.001）。与模型组比较，非诺贝特组第2、4、6周TG、TC水平均显著降低（＜0.01、0.001）；GBE（37.9、119.8、378.7 mg/kg）组自第2周血清TG、TC水平显著降低（＜0.05、0.01、0.001），呈剂量相关性，但第4、6周无明显剂量相关性；GBE（12 mg/kg）组自第4周TG、TC水平均显著降低（＜0.05、0.01、0.001）；GBE（3.8 mg/kg）组自第6周TG、TC水平均显著降低（＜0.05、0.01）。

3.3 GBE对高脂血症大鼠血清HDL-C、LDL-C水平的影响

如图3、4所示，与对照组比较，模型组大鼠血清HDL-C水平显著降低（＜0.05），LDL-C水平显著升高（＜0.001）。与模型组比较，非诺贝特组第6周HDL-C水平显著升高（＜0.01），第4、6周LDL-C显著降低（＜0.001）。GBE（119.8、378.7 mg/kg）组自第2周血清HDL-C水平显著升高（＜0.01、0.001），LDL-C水平显著降低（＜0.01、0.001）；GBE（37.9 mg/kg）组第4周血清HDL-C水平显著升高（＜0.05、0.01），自第2周LDL-C水平显著降低（＜0.05、0.01、0.001）；GBE（12 mg/kg）组第6周血清HDL-C水平显著升高（＜0.05），LDL-C水平显著降低（＜0.01）。

4 讨论

本研究结果表明，给药第2周，GBE（37.9、119.8、378.7 mg/kg）组血清TG、TC、LDL-C水平显著降低，GBE（119.8、378.7 mg/kg）组血清HDL-C水平显著升高，呈剂量相关性。给药第4周，GBE（12.0、37.9、119.8、378.7 mg/kg）组血清TG、TC水平显著降低，GBE（37.9、119.8、378.7 mg/kg）组血清HDL-C水平显著升高，血清LDL-C水平显著降低。给药第6周，GBE（3.8、12.0、37.9、119.8、378.7 mg/kg）组血清TG、TC水平显著降低，GBE（37.9、119.8、378.7 mg/kg）组血清HDL-C水平显著升高，GBE（12.0、37.9、119.8、378.7 mg/kg）组血清LDL-C水平显著降低。给药第4、6周，GBE（119.8、378.7 mg/kg）组血清TG、TC水平与剂量无明显相关性。以上结果表明，GBE用药时间对药效影响较大，用药时间越长，药效越明显。用药2周GBE的最低有效剂量为37.9 mg/kg，用药4周GBE的最低有效剂量为12.0 mg/kg，用药6周GBE的最低有效剂量为3.8 mg/kg。当疗程大于4周，且剂量大于119.8 mg/kg时，提高剂量并不能增强疗效。

GBE组和非诺贝特组大鼠血清TC、TG水平未恢复到正常水平，可能与模型大鼠用药过程给予高脂饲料有关，提示适当控制饮食有益于调血脂。Drago等‍[8]研究结果显示，与每日1次口服80 mg GBE比较，成人每日2次口服40 mg GBE，血药浓度与时间曲线下面积（AUC）、半衰期（1/2）和平均滞留时间（mean residence time，MRT）均明显提高，表明每日2次比每日1次给药更有利于发挥药效。本研究的最低有效剂量为3.8 mg/kg，低于文献报道的最低有效剂量‍[9-13]，可能与每日给药2次且给药时间较长有关。

GBE的临床不良反应涉及全身各系统，如出血（严重颅内出血、严重蛛网膜下腔血、自发性前房出血、严重双侧硬膜下血肿），过敏反应，高血压，粒细胞减少，血管红肿，癫痫发作，中枢神经兴奋，急性肠胃炎等‍[13]。因此，GBE用于临床治疗时剂量不宜大于119.8 mg/kg（根据60 kg成人体质量的体表面积折算，每日用量为1 193.3 mg），用于预防和保健时用量可低至3.8 mg/kg（根据60 kg成人体质量的体表面积折算，每日用量为37.8 mg）。

利益冲突 所有作者均声明不存在利益冲突

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Study on effective dosages of ginkgo leaf extracts on regulating blood lipid of hyperlipidemia rats

XU Mai-cheng, CHENG Xin-mei, MA Lyu-li

Hangzhou Huqing Yutang Pharmaceutical Co., Ltd., Hangzhou 311100, China

To study the effective dosages of ginkgo leaf extracts（GBE）on regulating blood lipid of hyperlipidemia rats.SD rats were randomly divided into control group, model group, GBE (1.2, 3.8, 12.0, 37.9, 119.8, 378.7 mg/kg) group and fenofibrate (20 mg/kg) group. Rats were feed with high-fat diet for one week to establish hyperlipidemia model except control group. Rats were igadministrated corresponding drugs except control and model group, once daily for six week. The levels of triglycerides (TG), total cholesterol (TC), low density lipoprotein cholesterol (LDL-C), high density lipoprotein cholesterol (HDL-C) in serum of rats were measured every two week.After being given GBE for 2, 4, 6 weeks, the minimum effective dosages of GBE for regulating blood lipid in rats were 37.9, 12.0 and 3.8 mg/kg, respectively; GBE at dosages of 119.8 mg/kg and 378.7 mg/kg had no significant difference in regulating blood lipid in rats after 4 and 6 weeks,.The dosages of GBE in the short-term treatment of hyperlipidemia were 37.9—119.8 mg/kg‍, which was equivalent to 377.6—1 193.3 mg for 60 kg adults per day), the minimum dose for preventive or health effects was 3.8 mg/kg‍, which was equivalent to 37.8 mg for 60 kg adults per day).

ginkgo leaf extracts; effective dosage; hyperlipidemia; triglycerides; total cholesterol; low density lipoprotein cholesterol; high density lipoprotein cholesterol

R285.5

A

0253 - 2670(2021)02 - 0454 - 05

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.02.019

2020-11-16

许麦成，高级工程师，从事中药制剂工艺和药效学研究。Tel: (0571)86503610 E-mail: xxmmcc6505@sina.com

程新梅 Tel: (0571)86503627 E-mail: 379900738@qq.com

[责任编辑 李亚楠]