P16、P53、Ki-67在食管上皮内瘤变中的表达及诊断意义

张文书，王珍玲，肖 海，李伟松

（赣南医学院第一附属医院病理科，江西 赣州 341000）

食管上皮内瘤变目前WHO 分为高级别上皮内瘤变和低级别上皮内瘤变；低级别上皮内瘤变是指轻度异型增生的上皮细胞不超过全层的1/2。高级别上皮内瘤变是指中重度异型增生的上皮细胞超过全层的1/2。在实际工作中，我们发现一部分低级别上皮内瘤变病例主要表现为高级别核型的异型细胞位于基底层，它的预后不好应视为高级别上皮内瘤变来干预处理。目前关于这部分病例还无统一的命名，我们暂时把它称为食管基底层高级别鳞状上皮内瘤变，也有学者建议把它称为基底层鳞状细胞原位癌。

食管基底层高级别鳞状上皮内瘤变应作为一个独特组织学亚型，是指高级核型的上皮细胞不超过全层的1/2，主要位于基底层，一般表现为低级别结构异型性的高级别瘤变（低级别结构异型性高级别细胞异型性细胞层次少，往往集中于下1/2，极性紊乱）。对于这种病变在临床治疗上应按高级别上皮内瘤变处理，按现在WHO 的诊断标准只能放在低级别上皮内瘤变中，这会导致延误治疗。所以对这种病变的正确认识和诊断非常重要，但这种病变目前由于病理医生对其认识不足，病理诊断受病理医师主观影响，可重复性差，易导致临床漏诊或过度治疗。为此寻找一组客观的免疫组化检查指标显得非常重要，应用免疫组化标记，为规范化病理学诊断提供客观依据［1-4］。李旭等［5］研究表明P16、Ki-67 在宫颈鳞状上皮病变分级诊断中具有非常重要的意义。P16 蛋白有抑制细胞增殖、调节细胞周期的作用，在肿瘤组织中过表达［2，6］。Ki-67 是一种细胞增殖活性相关抗原，免疫组化染色阳性率高说明细胞增生活跃。P53是一种抑癌基因，贾振军等［7］研究表明P53 在食管癌的癌旁组织中可检测到表达，其检测可发现早期癌及癌前病变。

1 材料与方法

1.1 材料收集2019 年本院食管黏膜活检小标本，取确诊为食管癌的癌旁组织，标本经10% 中性福尔马林固定，常规脱水，石蜡包埋切片，4 μm 厚切片，HE 染色，显微镜下观察阅片筛查出低级别鳞状上皮内瘤变25 例和基底层高级别鳞状上皮内瘤变16 例两组标本，并全部进行P16、P53、Ki-67 免疫组化染色检查。

1.2 免疫组化单克隆抗体P16、P53、Ki-67 购自罗氏公司，采用罗氏自动免疫组化染色机（Bench⁃Mark ULTRA）进行免疫组化染色，实验步骤参照说明书进行。用已知阳性组织作为阳性对照，采用PBS代替一抗作为阴性对照。

1.3 结果判定低级别鳞状上皮内瘤变表现为病变细胞集中在上皮的下1/3 层，病变细胞极性轻度紊乱，细胞核轻度异型（图1）。基底层高级别鳞状上皮内瘤变表现为上皮的基底层和副基底层细胞极性紊乱，细胞核异型明显（图2）。P16阳性位于细胞核和细胞质，染色模式为弥漫型，显示相应病变的基底层和副基底层的细胞连续染色，P16 判读为（+），鳞状上皮无染色、孤立细胞或小细胞群的染色（斑驳状染色）均判定为（-）。P53 阳性定位于细胞核，P53 阳性表达局限于上皮基底层为（-），超过基底层，占全层5%～25%为（+），26%～75%为（++），＞75%为（+++）。Ki-67 阳性定位于细胞核，Ki-67 阳性表达局限于上皮基底层为（-）；超过基底层，占全层10%～25%为（+），26%～75%为（++），＞75%为（+++）。（-）和（+）为阴性，（++）和（+++）为阳性［8-9］。

1.4 统计学分析应用SPSS 15.0 统计软件进行数据分析，采用χ2检验对计数资料进行统计分析，相关性采用Spearman 等级相关分析，P＜0.05 为差异有统计学意义。

图1 食管低级别上皮内瘤变形态学观察（HE染色，×200）

图2 食管高级别上皮内瘤变形态学观察（HE染色，×200）

2 结 果

2.1 P16、P53和Ki-67在食管低级别鳞状上皮内瘤变和基底层高级别鳞状上皮内瘤变的阳性表达P16在两组中的表达差异无统计学意义（χ2=0.288 281，P=0.591 324）；P53 的表达在基底层高级别鳞状上皮内瘤变组明显高于低级别鳞状上皮内瘤变组，差异有统计学意义（χ2=7.427 250，P=0.006 424）；Ki-67 的表达在基底层高级别鳞状上皮内瘤变组明显高于低级别鳞状上皮内瘤变组，差异有统计学意义（χ2=6.879 822，P=0.008 717）（图3、表1）。

图3 食管基底层高级别鳞状上皮内瘤变免疫组化表达（罗氏自动免疫组化染色机染色，×200）

表1 P16、P53、Ki-67 在食管低级别鳞状上皮内瘤变中的表达情况/n（%）

2.2 P53 与Ki-67 的关 联 性P53 和Ki-67 在食 管低级别鳞状上皮内瘤变和基底层高级别鳞状上皮内瘤变的阳性表达呈正相关（r=0.6875，P＜0.05）。见表2。

表2 P53与Ki-67的关联性/n

3 讨 论

P16 是一种抑癌基因，导致细胞增殖失调，在肿瘤组织中过表达［2-4］，其阳性表达率在宫颈鳞状上皮内病变中随着级别的升高增强，呈垂直性分布。在本次研究中发现P16在食管低级别鳞状上皮内瘤变与基底层高级别鳞状上皮内瘤变中表达无差异，这可能跟它们各自主要的病因不同有关系，子宫颈鳞状上皮内病变其主要的病因是人乳头状瘤病毒的感染。而食管鳞状上皮内瘤变主要跟患者的饮食习惯、长期的慢性炎症刺激以及遗传因素有关。

Ki-67是一种细胞增殖活性相关抗原，是恶性肿瘤预后的重要参考指标之一。Ki-67蛋白质定位于细胞核内，在增殖细胞的G1、S、G2和M期表达，G0期不表达［10］。本研究发现Ki-67 在食管低级别鳞状上皮内瘤变与基底层高级别鳞状上皮内瘤变中表达存在差异，在基底层高级别鳞状上皮内瘤变Ki-67的表达高达75%，提示基底层高级别鳞状上皮内瘤变的异型上皮增殖率较高，说明Ki-67蛋白的表达在食管基底层高级别鳞状上皮内瘤变的诊断中有参考意义。

P53是一种重要的抑癌基因，主要是阻止G1/G0期，使细胞不能进入S 期，进而抑制细胞的增殖，与人类恶性肿瘤相关性很高。P53 异常出现在肿瘤的早期和癌前病变中，因此认为P53 是一种常见的遗传事件。研究发现P53在食管癌的癌旁组织中也可检测到表达，其检测可发现早期癌及癌前病变［7］，陈丽霞等［11］研究发现P53蛋白在正常食管黏膜组织中未见阳性表达，在轻度不典型增生、中度不典型增生、重度不典型增生以及癌组织中表达率分别为13.3%、31.2%、62.6%、68.0%，在食管癌组织中的表达可达100%。本次研究显示P53 在食管低级别鳞状上皮内瘤变中表现为病变的鳞状上皮细胞散在细胞核阳性，在基底层高级别鳞状上皮内瘤变中表现为基底层和副基底层病变细胞核弥漫阳性。P53 在食管低级别鳞状上皮内瘤变和基底层高级别鳞状上皮内瘤变的阳性率分别为16%、62.5%，P53的表达明显增加（P＜0.05），提示P53基因突变在食管的鳞状上皮内瘤变得不断进展过程中可能起一定的作用。

综上所述，食管鳞状上皮内瘤变的发生、发展是多因素参与的复杂过程，P16 的表达在诊断低级别鳞状上皮内瘤变和基底层高级别鳞状上皮内瘤变的区别上没有明显的差异，不具有诊断参考价值。P53和Ki-67 的表达在食管低级别鳞状上皮内瘤变和基底层高级别鳞状上皮内瘤变的区别上具有明显的差异，结合两者的检测和组织细胞形态特点有助于降低基底层高级别鳞状上皮内瘤变的漏诊率。