胡芦巴生制品降血脂功效研究

姜明月，叶斌斌，曲扬，郑彧，敖楠楠，鞠成国

(辽宁中医药大学，辽宁 大连 116600)

高血脂是人体内脂肪代谢或转运异常引起的血清脂质和脂蛋白水平升高的一种代谢性疾病[1]。长期血脂过高会引发机体代谢紊乱，高血脂也是导致动脉粥样硬化及心脑血管疾病的重要因素之一[2-3]。目前，国内外对高血脂的化学药物治疗以他汀类为主,他汀类药物具有明确的作用机制,但也具有一定的毒副作用[4]。因此，中药由于其毒副作用小的的独特优势，也常常被用于治疗高血脂。胡芦巴(Trigonellafoenum-graecumL.)入肝、肾经[5]，具有药食同源的特性，其主要成分胡芦巴碱、薯蓣皂苷元、胡芦巴多糖、4-羟基异亮氨酸、牡荆素都具有降血脂作用[6-18]。胡芦巴生品的降血脂疗效已有文献报道[19-22]，但关于胡芦巴炮制品的降脂疗效及胡芦巴生、制品在降脂方面的药效差异未见报道。高血脂在中医学中属于“血瘀”“痰浊”等范畴,中医的高血脂类型包括脾肾阳虚型、肝肾阴虚型、气滞血瘀型等[23-25]。盐制入肾[26]，可能会增加胡芦巴温补肾阳的作用；而酒制升提，具有活血通络、助溶的作用[27]，故推测胡芦巴经盐制和酒制后降血脂疗效可能会增强。本实验通过喂食高脂高糖饲料,构建小鼠高血脂模型，以甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、体重、肝指数来反映胡芦巴生、制品治疗组之间的药效差异，为胡芦巴炮制品药效的进一步研究奠定基础。

1 实验材料

1.1 实验动物 KM小鼠80只，雄性，18～22 g，购自辽宁长生生物技术股份有限公司。许可证号：SCXK(辽)2015-0001。在辽宁中医药大学动物实验室，室温20～22 ℃，湿度50%±2%,12 h/12 h明暗周期的环境下分笼饲养。每日更换垫料，提供充足的水和饲料。

1.2 实验仪器 KHB ST-360 酶标仪(上海科华生物工程股份有限公司)；UVmini-1240紫外可见分光光度计(日本岛津公司)；DFT-50便携式高速万能粉碎机(温岭市林大机械有限公司)；9030A电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)；AE240十万分之一分析天平(瑞士Mettler公司)；RE-3000旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)。

1.3 药品与试剂 胡芦巴(Trigonellafoenum-graecumL.)干燥、成熟种子(安徽，批号：161026)；辛伐他汀片(苏州俞氏药业有限公司，批号：161207)；血清总胆固醇(TC)检测试剂盒(批号：20170321)、甘油三酯(TG)检测试剂盒(批号：20170322)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)检测试剂盒(批号：20170317)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)检测试剂盒(批号：20170320)、谷丙转氨酶检测试剂盒(批号：20170614)、谷草转氨酶检测试剂盒(批号：20170614)均购自南京建成生物工程研究所。精制盐(辽宁省盐务管理局监制，大连盐业有限公司专营，批号:GB5461-2000、GB26878-2011)；羧甲基纤维素钠(天津市大茂化学试剂厂)。龙泉黄酒(产品标准号GB/T 13662-2008)由大连长兴岛酒业有限公司提供。

高脂饲料配方：74.8%基础饲料，8%蛋黄粉，8%猪油，8%葡萄糖，1%胆固醇，0.2%猪胆盐，充分混匀，加适量的水，揉成面团，最后放入模具压制成型放入托盘，剪成适当长度，最后放入烘箱，100 ℃烘干即可。

2 实验方法

2.1 炮制品制备 酒制[28]：100 g生品胡芦巴用30 g黄酒，保鲜膜封口，充分混匀，晃动，闷润70 min，放入160 ℃烘箱，烘制10 min。

盐制[29]：100 g生品胡芦巴用2 g食盐(食盐∶水=100 g∶40 mL)，保鲜膜封口，充分混匀，晃动，闷润4 h，放入160 ℃烘箱，烘制10 min。

2.2 胡芦巴生、制品灌胃提取液制备 胡芦巴生、制品粉碎过60目筛。称取种子粉末30 g，加入料液比为1∶5(m/V)的甲醇，浸泡30 min；超声提取30 min后，共两次，抽滤，合并滤液。使用旋转蒸发仪减压浓缩至膏状，加入0.5%的羧甲基纤维素钠，定容至100 mL，制成混悬液，即得胡芦巴生、制品组给药溶液。

2.3 动物分组及给药 雄性小鼠80只，适应性饲养7 d，随机分出10只小鼠作为空白组，其余的70只进行高血脂造模，称重。空白组和造模组分别给予普通饲料和高脂高糖饲料喂养，21 d后称重，断尾取血，检测血清中TC、TG水平，造模组与空白组小鼠血清中TG、TC有显著性差异的小鼠视为造模成功，按分别将3个指标按数值大小的层次分好，按照TG、TC、体重值大小分组，尽可能使不同组别都具有不同层次TG、TC、体重值，最后利用SPSS对分组后大鼠的TG、TC、体重的显著性结果进行检验，以各组之间无显著性作为分组结果。分为模型组、辛伐他汀组、生品组、盐制品组、酒制品组。分组后各组灌胃给予相应浓度的药物溶液，胡芦巴生、制品组(浓度20 mg·kg-1)，空白组与模型组按照相同剂量的生理盐水进行灌胃，辛伐他汀组(0.25 g·kg-1)，共计21 d，治疗期间所有组均给予正常饲料喂养。

2.4 指标测定 末次给药后，各组动物禁食(不禁水)12 h，称重。摘除眼球取血，室温静置2 h后，4 ℃，3 000 r·min-1，10 min，离心得上清液。取肝脏，用4 ℃生理盐水冲尽残血，滤纸拍去多余水分，称重，与体重一起计算肝指数。按试剂盒说明书中方法分别测定血清中TG、TC、HDL-C、LDL-C的含量及AST、ALT的酶活性，体重、肝脏指数(%)=肝脏质量(g)/小鼠体重(g)×100%。

3 结果

3.1 小鼠高血脂模型的建立 小鼠高脂高糖饲料喂饲21 d后，与正常对照组相比造模组体重、TC、TG显著升高(P<0.01)，分组后，体重、TC、TG在模型组、辛伐他汀组、生品组、盐制品组、酒制品组之间均无显著性差异(P>0.05)，说明小鼠高血脂模型建立成功，分组合理，结果见表1。

3.2 胡芦巴生品、制品治疗21 d后小鼠体重的测定结果 与空白组相比，模型组小鼠的体重显著升高(P<0.01)。与模型组相比，胡芦巴生、制品组小鼠的体重显著降低(P<0.05)，但生、制品组间均无显著性差异，说明胡芦巴的盐制品、酒制品调节体重的作用与生品无异，结果见表2。

表1 造模21 d后小鼠血清生化指标测定结果

3.3 胡芦巴生品、制品治疗21 d后小鼠肝指数的计算结果 与空白组相比，模型组小鼠的肝指数显著升高(P<0.01)。与模型组相比，胡芦巴生、制品组小鼠的肝指数显著降低(P<0.05)，生、制品组间均无显著性差异，说明胡芦巴的盐制品、酒制品调节肝指数的作用与生品无异，结果见表2。

3.4 胡芦巴生品、制品治疗21 d后小鼠血脂指标的测定结果 与空白组相比，模型组小鼠的TG、TC、LDL-C、HDL-C显著升高(P<0.01)。与模型组相比，胡芦巴生、酒制品组小鼠的TG、TC、LDL-C显著降低(P<0.05)，盐制品组TG、TC(P<0.01)、LDL-C(P<0.05)显著降低。对TG、TC的调节作用，盐制品组要优于生品组(P<0.05)，说明胡芦巴盐制后调节血脂的作用增强，结果见表2。

3.5 胡芦巴生品、制品治疗21 d后小鼠AST、ALT的测定结果 与空白组相比，模型组小鼠的AST、ALT显著升高(P<0.01)。与模型组相比，胡芦巴生、盐制品组小鼠的AST、ALT显著降低(P<0.05)，酒制品组也显著降低(P<0.01)。且酒制品组与生品组之间具有显著性差异(P<0.05)，说明胡芦巴经过酒制后调节AST、ALT作用增强，增强了对肝脏的保护作用，结果见表2。

4 讨论

高脂血症是由于各种原因导致血浆中TC、TG和(或)LDL-C过高或HDL-C过低的一种脂代谢异常性疾病，又被称为脂质异常血症[30]。相关文献表明在高血脂患者中脂肪肝的检出率明显高于血脂正常者脂肪肝的检出率[31-32]，是导致脂肪肝发生的主

表2 治疗21 d后小鼠血清生化指标测定结果

要因素[33-34]。因此本实验在将TG、TC、HDL-C、LDL-C 4个评价高血脂疗效的常规指标纳入检测范围的基础上，又增加了AST、ALT、肝指数这3个评价脂肪肝的指标，作为进一步评价胡芦巴药效的标准。

在本实验中，造模小鼠的TG、TC水平与空白组相比具有显著性差异，说明小鼠高血脂模型建立成功。胡芦巴生、制品组对肝指数、体重、LDL-C的回调作用三者之间均无显著性差异。但胡芦巴酒制品下调AST、ALT的作用以及盐制品下调TG、TC的作用增强，说明胡芦巴经盐制后降血脂作用增强，经酒制后肝保护的作用增强。究其原因，一方面可能是胡芦巴经过炮制后，种子膨胀，种皮爆破，质地变得疏松，易粉碎，有利于有效成分煎出，增加了有效成分的提取率[35]。另一方面可能是胡芦巴经盐制后，可使有效成分胡芦巴碱、薯蓣皂苷元、胡芦巴多糖的含量升高[29]；而胡芦巴经酒制后，也可使有效成分胡芦巴多糖、胡芦巴碱的含量升高[28,36]，且酒可引药上行，具有活血通络、助溶的作用[37]。

本实验明确了胡芦巴盐制后调节TG、TC作用增强，酒制后调节AST、ALT的作用增强，但未对引起药效差异的化学物质基础做进一步的研究。因此，为开发胡芦巴及其炮制品的临床应用奠定实验基础，可对胡芦巴的作用机制做进一步研究。