201 例AIDS 初诊患者的病毒载量及T 淋巴细胞数量的特征分析

冯长华 ，刘宇晗 ，郑扬云 ，胡廷婷 ，周显凤

（1.南昌市疾病预防控制中心、传染病预防控制国家重点实验室研究基地，江西 南昌 330038；2.南昌大学第二附属医院检验科、江西省检验医学重点实验室，江西 南昌330006）

艾滋病又称获得性免疫缺陷综合征（Acquired immunodeficiency syndrome, AIDS）, 是由人类免疫缺陷病毒（Human immunodeficiency virus, HIV）感染引起自身免疫功能障碍的严重传染性疾病，多因反复继发机会性感染而死亡,是目前全球和我国重要的公共卫生问题之一[1]。研究表明，HIV 病毒主要攻击靶标是免疫系统的CD4+T 淋巴细胞 （简称CD4+T 细胞）, 并在细胞内进行复制和传播，破坏人体免疫系统[2]。艾滋病无法治愈，但可通过及时治疗延缓生命，早诊断、早治疗是控制艾滋病患者病程进展的重要手段[3]。《中国艾滋病诊疗指南》（2018 版） 中指出 HIV 核酸定量 （病毒载量）和CD4+T 淋巴细胞计数是判断疾病进展、临床用药、疗效和预后的两项重要指标[4]。因此，探究T 淋巴细胞计数和病毒载量之间相关性, 有利于对AIDS患者的病程进行监控和指导治疗。本研究分析了AIDS 患者血样T 淋巴细胞计数和病毒载量检测结果。报告如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料 以 2019 年 1 月-2019 年 12 月经南昌市疾病预防控制中心首次确诊的未接受抗病毒治疗的201 例AIDS 患者作为未治疗组，选择同期210 例接受抗病毒治疗的AIDS 患者为治疗组和79 例健康的体检者为健康组。所有的AIDS 患者均符合《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断》（WS293-201 9）中AIDS 的诊断标准[5]。健康的体检者均已经过酶联免疫吸附试验筛查，结果为HIV 抗体阴性。在参与者知情同意条件下获取血液样本,检测未治疗组T 淋巴细胞数量及HIV-1 病毒载量, 检测治疗组及健康组T 淋巴细胞数量。

1.2 检测试剂与材料 用于HIV-1 病毒载量检测的试剂厂家为瑞士Roche 生产, 使用仪器型号为Roche COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan；用于 CD 3+细胞、CD4+T 细胞和CD8+T 细胞计数检测试剂为美国BD 公司生产, 使用仪器型号为BD FACSCalibur。

1.3 检测方法 采集研究对象两管EDTA-K3 抗凝的静脉全血3.0～5.0ml, 采集后立即颠倒混匀,24h内使用流式细胞仪完成CD3+细胞、CD4+T 细胞和CD8+T 细胞计数。剩下的全血2000r/min 离心15分钟，分离出血浆，使用逆转录荧光定量聚合酶链反应试验检测HIV-1 病毒载量。所有操作均严格遵循《全国艾滋病检测技术规范》（2015 年修订版）[6]及各试剂仪器操作说明的规定。

1.4 统计学方法 将HIV-1 病毒载量浓度取对数值转换成lg (cp) /ml。采用SPSS25.0 对数据进行统计分析。计量资料采用Kolmogorov-Smirnov 检验和Levene's 检验分别对数据正态性和方差齐性进行检验，正态分布数据以表示，偏态分布数据以中位数(四分位数间距)[M (QR) ]表示；方差齐且正态分布的两两比较采用两独立样本t 检验，方差不齐且正态分布的两两比较采用t' 检验， 非正态分布数据间比较采用K-W 检验，组内俩俩比较采用Mann-Whitney U 检验。计数资料以率(%)表示，差异比较用χ2检验。采用Spearman 相关分析做相关性分析，P＜0.05 为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 三组研究对象 CD3+、CD4+T 和 CD8+T 细胞计数比较 未治疗组CD4+T 细胞计数明显低于治疗组和健康对照组，3 组之间的差异均具有统计学意义（P＜0.05）；未治疗组 CD8+T 细胞计数高于治疗组和健康对照组,CD8+T 细胞计数在未治疗组和健康组之间的差异有统计学意义（P＜0.05）；CD3+细胞在三组之间的差异均无统计学意义。见表1。

表1 未治疗组与治疗组及健康组之间T 淋巴细胞计数比较

2.2 未治疗组一般资料分析 本次研究纳入201例首次确诊的未经治疗的AIDS 患者,男性172 例，女性29 例，男女性别比约7：1，不同性别之间的病毒载量、CD3+、CD4+T 和 CD8+T 细胞数差异均无统计学意义(P＞0.05)。患者年龄 18～85 岁,平均年龄48.7±19.2 岁。年龄小于 50 岁患者的病毒载量、CD3+、CD4+T 和 CD8+T 细胞数和大于 50 岁的患者比较，差异均具有统计学意义（P＜0.05）。见表 2。

表2 未治疗组患者病毒载量、CD3+、CD4+T 和CD8+T 细胞水平比较

2.3 未治疗组不同CD4+T 细胞计数患者的病毒载量、CD3+及 CD8+T 细胞数比较 以 350(个/μl) CD 4+T 细胞数为界限将未治疗患者分为两组, 不同CD4+T 细胞组患者的病毒载量、CD3+及CD8+T 细胞比较,差异均具有统计学意义(P＜0.05)。CD4+T 细胞＜350(个/μl)患者的病毒载量水平高于 CD4+T 细胞≥350(个/μl)患者水平,CD3+和 CD8+T 细胞数均低于 CD4+T 细胞≥350(个/μl)患者水平。见表 3。

2.4 未治疗组不同指标的相关性分析 Spearmen相关分析显示, 未治疗的AIDS 患者年龄、 病毒载量、CD3+、CD4+T 和 CD8+T 细胞数几个指标之间存在相关性。年龄与病毒载量呈正相关，相关系数为 0.41。CD3+、CD4+T、CD8+T 细胞均与年龄、病毒载量呈负相关, CD4+T 细胞与CD3+、CD8+T 细胞呈正相关。见表4 。

3 讨论

目前我国的艾滋病感染者仍处于不断增加的趋势，艾滋病疫情形势不容乐观[7,8]。艾滋病是唯一一个终身携带病毒且具有传染性的慢性疾病，感染后不易被发现，潜伏期较长，对人体存在不可逆的持续性损害[9]。T 淋巴细胞是人体重要的免疫细胞，主要分为CD4+T 淋巴细胞亚群和CD8+T 淋巴细胞亚群，分别调节人体的体液免疫和细胞免疫，对维持机体免疫平衡、清除外源性病原体、保护自身细胞具有重要作用[10]。HIV 主要借助其表面糖蛋白gp120 与CD4+T 细胞受体和/或共受体结合进入胞内并整合在宿主细胞染色体DNA 中，进而破坏免疫系统[11]。因此CD4+T 细胞计数能够直接反映人体免疫功能,是提示艾滋病患者免疫功能损害状况最明确的指标。当艾滋病患者的CD4+T 细胞出现进行性或不规则性下降时,提示其免疫系统受到了严重损害,进而可能会并发多种机会性感染或肿瘤等相关症状, 所以CD4+T 细胞计数在监测艾滋病病程发展过程中具有重要作用[12]。

表3 未治疗组不同CD4+T 细胞计数患者的病毒载量、CD3+及CD8+T 细胞数比较

表4 未治疗组不同指标间的相关系数r 值和P 值

艾滋病的诊断依赖于抗体检测,HIV 感染后，一般需要经过1-3 个月的窗口期甚至更长时间才能产生抗体， 在窗口期无法查到抗体或者表现为抗体不确定[13]。个别晚期AIDS 患者体内病毒大量复制导致免疫系统崩溃,造成抗体种类严重丢失而使抗体检测结果不确定[4]。因此许多样本经抗体检测时不能判断患者是否感染。临床可通过检测病毒载量来解决抗体不确定问题。病毒载量是发现早期HIV 窗口期感染者、观察患者病情进展、抗病毒药物治疗效果及观察药物耐药性的重要参考指标。HIV 病毒载量较高时，提示患者体内的病毒可对免疫系统产生较强的破坏性,且患者处于强传染状态，同时有研究证明，血液中检测不到病毒载量时，患者在性行为中不具有传染性[14]。因此，检测患者体内的病毒载量,不仅有助于发现抗体不确定患者避免发生诊断延误甚至漏诊，做好提前干预。同时也有助于及时准确的对患者进行有效的抗病毒治疗，延长患者生命。

未治疗组的CD4+T 细胞数低于治疗组和健康人群, 未治疗组和已治疗组CD8+T 细胞数均比健康人群高,上述比较差异均具有统计学意义(P＜0.05),提示机体在感染病毒后,未经治疗的患者CD4+T细胞较治疗患者和健康人破坏严重,免疫系统被破坏的同时也会被异常激活, 增殖的CD8+T 细胞可被激活分泌抑制因子,在一定程度上减弱或抑制免疫应答，导致机体免疫监视功能下降[15]。本研究的未经治疗的AIDS 患者年龄分布在18～86 岁，几乎涉及每个年龄段，表明艾滋病的感染人群范围广，每个年龄段的人均普遍易感， 这与黄慧的报道相符合[16]。本研究有97 例患者年龄大于50 岁，所占比例为48.3%，表明老年人已成为艾滋病感染的重点人群[17]。年龄大于50 岁患者较50 岁以下患者的病毒载量水平高，而CD4+T 细胞数低，说明年龄越大，病毒复制水平越高，患者的免疫状况越差,体内的免疫功能不足以抵抗病毒的侵犯， 形成恶性循环，产生一定的级联效应。近年来,国家提倡“发现即治疗”医治方案，建议 CD4+T 细胞数≤350 个/μl即可对艾滋病感染者或患者进行规范早期的抗病毒治疗[18]。本研究中有 148 例患者 CD4+T 淋巴细胞计数＜350 个/μl,所占比例为73.6%，可考虑对该批人群进行抗病毒治疗及定期监测淋巴细胞计数和病毒载量, 以期改善人体免疫力降低机会性感染，提高患者的生存质量。本研究也发现，AIDS 患者的CD4+T 细胞计数与病毒载量、年龄呈负相关，这与严亚军等人的研究结果一致[19]，在没有条件检测病毒载量时,可依靠检测CD 3+、CD4+T 和CD8+T 细胞计数及患者的临床症状来推断HIV 病毒在患者体内的复制情况。

综上所述,未经治疗的艾滋病患者免疫系统受损严重，且随着年龄的增长，CD4+T 细胞水平逐渐下降，病毒载量水平逐渐升高。同时,也表明HIV-1病毒载量及T 淋巴细胞检测在艾滋病临床诊断和病程监测中具有重要的指导作用。