江西省五轮结核病实验室分子诊断技术能力验证结果分析

赵竟男，何旺瑞

（江西省疾病预防控制中心，江西 南昌 330029）

结核病是严重危害人民群众健康的呼吸道传染病，我国结核病年发病数100 万，发病率78/10万[1]，是全球结核病高负担国家之一。为提高结核病患者的发现率,分子生物学检测技术已广泛应用于结核病的实验室诊断，新版《肺结核诊断》标准[2]也强调了分子生物学结果对诊断的价值。为提高各级实验室检测能力与水平,保证分子生物学检测质量，自2015 年至今，中国疾控中心结核病参比实验室组织了五轮结核病实验室分子诊断技术能力验证活动。现将江西省参加五轮分子诊断技术能力验证活动的情况分析如下。

1 材料与方法

1.1 受试实验室范围 江西省所有开展结核病分子诊断检测项目的实验室。

1.2 测试项目 能力验证工作主要针对结核病和耐药结核病分子生物学诊断技术，包括线性探针、基因芯片、熔解曲线、多色半巢式实时荧光定量核酸扩增和恒温扩增等方法。

1.3 测试样本 测试样品由国家结核病参比实验室提供,每套测试样本含10 份人工痰样本(经过灭活处理)，每个实验室检测一套测试样本。测试样品由国家结核病参比实验室航空运输到江西省结核病参比实验室,江西省结核病参比实验室再分发到各设区市级结核病实验室,由地市级结核病实验室分发辖区内开展分子生物学检测技术的县区级结核病实验室。

1.4 结果反馈及统计分析 省级结核病参比实验室将本省参加测试实验室的原始检测结果和汇总结果于规定时间前报送国家结核病参比实验室。通过Excel 软件对采集数据进行统计分析。

2 结果

2.1 五轮能力验证总体情况 自2015 年起,江西省疾控中心组织全省各级相关结核病实验室共参加了5 轮结核病分子诊断能力验证,具备结核病分子诊断能力的实验室数量逐年增加,其中参加第五轮测试的实验室最多，见表1。

2.2 五轮能力验证受试单位级别情况 江西省第1～5 轮结核病分子诊断能力验证参加单位级别情况，见表2。

2.3 五轮能力验证受试单位类型情况 江西省第1～5 轮结核病分子诊断能力验证参加单位类型有疾控中心、综合医院、专科医院、院所合一及结防所，见表3。

2.4 五轮能力验证发生错误分析

五轮能力验证，共有四家实验室未通过测试，见表4。

2.5 江西省第五轮结核病分子能力验证检测项目分布情况 五轮能力验证，以第5 轮参加的单位及项目最多，见表5。

表1 江西省第1～5 轮结核病分子诊断能力验证总体情况

表2 江西省第1～5 轮结核病分子诊断能力验证参加单位级别

表3 江西省第1～5 轮结核病分子诊断能力验证参加单位类型

表4 江西省第1～5 轮结核病分子诊断能力验证错误类型分析

表5 江西省第五轮结核病分子能力验证检测项目分布情况

3 讨论

结核病分子生物学检测在提高结核病病原学阳性率上具有明显的优势,基因扩增检测技术作为高灵敏度、高特异性的检测方法,更加需要完善的质量保证体系来确保检测的准确性,其应用对实验室的环境条件、仪器设备、试剂、耗材、人员技术能力等方面的要求都非常严格[3]。操作过程是否规范,结果判读是否准确都将直接影响到检测结果的可信度,而每一项检测结果都是临床诊断决策的直接证据来源,其可信度和等级的高低直接影响到临床决策和病人的健康[4]。

综合分析五轮结核病分子能力验证情况，参加能力验证的实验室来自省、市、县各级结核病实验室,江西省结核病分子诊断能力及检测质控覆盖率都保持在较高水平。从检测能力上看，省级实验室检测能力最佳；从参与能力验证的实验室分布上看，省、市、县各级实验室数量逐渐增多；从参与单位类型来看，参加能力验证的疾控中心有所减少，综合医院有所增加，这说明在江西省落实“三位一体”结核病防治体系管理模式之后，结核病检测已从疾控中心逐步转向综合医院。第三轮能力验证参加实验室数锐减和第四轮能力验证回报结果实验室数量与申报参加数量相差较多均是由于经费有限，免费试剂供应不足导致。从检测项目分布情况来看，主要集中在线性探针及Genexpert 两种技术上。各级实验室还需根据各自实际情况选择适宜的检测方法,引进更多种类的分子检测技术以保证市场的良性竞争。部分综合医院的实验室根据临床需要已开展了多种结核相关的分子生物学检测项目。回顾1～5 轮能力验证，只有一家实验室采用了两种技术测试了质控品。多数实验室只选择一种检测项目参加测试,这不能保证所有检测项目的可靠性。这主要是由于分子生物学检测试剂昂贵，由于利益的驱使,在试验成本和质量控制的平衡上，容易倾向前者而忽视后者[3]。应该在保证检测质量的前提下，再考虑节约成本。

影响实验室检测结果的准确性的因素很多，从医生开具检验申请单到结果报告,任何一个环节处理不当,都会影响检验结果的准确性[5]。通过对五轮能力验证发生的错误进行分析,地市级和县区级实验室均发生过错误,且分布在疾控中心、综合医院、院所合一多种类型的实验室。四例错误中有两例错误为结果报送错误, 线性探针及PCR 反向点杂交法都需要检测人员通过杂交条带,人为判断结果,这就需要结果报告人员认真仔细，且要理解检测结果报送规则，如未检测到结核分枝杆菌，则无需报告药敏结果；“NTM”（非结核分枝杆菌） 与未检测到结核分枝杆菌复合群意义并不相同。同时，要加强报告审核制度，互相矛盾、异常的结果应及时发现，并进行复核[6]。有一家实验室未通过的原因为2 例标本在检测中仪器报错,无法获得检测结果。提示检测人员要定期校正和维护仪器，保证仪器性能良好，量值准确可靠。有一家实验室因假阳性结果未通过测试,基因扩增实验具有极高的灵敏度和对原模板的指数扩增特性，操作稍不留意，很容易交叉污染，导致假阳性[3]。

通过以上分析可以发现,手工操作是影响质量的关键因素。加强人员的培训[7]，在规范检测人员的操作的同时,也使检测人员不只是机械化的操作实验，而是更深入的了解实验的原理、结果判读及意义。只有真正做到检验前、中、后各环节的质量控制到位，才能更好地为临床服务。

按照“结核病防治十三五规划”要求，到2020年，所有地市级定点医疗机构，80%县（市、区）具备结核病分子生物学诊断的能力[8]。在落实“三位一体”结核病防治体系管理模式之后，将有更多的医疗机构承担结核病检测工作。按照《结核病防治管理办法》要求，医疗机构结核病实验室应在相应级别临床检验中心和上级结核病实验室的技术指导下， 开展质量有保证的结核病实验室检查工作[9]。通过能力验证这种室间质评活动,实验室很容易发现自己存在的问题和不足,为实验室解决实际工作中存在的问题提供线索[10]，各级结核病实验室应坚持参加能力验证活动，提高自身的检测能力，以更加务实和细致的工作保证检验结果的科学性和准确性，为临床提供更加准确的实验诊断依据，切实提高医疗以及检验质量。