舍饲哈萨克母羊在乏情期补饲精料对其诱导发情效果及相关生殖激素变化规律的研究

美日阿依·买合买提，朱梦婷，牟健，邵焱焱，赵宗胜

(石河子大学动物科技学院，新疆 石河子 832003)

目前大多绵羊(Ovis aries)都属于季节性繁殖动物，尤其哈萨克羊作为本地典型的季节性繁殖绵羊，参与了优良母系品种的培养(如新疆的细毛羊、卡拉库尔羊)。2-6月是哈萨克母羊的乏情期，因为此时间段大多母羊的生殖器官无明显变化，卵泡发育停止、不排卵，也不接受公羊的交配，进而导致乏情。哈萨克羊一般年产一胎，其季节性发情、产羔数少是本地养殖效率较低的主要原因。季节性发情主要涉及下丘脑-垂体-卵巢(hypothalamic- pituitary-gonadal axis，HPG) 性腺轴系统的调配控制[1]，GOODMAN等[2]对比研究萨福克母羊在发情期和乏情期体内生殖激素的变化发现，成年的萨福克母羊在4个季节中，其雌激素含量的变化相对稳定。近年来，研究者对季节性繁殖动物发情调控机制的研究不光集中在光周期调控通路上，营养因素对动物繁殖活动的影响也倍受关注[3]。研究表明[4]母羊的营养状态能够对母羊繁殖性能产生远大的影响，高营养水平可保持在生殖激素的正常分泌，且可使母畜的发情期提前发生。如绵羊机体发生营养不足,会导致母羊子宫和卵巢发育不健全、初情期延迟、出现不发情现象，甚至出现流产、胎儿发育不良、死羔等现象[5]。日粮中的钙和磷是孕酮黄体的合成、卵母细胞的成熟、能量代谢、骨骼肌发育等繁殖性能所需的重要物质[6]。SHORT R E等[7]提出，因长期能量的供应不足，性成熟推迟的母牛会造成初情期和产后乏情期延长，这样会直接拉长产犊间隔时间和降低繁殖能力。

本研究选择季节性发情的哈萨克羊为研究对象，在乏情期通过补饲精料，检测其诱导发情的效果；同时测定哈萨克发情母羊与不发情母羊外周血液中的E2(雌二醇)、FSH(促卵泡激素)和LH(促黄体素)以及P4(孕酮)的差异，分析母羊生殖激素变化差异，进而解析通过在乏情期补饲精料诱导哈萨克母羊发情生殖激素变化规律。

1 材料与方法

1.1 试验动物分组和饲喂

在乏情期(3～5月)选择3～4周岁、体重45～55 kg的36只哈萨克成年母羊作为试验对象，随机分成试验组(18只)和对照组(18只)。试验组在饲喂苜蓿的基础上，每只羊每天补饲400 g精料(天康672)，对照组仅饲喂苜蓿。每天早晨8点及晚上7点统一饲喂，两组自由饮水，保证每天的浪费量不超过饲喂量的5%，两组饲料的具体营养成分见表1。保证两组的饲养条件以及免疫措施保持一致，试验动物统一饲养于石河子大学动物科技学院实验站。

表1 两组饲料的营养成分表

1.2 发情鉴定

采用公羊试情的方式进行发情鉴定，试情的时间是在补饲精料一个月后，试情频率间隔为早晚各一次，根据试情实际情况，重点对其外阴部进行观察，并仔细记录变化规律。当母羊处于发情期时，通常表现为高声咩鸣、排尿频繁、摇动尾巴等状态，同时，做出一些接近公羊的行为，并发出愿意被爬跨、交配的信号。并且外阴部出现明显红润肿胀和流出粘液之类情况。相比之下，处于乏情期的母羊则会远离公羊，拒绝与其交配。

1.3 血清样品及激素测定

将试验羊中发情母羊(11只)和不发情母羊(25只)，每天清晨7：00采用不抗凝的采血管进行血液采集，采集量为3 mL·次-1，合计40 d。将采集的血液放在37 ℃静置2 h，以每分钟3 000 r的速度离心15 min后，提取上清液放到1.5 mL离心管中，在-20 ℃冰箱中保存，采用酶联免疫的方法(ELISA)对血清中生殖激素P4、E2、LH 和 FSH 进行检测。

1.4 统计分析

数据用SPSS13.0和EXCEL等统计软件处理,对其数据进行方差分析。

2 结果与分析

2.1 乏情期补饲精料对母羊发情影响

乏情期试验绵羊的发情记录见表2，乏情期试验组发情母羊8只，发情率达44%，显著高于对照组(16%)(P<0.05)。

表2 乏情期发情及不发情绵羊数量

2.2 在乏情期发情母羊与不发情母羊血液中四种生殖激素分泌趋势的对比

在乏情期，发情母羊与不发情母羊孕酮浓度变化有差别，发情母羊血液中孕酮浓度第6天开始缓慢上升，第14天开始下降；与不发情母羊相比，差异显著(P<0.05)，其分泌趋势呈波动式变化。在发情周期的前5天和后5天不发情母羊分泌孕酮极显著(P<0.01)高于发情母羊(图1)。

*表示差异显著(P<0.05)，** 表示差异极显著(P<0.01)。

在乏情期，发情母羊与不发情母羊雌二醇分泌趋势不同，分泌量也呈现波动式变化；发情母羊雌二醇分泌量在发情周期的第4天、第5天和第10天与不发情母羊相比差异显著(P<0.05)；第16天，发情母羊分泌的雌二醇迅速上升，第17达到最高峰，随后开始急速下降，这三天都极显著(P<0.01)高于不发情母羊(图2)。

*表示差异显著(P<0.05)，**表示差异极显著(P<0.01)。

在乏情期，发情母羊与不发情母促黄体素分泌量变化不同，发情母羊LH浓度水平在发情周期的第4、17天显著上升，差异极显著(P<0.01)；第17天达到分泌峰值，呈现脉冲式分泌；第16天和第18天与不发情母羊相比差异显著(P<0.05)，高于不发情母羊(图3)。

*表示差异显著(P<0.05)，**表示差异极显著(P<0.01)。

在乏情期，发情母羊与不发情母促卵泡素浓度变化趋势不同，FSH与LH的分泌都呈现脉冲式分泌，可见两者分泌规律相似(图4)。

*表示差异显著(P<0.05)，**表示差异极显著(P<0.01)。

发情母羊分泌的促卵泡素浓度在发情周期的第5天出现上升趋势，明显高于其余天数，差异显著(P<0.05)；第15天含量达到最高值，之后急剧下降，差异极显著(P<0.01)，高于不发情母羊(图4)。

3 讨论

3.1 乏情期提高营养水平对舍饲绵羊发情的影响

新疆哈萨克绵羊是典型的季节性发情动物，其季节性发情受较多因素的影响，如营养、光照、饲喂环境等，其中营养因素尤为重要。母羊长期营养不足会延缓其初情期，甚至导致排卵障碍，进而影响其繁育性能[8]。朱梦婷等[9]通过在非繁殖季节对哈萨克母羊补饲高能饲料发现，其发情率达到31.25%。赵有璋等[10]研究表明，在发情季节短期进行优饲精料的补充有利于绵羊发情。这些研究说明了在一定范围内适量提高母羊营养状态可以诱导绵羊在乏情期发情。因此，当机体进入乏情期时，对绵羊进行短期优饲，能够有效的增强其营养的补充并且能够诱导母羊在断奶后出现发情以及排卵的情况[11]。本研究结果发现，舍饲情况下每只羊每天平均采食量为1.5 kg苜蓿，其中含粗蛋白16.04%、粗灰分9.11%、粗脂肪2.74%、钙1.43%以及磷为0.15%，其摄入量均以及达到美国制定的NRC绵羊饲养标准(1985年)，能够符合成年母羊营养的需求。对于试验组的绵羊，除了满足此标准之外，额外补饲500 g·只-1的精料，饲料中含粗蛋白18.72%、粗灰分11.03%、粗脂肪3.21%、钙1.5%以及磷0.4%，补给精料充分提高了机体营养水平，从而为发情提供了营养储备。

3.2 P4、E2、LH、FSH的浓度变化对乏情期绵羊发情的影响

绵羊季节性发情涉及下丘脑-垂体-卵巢系统的调控。雌激素对动物性器官的正常发育有重要作用，也对机体正常生殖功能的维持来说也极为重要，雌激素是一种绵羊发情机制中有着关键作用的类固醇激素[12]。促卵泡素是对卵泡发育有重大作用的糖蛋白激素，并且对发情后的恢复起关键性作用。而孕酮能够正负反馈作用于垂体促性腺激素，进而调节绵羊发情。母羊发情机制中孕酮类似于“按钮”，具有“开启”母羊发情作用，能够改变母羊卵巢的活动形态，导致母羊能够发情和排卵[13]。动物体内孕酮浓度过高会抑制雌二醇的分泌，进而导致母羊不能发情。人为降低孕酮浓度可作为在乏情季节让母畜出现发情状况的一个前提条件，并且能够成功进入下一个发情周期的有利手段，这与本研究出来的结果相似[14-15]。我们可推测，在乏情季节机体孕酮浓度过高可能是导致绵羊不发情的重要原因之一。赵松华等[16]研究中表明，绵羊体内雌二醇分泌量的提升能作为绵羊在乏情季节发情的前提条和典型特征。田占伟等[17]发现，哈萨克绵羊体内雌二醇分泌量在发情期迅速上升至发情周期中的最高分泌值，而其分泌量在黄体期维持较低水平，这与本研究结果相同。乏情期绵羊体内雌二醇分泌量的升高，可以作为乏情期绵羊发情鉴别的可靠方法。

LH对于卵泡成熟以及雌激素的释放具有很好的促进作用。本研究发现，乏情期发情绵羊在特定日期LH有显著提升趋势，这说明乏情期绵羊出现发情排卵时，其体内的LH分泌量显著高于不发情绵羊。这一结果和前人研究中得出的LH在乏情期保持基础分泌水平显示的结果相同[18-20]。祁云霞等[21]研究得出，当巴美肉羊处于发情状态时，其分泌的激素中LH和FSH分泌的形态呈现出脉冲式释放，且发情的过程中均呈现出一个峰值，此研究与本研究结果相同。LH和FSH在机体乏情状态时浓度会在一个较低值，一旦进入发情阶段后，LH和FSH的浓度会出现上升的情况。可认为高浓度的LH和FSH是小尾寒羊常年发情的一个原因[22-23]。

本研究发现，在乏情期补饲精料可诱导哈萨克母羊发情。发情母羊与不发情母羊在乏情期时外周血液中E2和P4呈波动式变化，LH和FSH呈脉冲式变化。因此，建议个体养殖或集约化养殖在实际生产过程中，应当结合自身的养殖条件在乏情期适量补饲精料可以作为诱导绵羊发情的手段，这能够有效地诱导母羊提前进入发情期，提高其利用价值，且提高其繁殖效率。