蛋鸡脂肪肝出血综合征对肝脏组织形态及血清生化指标的影响

吴雍 何菊/贵州省六盘水市水城区动物疫病预防控制中心 553600

脂肪肝出血综合征（FLHS）是一种因脂类代谢紊乱而导致的疾病。该病作为产蛋鸡常见的一种营养代谢病，多发生于笼养蛋鸡，尤其是膘情较好的高产蛋鸡，可引起病鸡肝脏脂肪的异常沉积，产蛋率明显下降。近年来，在现代化养殖快速发展的生产的条件下，该病的发生呈日趋升高的趋势，该病已成为较多国家和地区蛋鸡养殖常见易发疾病。目前研究表明，饲料配方不合理是发病原因之一，其中，高能低蛋白的日粮可诱发此病，当蛋鸡采食能量高，低蛋白含量低的饲粮后，由于饲粮能量比值高，促使肝脏大量合成甘油三酯，而饲粮蛋白比值低，造成机体营养不均衡，导致肝脏载脂蛋白合成减少，从而造成肝内脂肪转运受阻，破坏了肝细胞、脂肪细胞、血液之间脂肪代谢的动态平衡，导致脂质在肝细胞内过度沉积，其中以中性脂肪为主。本试验参照Thomas Lionel Barton 评分标准，分为FLHS 轻度和FLHS 重度。选用220 日龄健康海兰褐蛋鸡为试验动物，随机分成正常组、病理组，采用高能低蛋白日粮诱导蛋鸡发病。于试验开始第80d 对蛋鸡进行肝脏指数测定、血清生化指标测定及肝脏组织形态学观察，旨在探讨FLHS 对蛋鸡生长性能及血清生化指标的影响。

1 材料与方法

1.1 试验动物选取精神状态良好且体重相近的220 日龄蛋鸡60 羽，随机分成正常组、病理组两组，按蛋鸡饲养标准进行常规免疫。预饲期7d，预饲期结束后，正常组饲喂标准蛋鸡日粮，病理组饲喂高能低蛋白日粮，于试验开始第80d采取组织样品以备试验研究。

1.2 主要试剂无水乙醇、二甲苯、伊红、苏木紫、盐酸、多聚甲醛、氯化钠、氢氧化钠、冰醋酸、依地酸二钠、二水合磷酸氢二钠、十二水合磷酸氢二钠。

1.3 试验耗材10ml 离心管、一次性手套、一次性口罩、样品袋、标记笔、10ml 带针注射器等。

1.4 采取鸡肝脏

（1）缘肋软骨剪开，使腹腔充分暴露，去除肝脏连接的结缔组织，去除与肝门静脉等与腹部链接的部位，使肝脏与机体脱离。（2）取出后清洗肝脏表面（用0.75%的生理盐水），用吸水纸吸干后进行称重。（3）选取肝脏右叶部分组织，放入含有4%多聚甲醛溶液的容器中固定，后期进行石蜡切片制作。

1.5 血清生化指标TG、TC、ALT、AST 的测定，严格按照相应试剂盒说明操作。

2 FLHS 对蛋鸡肝脏组织形态学的影响

通过研究，正常组蛋鸡肝脏颜色鲜艳，明亮有光泽，质地柔软。而病理组蛋鸡肝周肿大，边缘钝圆，肝脏表面有大小不一的浸润性出血点，肝表面色泽泛黄，油脂渗出，有明显的油腻感，触摸质地变脆。肝脏H&E 染色结果显示，正常蛋鸡细胞界限清晰可见，肝细胞排列整齐。病理蛋鸡肝细胞中脂滴在切片制作过程中被有机溶剂溶解后成大小不等的空泡状。随着FLHS 的发病程度的增加，空泡面积不断增大，按照Thomas Lionel Barton 评分标准及空泡面积，将病理组分为FLHS 轻度组和FLHS 重度组，FLHS 轻度组中的肝细胞排列相对基本规则，肝细胞形态有略微肿胀，胞浆显示疏松，肝细胞发生轻度的脂肪变性，肝细胞中可见含有少量脂滴；FLHS 重度组中有大面积肝细胞发生脂肪变性，变性后肝细胞发生肿胀，体积明显增大，肝细胞中含有较多脂滴，细胞核被推向周边，由于受挤压肝窦变窄，甚至消失。

3 FLHS 对蛋鸡肝脏指数的影响

3.1 甘油三酯（TG）测定结果通过研究，FLHS 轻度组甘油三酯含量约是正常组的1.8 倍，FLHS 重度组甘油三酯含量约是正常组的3.1 倍。

3.2 胆固醇（TC）测定结果通过研究，FLHS 轻度组、FLHS 重度组胆固醇含量分别高出正常组约1.3 倍、2.2 倍；FLHS 重度组约是FLHS 轻度组的1.69 倍。

3.3 谷丙转氨酶（ALT）测定结果通过研究，轻度FLHS组ALT 含量约是正常组的1.39 倍，重度FLHS 组ALT 含量约是正常组的1.55 倍。

3.4 谷草转氨酶（AST）测定结果通过研究，重度FLHS组AST 含量比正常组和轻度FLHS 组分别多14.73%、13.96%。

4 结果与讨论

根据现有的FLHS 研究报道和临床诊断资料显示，本试验采用能量高蛋白低的饲粮饲喂蛋鸡，成功诱导出FLHS，并按照Thomas Lionel Barton 评分标准及肝细胞脂滴面积将病理组分为FLHS 轻度组和FLHS 重度组。禽类脂肪合成的主要场所为肝脏，且与脂类代谢息息相关。有研究表明，肝内脂肪堆积对肝细胞的毒性强度与TG 含量呈正相关，其作用机理可能是脂肪损害细胞线粒体和溶酶体酶从而导致肝细胞功能障碍，自由基未能及时清除，致使肝实质细胞发生变性、坏死及炎性细胞浸润。此外，由于饲料蛋白比值低，导致病理组蛋鸡肝脏载脂蛋白合成减少，从而造成肝脏中合成的甘油三酯转运受阻，使得肝细胞内脂肪过度沉积进而发生肝脏脂肪变性。

胆固醇是细胞膜成分，家禽血液中的胆固醇部分在组织中构成细胞结构成分，而其中的部分转变为重要的固醇衍生物VD3，促进机体钙的吸收或类固醇激素的代谢。机体大部分组织都具备能力，可有效合成胆固醇，而合成速度及总合成量不尽一致。由于FLHS 对肝脏的损伤，导致TC 含量显著升高，肝脏脂类代谢受到严重影响。

目前肝脏内发现的活性最高的两种转氨酶分别是谷丙转氨酶、谷草转氨酶，这两种酶与脂肪变性、肝细胞炎症和坏死等病变的发生密切相关，是体现肝脏细胞损伤的主要指标。这可能是由于受FLHS 的影响，使得肝细胞的代谢发生异常，肝细胞器及细胞膜等亚显微结构发生改变，进而肝细胞内转氨酶产生过剩而大量外溢，血清转氨酶活性急剧升高，肝脏内脂质代谢异常，肝细胞功能受到损伤。