芙蓉膏对兔急性软组织感染炎症反应和TGF-β1的影响

韩曼曼，于庆生，彭 辉，张 琦，刘举达

(1浙江省温州市中西医结合医院普外科·浙江 温州 325000；2安徽中医药大学第一附属医院普外科·安徽 合肥 230031)

急性软组织感染属于皮肤及软组织感染(skin and soft tissue infection，SSTI)范畴，红、肿、热、痛为其主要临床表现，发病率及流行病学较难统计[1]，研究表明：SSTI发病率较高，约占成年人0.1%，且每年有上涨趋势[2]。中医外治疗法在治疗软组织感染方面具有明显优势[3]。芙蓉膏是安徽中医药大学第一附属医院已故著名老中医汤琢成主任医师倾毕生精力研制的外用膏剂，由木芙蓉叶、冰片、天南星等中药按一定比例经特殊工艺制造而成，前期临床实验证实芙蓉膏具有抗炎镇痛作用[4-6]；动物实验表明，芙蓉膏能显著抑制二甲苯导致的小鼠耳廓肿胀[7]。芙蓉膏外敷治疗SSTI有较好疗效，其具有较强的抗炎镇痛作用[4-7]，然而未曾深入探讨其作用机制，故笔者进行了此项研究。

1 材料与方法

1.1 实验动物 50只清洁级新西兰大白兔，毛色纯白，雌雄各半，月龄3个月，体质量(2.0±0.5)kg，由安徽长临河医药科技有限公司提供，动物合格证号：SCXK(皖)2016-0008。

1.2 菌株和药物 金黄色葡萄球菌菌株：由安徽中医药大学第一附属医院检验科微生物室提供。芙蓉膏：由安徽中医药大学第一附属医院制剂中心生产，批号：皖药制字Z20050068；莫匹罗星软膏(百多邦)：中美天津史克制药有限公司，规格：每支10 g。

1.3 主要试剂和仪器 兔TNF-α、IL-6及TGF-β1试剂盒：上海源叶生物技术有限公司，批号：CK-E80109R，CK-E80171R，CK-E80108R。Olympus CX31光学显微镜：日本Olympus公司生产；XN-9000全自动血球仪：Sysmex公司生产；RT-6000酶标仪：雷杜公司生命科学有限公司生产。

2 实验方法

2.1 动物分组、造模及给药处理 将50只新西兰大白兔随机分为5组，分别为正常组、模型组、百多邦组、芙蓉膏高剂量组、芙蓉膏低剂量组，每组10 只。兔后背剪毛，6%的硫化钠脱去后背部区域(取直径5 cm的近似圆形)毛发。24 h后，除正常组外，其余组兔均用20%乌拉坦4 mL/kg耳缘静脉麻醉，脱毛区域皮下注射金葡菌0.5 mL(1.5×108CFU/mL)，敷料固定，造模后12 h兔背部出现红肿热痛为造模成功[8]。 正常组：生理盐水外涂脱毛区，每次涂擦5 mL；模型组：生理盐水外涂病损区，每次涂擦5 mL；百多邦组：百多邦外涂，3.0 g/kg；芙蓉膏低剂量组：芙蓉膏外敷，1.5 g/kg；芙蓉膏高剂量组：芙蓉膏外敷，3.0 g/kg；1次/d，共干预7 d。

2.2 观察指标及测定

2.2.1 组织病理学观察 于干预第7天20%乌拉坦静脉麻醉，生理盐水清洗背部病变部位，组织剪将兔背部病变组织取下4 cm×4 cm大小，制片，HE染色，光学显微镜下观察病变组织脓肿大小、炎细胞浸润、纤维组织及新生毛细血管情况。

2.2.2 全血WBC和NE数量 于干预第2、4、7天给药后8 h兔耳缘静脉采血，抽取1.5 mL静脉血放入专业真空采血管，用全自动血球仪检测全血WBC和NE数量。

2.2.3 血清TNF-α、IL-6及TGF-β1测定 严格按ELISA试剂盒说明书进行。

3 结果

3.1 各组兔背部感染组织病理观察结果 正常组组织内未见炎症反应，无炎细胞浸润；模型组组织内可见炎症反应显著，大量炎细胞浸润；百多邦组见组织内炎症减轻，少量炎细胞浸润；芙蓉膏高、低剂量组组织内炎症及炎细胞浸润均明显减轻，以高剂量组减轻明显，亦可见纤维组织增生及少量新生毛细血管，以高剂量组增生明显。见图1。

图1 各组兔背部组织HE染色结果(×400)

3.2 各组兔第2、4、7 天全血WBC和NE数量比较 见表1。

表1 各组兔全血WBC、NE数量比较

3.3 各组兔第2、4、7 天血清TNF-α、IL-6水平比较 见表2。

表2 各组兔血清TNF-α、IL-6水平比较

3.4 各组兔第2、4、7 天血清TGF-β1水平比较 见表3。

表3 各组兔血清TGF-β1水平比较

4 讨论

芙蓉膏是安徽中医药大学第一附属医院已故著名老中医汤琢成主任医师倾毕生精力研制的外用膏剂，由木芙蓉叶、冰片、天南星、藤黄、薄荷油等中药按一定比例经特殊工艺制造而成，方中木芙蓉叶味辛平，归肺、肝经，具有凉血、解毒、消肿等功效，藤黄为藤黄科植物藤黄树分泌的干燥树脂，酸涩，有毒，归脾经，具破血散结、解毒之功，二药共为君药。天南星味苦辛，性温，有毒，归肺肝脾经，具有散结消肿作用，独为臣药。冰片味辛苦，性微寒，归心脾经，辛凉开散具清热解毒止痛之功，与薄荷油共为佐使。诸药合用有清热解毒、消肿散结、凉血止痛的功效。芙蓉膏组方精当具有科学性，前期临床实验证实芙蓉膏具有抗炎镇痛作用[4-7]。本实验显示，芙蓉膏高、低剂量组可明显减轻急性软组织感染模型兔背部炎症反应，芙蓉膏高剂量组可减少急性软组织感染模型兔背部炎细胞浸润，亦可促进其病变组织纤维组织增生及毛细血管再生。

炎症因子TNF-α和IL-6主要来源于单核巨噬细胞，可介导炎症反应。TNF-α可直接作用于细胞、微血管等，造成组织损伤[9]。IL-6作为炎性细胞主要调节因子，可促进淋巴细胞的分化和炎性激活，使炎症反应进一步加强[10]。本实验研究显示芙蓉膏高剂量可降低模型兔血清TNF-α、IL-6表达(P<0.01)，提示芙蓉膏高剂量可减轻急性软组织感染模型兔的炎症反应。

TGF-β1属于大分子复合物，广泛存在于全身组织，具有调节细胞生长和分化的作用，炎症刺激可激活TGF-β1，可使成纤维细胞表型发生改变，促使成纤维细胞对胶原基质的收缩作用，可以加速创面的愈合[11]。本实验结果显示芙蓉膏高、低剂量可降低模型家兔全血WBC、NE数量，增加血清TGF-β1表达(P<0.01)；该结果表明芙蓉膏高、低剂量可促进急性软组织感染模型兔的创面修复。

本研究表明，芙蓉膏可减轻急性软组织感染模型兔背部病变组织的炎症反应，促进创面修复，高剂量优于低剂量；其机制可能与减少全血WBC及NE数量，调节促炎因子TNF-α、IL-6与多功能生长因子TGF-β1之间动态平衡有关。该实验亦为其更广泛应用于临床提供实验依据。