CXCR4、VEGF在非小细胞肺癌组织中的表达及意义

赵苑池 莫秋荣 易华宇 梁云彩 宋柳萍

摘要：目的探究非小细胞肺癌（NSCLC）组织中趋化因子受体-4（CXCR4）、血管内皮生长因子（VEGF）的表达及意义。方法回顾性分析2019.03～2020.02本院70例NSCLC组织标本及20例正常肺组织标本，均采用免疫组化SP法检测CXCR4、VEGF的阳性表达，观察两种组织、不同TNM分期NSCLC组织中CXCR4、VEGF的表达情况，对比高表达率。结果NSCLC组织中CXCR4、VEGF的高表达率分别为42.86%、67.14%，均高于正常肺组织的5.00%、25.00%（P<0.05）;Ⅲ+Ⅳ期NSCLC组织中CXCR4、VEGF的高表达率分别为58.33%、80.56%，均高于Ⅰ+Ⅱ期的26.47%、52.94%（P<0.05）。结论CXCR4、VEGF在NSCLC组织中的表达水平高于正常肺组织，且与NSCLC患者的临床分期存在一定的联系。

关键词：非小细胞肺癌;CXC趋化因子受体-4;血管内皮生长因子;TNM分期

【中图分类号】R734.2  【文献标识码】A  【文章编号】1673-9026（2021）14--01

非小细胞肺癌（NSCLC）是主要的肺癌类型，多数患者就诊时已处于中晚期阶段，所有肺癌患者的5年生存率仅达到19.7%，侵袭和转移是临床治疗失败的重要因素[1]。目前认为，趋化因子受体-4（CXCR4）参与肿瘤器官的特异性转移，血管内皮生长因子（VEGF）在肿瘤的侵袭、转移中发挥着重要作用。因此，了解NSCLC组织中上述指标的表达，对于疾病的早期诊断、治疗及预后均有着积极意义。为进一步深入临床对NSCLC的深入认识，本研究对NSCLC与正常肺组织、不同TNM分期NSCLC组织中CXCR4、VEGF的表达情况进行观察，分析如下。

1 资料与方法

1.1一般资料

回顾性分析以免疫组化SP法检测CXCR4、VEGF阳性表达的70例NSCLC组织标本及20例正常肺组织标本，对应的研究对象分别为NSCLC患者及肺部良性病变者，均选自2019.03～2020.02期间。纳入标准：NSCLC患者及肺部良性病变者均经病理检查确诊;既往无恶性肿瘤病史;未接受过放疗、化疗;无其他肺部感染性疾病。排除标准：患免疫系统疾病;行姑息性切除者;术中未行淋巴结清扫者。NSCLC患者：男46例，女24例;年龄41～75岁，平均（60.23±6.59）岁;有吸烟史32例;TNM分期：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期分别为9、25、29、7例。肺部良性病变者：男12例，女8例;年龄41～75岁，平均（60.14±6.52）岁;有吸烟史8例。两组性别、年龄、吸烟史对比无差异（P>0.05）。

1.2 方法

使用4%中性甲醛固定液对所有组织标本进行固定（6～48h），脱水包埋后石蜡切片，厚度3μm。采用免疫组化SP法进行检测：切片65℃烤片30min以上;环保透明剂连续脱蜡10min×4;梯度乙醇洗脱环保透明剂5min×4，将切片在流水中冲洗5min;使用已稀释成工作液的EDTA抗原修复液在電磁炉（2100W）上进行高压抗原修复，喷气后1.5～2min停止加热;待高压锅自然冷却10min后，用流水冲洗高压锅外壁加速冷却取出切片;切片取出后在流水下冲洗1～3min;灭活内源性过氧化氢阻断10min;PBS缓冲液浸洗3min×4;使用免疫组化笔标记切片组织范围;滴加一抗CXCR4（abcam公司，稀释浓度为1：150）、VEGF（福州迈新试剂），室温孵育3h;PBS缓冲液浸洗切片3min×4;滴加二抗并在室温下孵育15min;PBS缓冲液浸洗切片3min×4次;DAB显色3～10min;流水浸洗1～5min;苏木素染色10～30s;分化5s;返蓝5s，梯度乙醇脱水透明后封片。实验过程中设置阴性对照，使用PBS缓冲液代替一抗。严格按照试剂盒相关操作执行。

1.3观察指标

于高倍视野下进行观察，参照Andre评分标准，随机选取5个高倍视野（×400），胞浆内观察到一致的淡黄色至棕褐色颗粒为阳性，计算染色肿瘤细胞百分率。根据半定量方法，结合染色阳性细胞百分率及染色强度进行综合评定，评定标准[2]：①阳性细胞：0分：阳性细胞占0%～5%;1分：阳性细胞占6%～30%;2分：阳性细胞占31%～60%;3分：阳性细胞占61%～100%;②染色强度：0分：无着色;1分：淡黄色;2分：棕色;3分：棕褐色。取上述两项评分之和，总分0～3分：低表达;总分4～6分：高表达。①观察NSCLC组织及正常肺组织中CXCR4、VEGF的表达情况;②观察不同TNM分期NSCLC组织中CXCR4、VEGF的表达情况。

1.4 统计学处理

以SPSS21.0统计软件进行分析，计数资料以%表示，采用X2检验;计量资料以（）表示，采用t检验，P<0.05代表差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两种组织中CXCR4、VEGF的表达情况

NSCLC组织中CXCR4、VEGF的高表达率分别为42.86%、67.14%，与正常肺组织中的5.00%、25.00%对比均有统计学差异（P<0.05），见表1。

2.2 不同TNM分期NSCLC组织中CXCR4、VEGF的表达情况

Ⅲ+Ⅳ期NSCLC组织中CXCR4、VEGF的高表达率分别为58.33%、80.56%，与Ⅰ+Ⅱ期的26.47%、52.94%对比均有统计学差异（P<0.05），见表2。

3 讨论

近年来，靶向药物的应用为恶性肿瘤患者提供一种新的治疗途径，在改善预后方面取得良好的效果，故趋化因子成为临床研究的热点。由于不同临床分期，NSCLC的治疗方案存在差异，而对于早期患者，其相对而言可采取手术治疗，在促进预后方面有一定的积极意义。鉴于此，本研究主要从NSCLC组织与正常肺组织、NSCLC组织不同TNM分期两个方面进行比较，为NSCLC的诊断及治疗提供参考。

CXCR4是G蛋白耦联的7次跨膜蛋白受体，可与配体基质细胞衍生因子（SDF-1）相结合，促进靶细胞支架的重构，CXCR4/SDF-1反应轴可能在胚胎发育、骨髓造血、细胞迁移、器官发育等病理生理过程中发挥着至关重要的作用[3]。高磊[4]等表示，CXCR4在NSCLC中呈高表达状态;是否存在淋巴结转移、不同TNM分期NSCLC组织中的CXCR4陽性率均存在显著差异，证实该蛋白与NSCLC的发生、发展以及转移有着密切联系。本研究结果显示，NSCLC组织中CXCR4的高表达率为42.86%，高于正常肺组织的5.00%;Ⅲ+Ⅳ期NSCLC组织中CXCR4的高表达率为58.33%，高于Ⅰ+Ⅱ期的26.47%，与上述研究相似，说明CXCR4在NSCLC组织中呈高表达，且与肿瘤的发展存在密切联系。VEGF是一种血管生成促进因子，可促进内皮细胞增殖，诱导肿瘤血管生成，在肿瘤细胞的浸润、转移中发挥着重要作用，目前以VEGF为靶点的抗血管生成药贝伐珠单抗用于晚期NSCLC的治疗[5]。本研究发现NSCLC组织中VEGF的高表达率为67.14%，高于正常肺组织的25.00%;Ⅲ+Ⅳ期NSCLC组织中VEGF的高表达率为80.56%，高于Ⅰ+Ⅱ期的52.94%，提示VEGF在肿瘤的发生、发展中有着重要意义。

综上所述，CXCR4、VEGF在NSCLC组织中呈高表达状态，在肿瘤的发生、发展中有着一定的促进作用。

参考文献：

[1]姚益，曾小飞，李卫，等.非小细胞肺癌中GPR120、VEGF的表达及临床意义[J].临床与实验病理学杂志，2020，36（6）：671-676.

[2]熊海林，孙爱华，周思维.联合检测CXCR4与E-Cad在非小细胞肺癌中的表达与脑转移的相关性研究[J].现代诊断与治疗，2017，28（1）：1-3.

[3]陈晓东，任开明，段琼玉，等.CCR7蛋白和 CXCR4蛋白表达水平与非小细胞肺癌患者的预后及相关性研究[J].河北医药，2016，38（3）：331-334.

[4]高磊，朱晓峰，乔峰，等.Ⅰ～Ⅱ期非小细胞肺癌组织中HIF-1α和 CXCR4的表达及临床意义[J].医学理论与实践，2018，31（14）：2059-2060，2083.

[5]王晨亮，彭丽姿，周兵.非小细胞肺癌组织Smac、TLR、VEGF及其受体的表达变化研究[J].中国医学创新，2021，18（25）：1-4.

课题名称：崇左市科技计划项目合同（崇科攻2019020）