藏药湿生扁蕾不同部位中木犀草素、当药醇苷及当药黄素含量测定

蔡皓 张二豪 禄亚洲 王忠斌 张露之

摘要：目的：对藏药湿生扁蕾不同部位中木犀草素、当药醇苷和当药黄素的含量进行测定分析。方法：采用高效液相色譜法进行含量测定，色谱柱为Supfex RP-C18（4.6×250 mm， 5.0 μm），柱温30 ℃，流速0.8 mL/min，进样量10 μL，检测波长254 nm，流动相甲醇（A）-0.4%磷酸水溶液（B）：在0～20 min内， A：B=40：60～63：37，线性梯度洗脱;在20～50 min内，A：B = 63：37等度洗脱。结果：在上述条件下，3种成分分离良好，木犀草素线性范围为0.9878-2.1732 ug，回归方程Y=4513X+0.762（r=1），当药醇苷线性范围为0.1062-1.6997 ug，回归方程：Y=4887X-1.413（r=1），当药黄素线性范围为0.1054-1.6872 ug，回归方程：Y=2064X+19.37（r=0.9999），三者线性关系良好。精密度、重复性和稳定性的 RSD均<3.0 %。含量测定发现叶中木犀草素含量最高，种子中含量最低;当药醇苷含量最高的是茎，其次是根，叶、花及种子中未检测出;当药黄素在花中含量最高，其次是根和茎，叶及种子中未检测出。结论：藏药湿生扁蕾不同部位中所含有效成分木犀草素、当药醇苷及当药黄素含量存在差异，本文将为湿生扁蕾的深入研究提供理论依据。

【中图分类号】R28  【文献标识码】A  【文章编号】1673-9026（2021）14--01

湿生扁蕾为龙胆科扁蕾属一年生草本植物湿生扁蕾Gentianopsis paludosa （Munro） Ma.的干燥全草，夏季花盛期采收，又称为龙胆草、沼生扁蕾，属于传统藏药，其性寒、味苦，具有清热利湿、解毒之功。临床主要用于治疗肝炎、胆囊炎、肾盂肾炎、感冒发热、目赤肿痛、小儿腹泻等病症。湿生扁蕾主要生长在1180～4900 m 之间的河滩、林下、山坡草地及潮湿沼泽地，在我国华北、西北及西南均有分布，尤其是青海及甘肃的南部、云南、四川、西藏等地分布广泛[1-4]。研究发现，湿生扁蕾中含有酮类、萜类和黄酮类等多种化合物，是其发挥生物活性的主要物质，其中木犀草素属于黄酮类化合物，其对番泻叶诱导的小鼠腹泻模型具有较好止泻作用，当药醇苷为酮苷类化合物，具有抑制结核菌的作用，当药黄素是黄酮苷类化合物，对鼠伤寒杆菌具有中度抑制作用[5]。关于湿生扁蕾不同部位中此三种有效成分含量的差异性未有文献报道，本文采用高效液相色谱法同时测定湿生扁蕾叶、花、茎、根、种子5种不同部位中木犀草素、当药醇苷和当药黄素的含量，旨在为藏药湿生扁蕾药材质量控制、产品开发及其它深入研究提供理论依据。

1 实验材料

1.1实验仪器

Agilent 1260型高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）;KQ-700DE数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）;EX2202ZH/E型电子天平（奥豪斯仪器有限公司）;FW135型中草药粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）。

1.2药品与试剂

木犀草素对照品（批号：810D022，纯度≥98%），购自北京索莱宝科技有限公司;当药醇苷对照品（批号：DSTDDOO8301，纯度≥98%），当药黄素对照品（批号：DST200817-084，纯度≥98%），均购自成都乐美天医药科技有限公司。甲醇为色谱纯;水为超纯水;其余试剂（甲醇、磷酸等）均为分析纯。湿生扁蕾采自西藏自治区林芝市色季拉山，经罗建教授鉴定为龙胆科植物Gentianopsis paludosa （Hook. f.） Ma。

2方法与结果

2.1色谱条件[6-7]

色谱柱为Supfex RP-C18（4.6×250 mm， 5.0 μm），柱温30℃，流速0.8 mL/min，进样量10 μL，检测波长254 nm，流动相甲醇（A）-0.4%磷酸水溶液（B）：在0～20 min内， A：B=40：60～63：37，线性梯度洗脱;在20～50 min内，A：B = 63：37等度洗脱。在上述色谱条件下，分别精密吸取混合对照品溶液及供试品溶液进样，得到色谱图1。

1-当药黄素，2-当药醇苷，3-木犀草素

1-Swertisin， 2-Swertianolin， 3-Luteolin

2.2 混合对照品的制备

分别精密称取对照品当药黄素5.38 mg、当药醇苷5.42 mg、木犀草素5.04 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容，得到浓度分别为当药黄素0.211 mg/mL、当药醇苷0.212 mg/mL、木犀草素0.198 mg/mL的混合对照品溶液，备用。

2.3供试品溶液的制备

称取湿生扁蕾不同部位药材细粉（过4号筛）约5.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率40kHZ）45 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜过滤，即得供试品溶液，按“2.1”项下色谱方法测定。

2.4线性关系考察

分别精密吸取“2.2”项下混合对照品溶液0.5、2.0、4.0、6.0、8.0 μL依次注入高效液相色谱仪，测定各对照品的峰面积。以对照品溶液浓度的（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程，见表2。

2.5 精密度考察

精密吸取“2.2”项下同一混合对照品溶液，分别重复进样5次，测得各成分的峰面积，计算得各对照品峰面积的RSD分别为1.45% 、1.89%、1.92%，表明仪器的精密度良好。

2.6 稳定性考察

取“2.3”项下同一供试品溶液，分别在0、2、4、8、12、24 h时进样，测定计各色谱峰峰面积计算当药黄素、当药醇苷和木犀草素含量，计算得各成分含量RSD 分别2.28%、1.86%、1.77%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.7 重复性考察

取湿生扁蕾根药材细粉（过四号筛），按照“2.3”项下样品处理方法平行制备供试品溶液5份。分别测定当药黄素、当药醇苷和木犀草素的含量，计算得RSD分别为 2.58%、2.16%、2.23%，表明此方法重复性良好。

2.8 湿生扁蕾药材不同部位有效成分的含量测定

将湿生扁蕾药材不同药用部位粉碎过筛，分别按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定各成分的峰面积，并分别计算各成分的含量，结果见表3。由表中可以发现，湿生扁蕾药材不同药用部位中所含有效成分木犀草素、当药醇苷及当药黄素含量存在差异，其中叶中木犀草素的含量最高，种子中含量最低，顺序依次为：叶>花>茎>根>种子;当药醇苷含量最高的是茎，其次是根，叶、花及种子中未检测出;当药黄素花中含量最高，其次是根和茎，叶及种子中未检测出。

3 结论与讨论

湿生扁蕾为传统的临床常用藏药，使用历史悠久，现代药理学研究发现其还具有抗炎镇痛，保肝利胆，抑菌，抗结肠纤维化，抗肿瘤等多方面的生物活性。木犀草素、当药醇苷和当药黄素是其发挥生物活性的主要物质基础，本文对其不同部位中该3种有效成分进行了测定分析，结果发现湿生扁蕾不同药用部位中所含3种成分含量存在差异性，主要呈现出以下特点，叶中木犀草素的含量最高，种子中最低，不同部位含量顺序为：叶>花>茎>根>种子;当药醇苷含量最高的是茎，其次是根，叶、花及种子中未检测出;当药黄素在其花中含量最高，其次是根和茎，叶及种子中未检测出。因此，推断湿生扁蕾发挥生物活性是其各不同部位综合作用的结果。此外，含量测定所使用的检测方法操作简便，结果准确且重复性好。本研究为藏药湿生扁蕾质量控制及其它深入研究提供了参考依据。

参考文献：

[1] 寇亮， 刘越敏， 柳娜， 等. 湿生扁蕾乙醇提取物中总酮含量测定的不确定度评定[J]. 中药新药与临床药理， 2021， 32（03）： 400-405.

[2] 李玥. 湿生扁蕾的利胆有效成分研究[J]. 西北药学杂志， 2013， 28（04）： 346-349.

[3] 刘越敏， 寇亮， 柳娜， 等. 藏药湿生扁蕾药理作用研究进展[J]. 甘肃中医药大学学报， 2020， 37（04）： 84-86.

[4] 景明， 景威棟， 张尚智， 等. 藏药湿生扁蕾研究[M]. 甘肃： 甘肃科学技术出版社， 2017： 1-2.

[5] 卢年华， 赵慧巧， 景明， 等. HPLC与HPCE结合测定复方湿生扁蕾胶囊中6种化学成分含量[J]. 中国中医药信息杂志， 2016， 23（12）： 86-90.

[6] 王焕弟， 谭成玉， 赵静玫， 等. HPLC法测定藏药湿生扁蕾中2种有效成分的含量[J]. 药物分析杂志， 2007， 27（3）：421-423.

[7] 赵慧巧， 陈晖， 景明， 等. RP-HPLC法同时测定湿生扁蕾中木犀草素，当药黄素和当药醇苷的含量[J]. 中华中医药学刊， 2016， 34（3）：603-605.

基金项目：西藏自治区自然科学基金项目-2020厅校联合基金项目-青年项目（766660038）

作者简介：蔡皓199003，男，汉，单位，西藏农牧学院，邮编860000，学历，硕士。

通讯作者：王忠斌，E-mail： 251392216@qq.com，男，1983年，汉族，宁夏彭阳人，副教授，博士研究生，西藏农牧学院，野生动物与自然保护地、区域旅游发展。