犬细小病毒病研究进展

2020-12-28黄雅琴刘进辉

兽医导刊 2020年12期

黄雅琴刘进辉

（湖南农业大学动物医学院，湖南长沙 410128）

犬细小病毒病（Canine Parvovirus Infection，CP）是由犬细小病毒（Canine Parvovirus，CPV）引起的烈性传染性疾病，对2～6月龄幼犬危害最大，呕吐、腹泻和出血性肠炎为主要临床表现。该病在流行期间已分离出多株变异病毒，包括CPV-2、CPV-2a/2b、New CPV-2a/2b、CPV-2c（a）、CPV-2c（b）和 CPV-2c。由于变异率高，该病至今一直在世界各地肆虐，给养犬业造成极大的威胁。

1 犬细小病毒

（1）CPV的形态结构

CPV属于细小病毒科（Parvoviridae），细小病毒亚科（Parvovirinae），原细小病毒属（Protoparvovirus），该属还包括猫细小病毒（FPV），水貂肠炎病毒（MEV）等其他病毒。有研究发现，CPV和FPV、MEV有非常密切的亲缘关系[1]，三者的病毒形态结构、核酸DNA、蛋白核衣壳几乎完全一样[2]，有学者将这种现象归纳为细小病毒的不同分离株[3]。

CPV为线性负股单链DNA病毒，无囊膜，是一种食肉动物原病毒。病毒粒子呈正二十面体对称，为圆形或六边形，直径约25 nm，核衣壳由32个长3 ～ 4 nm的壳粒构成，整个病毒一共由60个VP1和VP2交替的基序构成。蛋白质质量占总质量的60%以上，其余为DNA。病毒粒子的分子质量为5.5×106 ～ 6.2×106 Da，在氯化铯中的浮力密度为1.39 ～ 1.42 g / cm3[4]，沉淀系数为23 S～ 27 S。

（2）CPV的理化性质

稳定性：所有细小病毒在外界环境中都是高度稳定的[5]。在pH 3～9、56℃条件下，CPV可保持1 h以上的活性。长期存放于低温环境对CPV的感染力基本不会有影响[6]，常温下可存活至少3个月，并且CPV的感染力只是略有下降，即使在常温下放置数月甚至数年，仍能从病犬的粪便中检测到病毒的存在。该病毒对高温也具有一定的耐受力，65℃条件下可存活至少30 min；80℃条件下也能存活数十分钟[7]。酒精、乙醚、氯仿等脂质溶剂、胰蛋白酶和大多数消毒剂不能有效杀灭CPV，但一些常规消毒剂，如0.5%福尔马林、氨水、0.175%次氯酸钠能起到很好的杀灭作用，另外氧化剂、紫外线也能使CPV失活[8]。

血凝性：因血凝素的存在，CPV能特异性地与猪、马、恒河猴等多种动物的红细胞结合，产生凝集现象。但不能与人和牛、羊、家禽等动物的红细胞结合。CPV的血凝性很强，灭活后血凝性基本不变，4℃环境下仍可凝集猪、恒河猴的红细胞。这种血凝特性可以作为CPV鉴定的参考指标[9-11]。CPV的血凝活性对pH有一定的要求，当pH ＞ 6.0时，CPV的血凝活性显著降低，pH5.8～6.0是CPV血凝试验的最适pH范围。血凝活性对温度也有要求，当外界温度处于37℃时，血凝试验敏感性显著降低，效果不佳。并且CPV在不同的温度和pH条件下，对不同物种红细胞的血凝性和敏感性都不同。比如，4℃环境下，猪、恒河猴等动物的红细胞会发生凝集，但禽类、鼠类等红细胞无凝集现象[12]。所以在进行CPV的血凝试验时，要合理设置实验环境，以达到最佳试验效果。

培养特性：CPV可在犬肾细胞（MDCK）、猫肾细胞（F81、CRFK）、犬肠管细胞等多种宿主细胞上生长，但不能在鸡胚中增殖[13]。CPV的复制机制有缺陷，不能单独进行复制，需在宿主细胞染色体复制开始后，依赖于宿主细胞的聚合酶和其复制体系来进行基因组复制。所以CPV传代通常采用S期同步接毒或40%～50%贴壁时再接种，此时细胞中富含聚合酶，有利于提高病毒滴度和病毒收集率。若要延迟接毒，则不能超过24 h。接种后一般不会马上出现细胞病变，通常盲传到2～5代时可观察到细胞脱落、崩解和破碎等明显的细胞病变[14-18]。

（3）致病机理

CPV通过粪口传播，对有丝分裂活性组织有亲嗜性，如淋巴组织、肠隐窝上皮细胞和骨髓，以及新生幼犬的心脏[19]。病毒首先在口咽的淋巴组织、肠系膜淋巴结和胸腺进行复制，随后在血液循环的带动下传播到全身，3 ～ 5 d就会引起病毒血症，然后传播至小肠绒毛隐窝，形成嗜酸性核内包涵体[20-21]。因淋巴和骨髓中病毒大量繁殖使白细胞数显著减少，所以大多数病犬在血常规检查时会出现白细胞低于正常值的现象[22]。在健康犬的小肠中，从隐窝端迁移出的肠上皮细胞在绒毛顶端分化成熟，然后得到消化吸收的能力进而帮助机体吸收营养[23-24]。但CPV侵入肠隐窝后，正常肠上皮细胞的更新被破坏，而成型的绒毛钝化、萎缩并逐渐失去吸收能力[25-26]。严重的肠炎，可因内源性毒素被吸收而致自体中毒，还增加了病毒易位和大肠杆菌败血症的风险，导致感染性休克并最终死亡[27]。研究发现，在2～3周龄血清阴性幼犬中，CPV可在心肌细胞中复制，引起急性心肌炎[28]。

2 犬细小病毒病

（1）临床症状

肠炎型：潜伏期自然感染的为7～14d，人工感染的为4～5d，潜伏期期间患犬和健康犬无区别，潜伏期后，病犬开始出现精神沉郁、拒饮拒食、呕吐、腹泻等异常病理症状[29]。病初，病犬吐出白色泡沫状秽物，逐渐变为黄色粘稠状，极少可见带有血丝的淡绿色胆汁呕吐物[30]，随着病情发展，呕吐物变为黄绿色粘稠状的胆汁。由于呕吐，大量体液散失，病犬可能出现脱水；呕吐严重时还可能造成肠套叠现象。典型临床表现是腹泻，病初犬粪便稀软、不成型[31]，然后很快出现番茄水样血便，伴有腐臭味；伴随着犬大量失血，病犬的眼结膜、口腔粘膜呈现发绀，苍白等病理现象。患病后期则出现黄疽、体温过低、静脉凝固等现象[32]。病犬的死因大多是脱水、电解液不平衡、大量的病毒感染等，其中幼犬因抵抗力差死亡率尤其高[33]。

心肌炎型：该类发病急，且无任何征兆，多是因4～6周龄的幼犬体内母源抗体滴度不够而导致发病。发病突然，且整个病程结束十分迅速，死亡率高达60～100%。病初，病犬精神状况良好，偶见拉稀、呕吐和体温上升；随后身体机能急剧减退，出现呻吟、可视粘膜苍白、干咳、呼吸困难等症状，听诊时可发现心内杂音、心律不齐等病理现象，最终病犬因急性心力衰竭而死亡[34-35]。

（2）防治

目前，针对犬细小病毒病的防制没有特别有效的药物，主要还是考虑免疫接种，一般使用生产成本较低的灭活疫苗和弱毒疫苗。我国主要使用的是CPV-2b型，但已被证实该型疫苗对幼犬无法起到完全免疫作用[36]。考虑到CPV的高突变率、弱毒苗毒力返祖、免疫接种失败等现象，新型疫苗的研发依旧很急迫，例如基因工程疫苗、核酸疫苗、载体疫苗等都处于研发当中。

主人在购买犬时应仔细观察犬的表现；对于流浪犬，在决定领养后，务必去正规医院进行检查；在饲养过程中，要注意饮食饮水和犬舍的卫生，做好定期消毒；春冬两季时，应加强保暖，加强营养；在幼犬未适应环境前，应细心照看，避免应激；待犬适应后，应及时带犬到正规医院接种疫苗。