对奶牛布鲁氏杆菌病检测相关问题的思考

1 临床症状及病因分析

布鲁氏杆菌属的牛种布鲁氏杆菌是奶牛布鲁氏杆菌病的病原，该病具有很强的传染性，种别不同的布鲁氏杆菌既可以感染牛宿主，还可以进行恶性病菌转移。潜伏期为2周～6个月。母牛流产是本病的主要症状，常发生于怀孕第5～8个月，产出死胎或软弱犊牛。流产时除表现分娩征象外，常有生殖道发炎症状，阴道粘膜发生粟粒大小的红色结节，流出灰白色粘性分泌物。胎衣往往滞留，流产后持续排出恶露，呈污灰色或棕红色，可持续2～3周，常发生子宫内膜炎、乳房炎。大多数母牛只流产1次。公牛常发生睾丸炎或关节炎、滑膜囊炎，有时可见阴茎红肿，睾丸和附睾肿大。

2 兽医实验室诊断方法及注意事项

2.1.1 虎红平板凝集试验 虎红平板凝集试验是一种简单快捷的诊断方法，可在4min内通过对凝集反应结果的观察作出患病诊断，这种诊断法通常应用于阳性牛的初步筛选中。

实验方法，取一洁净的板，画成20mm×20mm的方格，每一格分别滴入等量的被检血和虎红抗原（约0.03mL，使用时先将抗原瓶摇动，使之均匀悬浮），搅动血清和抗原使其混匀观察结果。最后，结果判定如果在4min内出现肉眼可见的凝集现象者，判为阳性，反之则为阴性。

2.1.2 试管凝集反应 这是我国当下现行的适用于实验室操作的法定诊断法。被检血清的稀释，一般情况下奶牛血清作1:50、1:100、1:200和1:400四个稀释度。被检奶牛血清凝集价为1:100时，判定为阳性反应；血清凝集价为1:50时判定为可疑反应。

2.1.3 奶牛布病快速诊断试纸条 该方法属于后期研发出的新型快速诊断法，也被成为胶体金法快速诊断试纸，具有快速、简单和特异性高的特点，检测准确性与试管凝集试验的相符高达97.8%，一般情况下该种方法在初检时应用得较多。

2.1.4 ELISA 检测法 相比于试管凝集反应诊断和虎红平板凝集试验，ELISA抗体检测法在病理上阴性或阳性的判定上更能排除其他感染因素影响，大大降低了主观判定伴随的随机性和不确定性。

2.2 细菌学诊断 最具可靠性和准确性的实验室诊断方法就是分离布鲁氏杆菌。从阴道分泌物、尿液、胎衣、脓汁、血液和脏器等组织做成涂片，选用沙黄、美蓝鉴别法进行染色，通过油镜镜检观察颜色变化，被染为红色的即是布鲁氏杆菌，呈现为蓝色的是其他细菌。

3 布氏杆菌病检测的生物安全问题

按照病原微生物名录及生物安全评价， 对于布鲁氏菌免疫学实验、涂片、显微观察需在二级生物安全实验室中进行操作；动物感染实验需在动物三级生物安全实验室中进行；活菌分离、培养离心、菌种冻干需在三级生物安全实验室中进行。对于二级及以上生物安全实验室必须配备生物安全柜，用于防护可能产生的气溶胶。因此在进行奶牛布氏菌相关操作时应在生物安全柜中规范操作，做到对实验人员、实验环境和实验样本的三重防护。

4 奶牛布鲁氏杆菌病防控措施

第一，强化饲养管理。在落实定期进行卫生消毒的基础上，提升饲喂科学性，适当增加微生物制剂增强对奶牛体内病原微生物的抑制作用，提高机体免疫力。第二，加大检测力度。要对新购入的奶牛进行严格的检疫工作，在2月以上隔离饲养过程中对其进行布鲁氏杆菌病检测，经过重复检验后结果均为阴性才能正式入场；要保证以正规渠道购买健康公牛冻精；牛群的日常管理要做好定期全群检测，及时发现病牛并采取离场隔离等措施，通过反复的检查和淘汰来净化牛群。第三，以犊牛为切入口培养健康牛群。基于良好严密的隔离条件，从健康公牛处获取精液完成人工受精，经过5～10d母牛初乳人工喂养后再进行健康牛乳或者巴氏灭菌乳喂养。分别在第5个月和第9个月进行免疫生物学检测，结果均为阴性才可送入健康牛群。第四，构建完整的牛场管理制度。以避免交叉感染为目的做到一畜一针的疫苗注射、一畜一消毒的人工受精器具；一旦有阳性奶牛被检测出，就用浓度为2%的氢氧化钠和浓度为15%的石灰乳对病牛污染的活动场所以饲养道具等进行消毒；对流产胎儿、羊水、产道分泌物以及胎衣等要给予妥善的消毒处理。

结束语：布鲁氏杆菌的致病机理较为复杂，具有多样性的免疫反应，常用的诊断方法有血清凝集反应、细菌学反应、补体结合试验以及ELISA等检测技术。近年来布鲁氏杆菌病的发病率呈上升趋势，这对我国畜牧业的持续稳定发展而言可谓是一个巨大的威胁，甚至可能成为严重的公共卫生问题。本文通过对病因和诊断方式的分析，就防控措施提出个人意见，愿为饲养和检验工作提供一些借鉴信息。