体外扩增的自体脂肪干细胞介导自体脂肪移植的临床效果

刘帅叶

（广州省深圳市四季医疗美容医院，广东 深圳 518052）

0 引言

寻找一个安全，有效，持久，无毒的组织代用品，对修复重建外科来说尤为重要。从20世界 70年代起，自体脂肪移植得以出现，移植后的脂肪吸收，坏死，感染和纤维囊性化等不良反应频繁发生，对脂肪移植的发展造成了严重的不良影响。促进脂肪移植成活，将脂肪移植后的并发症进行降低，是进行自体脂肪移植技术的干预关键[1]。本研究则以自体脂肪干细胞体外扩增混合自体脂肪颗粒移植的方法进行入手，探究其具体应用成果，展开具体分析如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料。选取我院患者为研究对象，患者的选取时间在2018年5月至2019年5月，共选取患者100例，将其随机分为两组，每组50例患者，一组患者经过自体脂肪干细胞分离和培养，促进体外扩增，对自体脂肪颗粒进行介导，实现注射移植，促进面部塑形的填充或是隆胸。对照组患者给予单纯的自体脂肪移植。患者中女89人，男11人，年龄在20-58岁，平均（34.34±2.34）岁，患者均无其他重大疾病，并签署知情同意书。

1.2 研究方法探究。主要试剂和仪器：主要将α-MEM无血清培养基进行应用，其中的Ⅰ型胶原酶和胰蛋白酶主要选择生产自美国Sigma公司的，而CD29-PE，CD31-PE，CD34-PE，HLA-AΒC-FITC，HLA-DR-FITC，主要选择生产自美国Βioscinces公司的，同时需要应用秋水仙素，其主要选择生产自上海瑞郎商贸有限公司的，同时倒置镜和成像系统选择生产自日本Olympus公司的。实验方法：对自体脂肪肝细胞的体外分离培养来说，需要在患者下腹部进行自体脂肪颗粒的抽取，其剂量为50-60 mL，并将其进行离心处理，离心次数为2次。并取脂肪层，将浓度为0.075%的Ⅰ型胶原酶加入其中，并将其放置在37℃温度环境中，将其进行消化处理，时间为60 min，并给予离心处理，离心速度为1500 r/min，离心时间为15 min，同时将上层脂肪组织进行去除，并将生理盐水进行应用，进行沉淀重悬，将直径在70 µm的细胞进行过滤筛选，将残余结缔组织进行去除，同时给予离心处理，此时的离心速度为1500 r/min，离心干预时间在5分钟。随后在其中加入红细胞裂解液，处理5分钟左右，并用生理盐水进行清洗，次数为2次，进行技术，将α-MEM培养基进行应用，以106个/mL，将其平铺在培养皿中，并记录为P0代，在观察其长满细胞后，将浓度为0.05%的胰蛋白酶进行应用，促进消化作用，以1:6的比例进行传代复制。自体脂肪干细胞免疫表型鉴定：将第3代的自体脂肪干细胞进行选取，同时采用胰酶消化，用PΒS进行清洗，清洗两遍，然后将其放置在温室内，进行避光孵育，时间为30 min，再用PΒS清洗2次，并采用流式细胞仪进行检测[2]。

1.3 统计学分析。以统计学软件SPSS 20.0为工具，对此次研究中所出现的数据进行统计学分析，对计量资料（±s）的比较结果予以t值验证，对计数资料（n，%）的比较结果予以χ2值验证，当结果呈现出P＜0.05时表示组间比较差异存在统计学分析价值[3]。

2 结果

2.1 hADSCs细胞形态。在给予患者接种24小时后，对其展开倒置显微镜观察，其结果显示大部分的细胞均表现为贴壁，并表现为梭形，并且其中混有少量的未贴壁的圆形淋巴细胞，在接种48小时后，需要进行换液操作，同时将淋巴细胞进行去除，在细胞长满后，细胞会表现出旋涡状生长，在传到第3代后，不存在形态上的差异性。

2.2 hADSCs免疫表型。在流式细胞仪下进行检测，其结果显示：第3代hADSCs高表达，主要为HLA-AΒC，CD37，CD44和CD29，对应的阳性率在95%以上，但是对应内皮标志物并不表示，造血细胞表面的标志物主要组织形容性抗原的阳性率在3%以下。

3 讨论

干细胞是一种可实现自我修复更新，并促进多向分化强能增强的细胞组织，其对应的重建功能和组织修复能力较强。寻找一个安全，有效，持久，无毒的组织代用品，对修复重建外科来说尤为重要[4]。根据相关研究数据显示，其曾在脂肪组织中将干细胞进行分离，并将其命名为脂肪间充质干细胞，从此之后，脂肪干细胞就得到了广泛关注，在将其与骨髓来源的MSCs进行比较时，脂肪干细胞可将储量进行提高，同时其取材过程较为方便，对患者造成痛苦程度相对较小，同时干细胞所对应的扩增能力相对较强，因此，可以说脂肪干细胞是组织工程中的理想种子细胞，根据近些年的发展研究显示，脂肪干细胞在培养过程中，可逐渐向中胚层脂肪细胞，软骨细胞分化，成骨细胞进行分化，同时可以向胰岛细胞，肝脏细胞和心肌细胞进行分化，其结果表明脂肪干细胞的多向分化强能较强[5]。

根据隆胸的近两年随访结果显示，其MRI中，hADSCs介导的自体脂肪移植，并不会促进腺体体积的增加，通常仅仅是促进乳房的皮下脂肪组织厚度增加，是对女性乳腺组织进行的安全隆胸手术。根据研究解结果显示hADSCs介导自体脂肪移植术，其所对应的特定较为显著[6]。本研究结果显示：在流式细胞仪下进行检测，其结果显示：第3代hADSCs高表达，主要为HLAAΒC，CD37，CD44和CD29，对应的阳性率在95%以上，但是对应内皮标志物并不表示，造血细胞表面的标志物主要组织形容性抗原的阳性率在3%以下。表明在hASACs介导的自体脂肪移植术是将具有分化成脂肪细胞的潜能的，其所对应的遗传稳定性较强，可将其自体脂肪间的充质干细胞注射移植，随后进行面部塑性或隆胸。研究数据显示，其具有将高移植脂肪细胞的成活率进行提高的作用，可促进移植脂肪进行血管再生，将脂肪颗粒的吸收进行减少，减少液化，从而可降低不良反应的发生率，具有显著的应用优势。对其原因进行分析，可以明确主要受三方面因素影响。首先，hADSCs具有分化成脂肪细胞的能力，在人体中注入hADSCs，可单次增加脂肪细胞移植数量，而且其可移植入体内的脂肪颗粒细胞为支架，在其周围进行聚集，分化成脂肪细胞和自体脂肪间充质干细胞和血管内皮细胞。其次，hADSCs具有分泌细胞因素和细胞基质的能力作用，可进一步促进移植脂肪颗粒细胞的血管再生，促进移植的脂肪颗粒细胞的稳定性加强，而且其增值分化的过程以脂肪颗粒细胞为模板。最后，进行体外培养扩增，其脂肪干细胞较为单一，具有稳定性，在移植前脂肪干细胞可再次进行免疫表型，遗传稳定和分化潜能的检测，从而可对移植细胞的质量进行稳定性。脂肪颗粒可为移植的hADSCs起到支架作用，hADSCs以脂肪颗粒细胞为模板进行分化，与脂肪组织的生物型状态更加符合，而单纯的脂肪颗粒移植并没有hADSCs介导的细胞内外环境，容易导致移植脂肪包成活率低等问题，脂肪颗粒的吸收，液化和感染等并发症的发生也会随之而来。而自体脂肪干细胞介导的自体脂肪移植术则可将此问题进行有效避免，提高细胞成活率[7]。

综上所述，就自体脂肪干细胞介导的自体脂肪移植术进行应用，其具有移植脂肪成活率较高，创伤较小，成形效果较好等特点，对临床发展具有积极意义，可在临床再生医学技术中进行推广使用。