不同加工方法对陕西地区引种五味子木脂素的影响

靳 淼，刘金娜，刘 慧，黑育荣，刘玉兰

(1.杨凌职业技术学院，陕西 杨凌 712100；2.陕西云岭生态科技有限公司，陕西 西安 710075)

五味子为常用中药材，又被称为“北五味子”，是木兰科五味子属植物五味子 Schisandra chinensis ( Turcz．) Baill.的干燥成熟果实。具有收敛固涩、益气生津、补肾宁心的作用，用于久嗽虚喘、梦遗滑精、遗尿尿频、久泻不止、自汗盗汗、津伤口渴、内热消渴、心悸失眠等症状[1]。目前针对五味子化学成分研究表明，其果实中存在多种化学成分，例如木脂素类、有机酸类、挥发油类、黄酮类等，木脂素为五味子中最主要成分，含有量最高[2]，其中的五味子醇甲亦作为药典中五味子含量的测定依据。

五味子主产地在东北，传统的产地加工方式主要为晒干，目前有研究表明不同加工方式对五味子质量有所影响[3～4]，但研究对象全部针对东北产五味子。五味子这几年在陕西南部引种成功，长势良好，产量高，成为当地特色产业，但对于引种地来说，五味子最适加工方法尚缺乏系统研究。笔者以陕西引种五味子为研究对象，通过测定五味子中木脂素类成分，对五味子的不同干燥方法进行了初步研究，以期为陕产五味子建立规范化加工方法提供依据。

1 材料与仪器

1.1 材料

五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子醇乙、五味子丙素、五味子乙素标品均购自上海源叶生物科技有限公司，批号分别为Y14F10H80840、P13O8S45575、R12O8F45508、P05J9S52197、P28J8F36961、P29J8F38066，纯度均大于98%；乙腈、甲醇均为色谱纯；水为纯净水(品牌：娃哈哈)。

五味子样品来自从东北引种到陕西省柞水县营盘镇药材种植基地的五味子“红珍珠”种苗。

1.2 仪器

液相色谱仪( 美国赛默飞公司；Thermo U3000)；电热鼓风干燥箱( 北京科伟永兴仪器有限公司；101-3型)；电子分析天平( 上海舜宇恒平科学仪器有限公司；FA2004型)；超声波清洗器( 昆山超声仪器有限公司；KQ -100DE型；超声功率600 W，40 kHz)。

2 方法与结果

2.1 加工方法

选择五味子成熟果实，均匀分为8份，分别进行不同加工处理。具体处理方法见表1。

表1 五味子不同加工方法

2.2 不同加工方法处理后五味子外观品质对比

不同加工方法处理后的五味子，外观性状见表2、图1。

表2 不同加工方法五味子外观特征

2.3 木脂素含量测定

2.3.1 色谱条件 WondaCract ODS-2 C18色谱柱(150 mm×4.6 mm，5μm)；流动相是乙腈(A)-水(B)，梯度洗脱：0～18min，A为50%；18～25min，A为50%～65%；25～30min，A为65%～75%；30～40min，A为75%～65%；40～45min，A为65%～50%；45～55min，A为50%。进样量为20 μL；流速为1.0 mL·min-1；检测波长218 nm；柱温30 ℃。

2.3.2 制备供试品溶液 不同处理的五味子打粉，过3号筛，称取0.5g粉末，记录重量，将粉末置具塞锥形瓶中，再加40mL甲醇，称重并记录。超声35min，提取结束后放置室温，称重，滴加甲醇补足到初始测定重量，摇匀并进行第一次过滤，第一次过滤后滤液再次通过0.45μm微孔滤膜进行第二次过滤，最终得供试品溶液。

2.3.3 制备对照品溶液 精密称取六种对照品，甲醇溶解，配制成 1.18 mg·mL-1(五味子醇甲)、0.51 mg·mL-1(五味子酯甲)、0.55 mg·mL-1(五味子甲素)、0.933 mg·mL-1(五味子醇乙)、0.46 mg·mL-1(五味子丙素)、0.75 mg ·mL-1五味子乙素)对照品溶液。

2.3.4 线性关系考察 精密量取上述对照品溶液0.05 mL、0.1 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1 mL、1.2 mL加入10 mL容量瓶内，甲醇定容后摇匀测定，色谱条件参照“2.3.1”。横坐标(X)为对照品溶液不同浓度，纵坐标(Y)为所测得峰面积，作标准曲线，进行线性回归，结果见表3。

表3 五味子中6种木脂素类成分线性关系

2.3.5 精密度试验 依据上述色谱条件，连续6次测定对照品溶液，比对峰面积并计算RSD值。最终测得RSD均≤1.34%，表明仪器的精密度良好。

2.3.6 重复性试验 精密称取6份，每份0.5g的五味子粉末，制备溶液进行分析，制备方法参照“2.3.2”，色谱条件依照“2.3.1”，记录峰面积，计算6种成分含量，结果表明RSD均≤2.28%，说明此方法重复性良好。

2.3.7 稳定性试验 吸取上述方法制成的五味子供试品溶液，分别于放置的第0、2、4、8、14、24 h进样分析检测，色谱条件依照“2.3.1”，记录各时间节点所测峰面积，结果各待测组分峰面积RSD均≤1.73%，说明样品溶液24 h内有良好的稳定性。

2.3.8 加样回收率试验 精密称取每份0.25 g已知含有量五味子样品5份，加“2.3.3”制备好的对照品溶液，不同对照品加入的量与样品中该成分含量基本一致。通过对结果的计算，得出加样回收率为：五味子醇甲98.81%、五味子酯甲102.15%、五味子甲素101.46%、五味子醇乙99.32%、五味子丙素102.48%、五味子乙素102.24%，RSD分别为1.35%、1.52%、2.03%、0.97%、1.08%、0.87%。

2.3.9 样品测定 取五味子样品，制备供试品溶液进行分析测定，制备方法依照“2.3.2”，色谱条件依照“2.3.1”，每批样品重复3次。结果见图2、表4。

表4 不同加工方法五味子药材中木脂素类成分含量(n=3)

3 讨论

五味子中木脂素类成分含量最高，具有保护心肌损伤、保肝、抗肿瘤等作用[5～8]，且2015版《中国药典》将五味子醇甲纳入药材评价指标，对五味子醇甲含量有着明确规定，故而选择木脂素类成分作为不同加工方法的参考指标。从表4可以看到，引种到陕西的五味子经过不同加工方式处理后，五味子醇甲含量最高，且符合药典0.4%规定。除五味子醇甲外，五味子酯甲、五味子乙素、五味子醇乙含量均较高，五味子丙素含量最少。

不同温度烘干的五味子六种木脂素类成分随着烘干温度增高逐渐增加，在50℃达到峰值后，逐渐降低。晒后稍蒸再阴干较直接晒干、稍蒸后晒干所测木脂素类成分含量均较高，这可能是晒干蒸制中成分发生了改变，具体原因有待进一步研究。

不同加工方法对五味子外观性状影响较大，晒干后成品颜色不好，整体干瘪；而热风烘干成品颜色较晒干好。晒干后颜色与东北产地晒干后颜色并不相同[9]，这可能与引种地气候采收时间有关。引种到陕西的五味子采收时间为8月初陆续采收，而原产地东北五味子采收期大多在9月上中旬[10]。因引种地晒干时环境温度整体较高，造成晒干后成品性状较差。

综合来看热风50℃烘干木脂素类成分较高，外观性状较好，为引种地适宜的干燥方法。