细胞DNA定量分析技术在膀胱尿路上皮癌诊断中的临床应用价值

王烨，王强，孔令彩，张然楼，孟凡全

（山东省临沂市中医医院，山东 临沂）

0 引言

尿路上皮癌是发生在泌尿系统尿路上皮的一种恶性肿瘤，分为上尿路上皮癌和下尿路上皮癌，其中又以下尿路上皮癌特别是膀胱尿路上皮癌最常见，约占90%，其余尿路部位较为少见，仅占5%。其在泌尿系统肿瘤患者中具有较高的发病率，对该病进行准确的诊断有助于患者的尽早治疗，对于提高肿瘤的治疗效果，改善患者生活质量，延长生存期具有一定的积极意义。随着DNA定量分析技术的深入研究，该项技术用于评估患者是否存在恶性肿瘤具有广阔的前景，且具有标本采集方便、安全、无创等优势，有助于对患者的病情进行评估。对于临床工作人员而言，该诊断方式具有灵敏性、准确性高的特点[1]。本项研究以90例患者为研究对象，对比分析细胞DNA定量分析技术与液基细胞学检查（TCT）对膀胱尿路上皮癌诊断的应用价值，详细情况如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集我院2018年1月至2019年1月收治的90例膀胱尿路上皮癌患者作为研究对象，男性54例，女性36例，男女比1.5:1，年龄28～86岁，平均（59.31±6.40）岁，均给予细胞DNA定量分析与TCT检查，且患者最终均进行膀胱内镜活检，经病理检查确诊。所有患者均知情同意本次研究，且经我院伦理有关部门批准。

1.2 方法

标本采集：取患者清晨首次中段尿液200 mL，将标本放置于离心管之中，进行离心处理，2000 r/min，时间为10 min，取部分沉淀细胞，使用沉降式液基染色机（北京鑫诺美迪基因检测技术有限公司提供）制作1张薄层细胞片，进行巴氏染色；另取部分细胞使用涂片离心机用于制成薄层细胞片，进行DNA染色程序（Feulgen染色法）。

TCT诊断：巴氏染色（广州市达诚医疗技术有限公司）片由我科经验丰富主治职称以上医师三人分别复诊，依据巴氏染色分级，诊断结果可分为4级：Ⅰ级，未见肿瘤细胞；Ⅱ级，可见少数异型细胞；Ⅲ级，可见可疑癌细胞；Ⅳ级，可见癌细胞。最终Ⅰ级与Ⅱ级定为阴性诊断，Ⅲ级与Ⅳ级定为阳性诊断。

细胞DNA定量分析：对DNA染色的薄层细胞片，采用全自动细胞图像分析系统[麦克奥迪（厦门）医疗诊断系统有限公司]对DNA染色片进行处理，通过测定细胞核中染色质的IOD值对细胞染色质含量进行判定，并使用DNA指数表示。结果可分为3种：（1）DNA指数为2，表示以正常2倍体细胞为主，未见异倍体细胞；（2）具有DNA指数高于2.5或小于2的细胞，且被检测出细胞数量高于细胞总数10%；（3）出现大量DNA指数超过2.5的细胞或检测到异倍体细胞峰。第一种为阴性，第二、三种判定为阳性。

病理诊断：对TCT及细胞DNA定量分析技术检查结果为阳性的病人要进一步进行膀胱内镜活检，并且对于检查结果为阴性的，但仍然存在临床症状的病人同样要进行膀胱内镜活检，活检标本经常规病理处理（日本樱花自动脱水机），石蜡包埋切片，HE染色，活检病理切片经我科经验丰富主治职称以上医师三人分别复诊。依据尿路上皮癌WHO/ISUP分类系统进行分级[2]，依据乳头及固有层浸润的组织学模式进行浸润判断[3]。

1.3 观察指标

观察两组检查方式诊断准确率。

1.4 统计学分析

将数据纳入SPSS 18.0软件中分析，计量资料用均数±标准差（ ±s）表示，计数资料用率（%）表示，采用t和χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

经膀胱镜活检病理检查90例尿路上皮癌患者，依据WHO/ISUP分类系统其中69例为低级别（77%），21例为高级别（23%）。依据乳头及固有层浸润的组织学模式非浸润性病变71例（79%），浸润性病变19例（21%）。此90例患者尿液分别经细胞DNA定量分析与液基细胞学检查，其中细胞DNA定量分析检出率为98.9%，液基细胞学检查检出率为80.0%，两种检查方式对比具有统计学意义（P＜0.05），详见表1。

表1 两种检查方式准确率对比（n, %）

3 讨论

泌尿系统尿路上皮癌在临床中较为常见，在肾盂、输尿管、膀胱以及前列腺等部位均可能发生。对尿路上皮癌诊断的方式较多，常见的有影像学检查、膀胱镜检查、尿液分析以及尿脱落细胞学检查等[4]，其中内镜下活检病理检查是公认的诊断此种疾病的金标准，但内镜检查属于介入性检查方式，患者较痛苦。而影像学检查虽能够对肿瘤进行分级评估，但所用造影剂对于患者的肾功能存在影响，且无法对原位癌进行检测，使用范围受到限制[5]。尿脱落细胞学的方法，又受到肿瘤的大小、分期、个体差异及肿瘤侵袭能力等客观因素的影响，尿液中脱落肿瘤细胞多少存在较大差异，且形态缺乏典型性等，虽可辅以免疫细胞化学的方法，但其敏感性较低，极容易出现误诊的情况[6-7]。

据研究表明，当机体细胞发生癌变时，其细胞核中的DNA含量显著升高，且DNA含量变化能够直接反应细胞的增殖能力[8]。DNA含量较高的肿瘤，在分化、转移以及复发等方面具有显著的恶性生物学行为。DNA含量以及倍体的变化能够有效的反应细胞的增殖状态，异多倍体属于判断恶性肿瘤的主要指标之一。细胞DNA定量分析正是基于以上理论进行的技术开发。对尿脱落细胞DNA含量进行检测能够作为诊断尿路上皮癌的依据。研究证明，该检查方式在口腔癌、宫颈癌、肺癌等方面均具有较高的诊断价值。

本研究中，细胞DNA定量分析的诊断准确率显著高于TCT，组间数据对比具有统计学意义。提示对膀胱尿路上皮癌患者给予细胞DNA定量分析能够取得理想的结果，在一定程度上防止误诊、漏诊，实现了检测的自动化、标准化、高效率。对于无血尿等表现的患者，可先进行TCT检查，对于可疑者再给予细胞DNA定量分析检查，避免误漏诊情况的发生。

综上所述，细胞DNA定量分析在诊断膀胱尿路上皮癌方面具有准确、安全、无创、高效等优点，能够对常规细胞学诊断方式的不足之处进行弥补，具有较高的敏感性，可有效减少临床误诊和漏诊，使患者尽早确诊，尽早治疗，应用价值高，值得在临床推广使用。