鸡感染滑液囊支原体的病理学观察

丁美娟,周永银,张懿,张丹,周勇岐*，尹秀凤,张小飞

(1.兆丰华生物科技(南京)有限公司，江苏 南京 211102;2. 江苏省农业科学院兽医研究所，江苏 南京 210014)

滑液囊支原体(Mycoplasmasynoviae, MS)引起鸡滑液囊炎，该病一年四季均可发生，但以冬春季节多发[1]。MS自然感染最早可发生在1周龄[2]，但急性感染通常见于4～16周龄，在急性感染期之后出现的慢性感染可持续终生，发病率一般为5%～15%，死亡率约为1%～10%[3]。MS除了可以通过隐性感染鸡和病鸡的水平传播外，还可以垂直传播，经蛋传播给子代，感染初期经卵传播率较高。在我国，无论是商品肉鸡、蛋鸡或种鸡[4-5]，MS引起的传染性滑膜炎和感染均有发生，给养鸡业造成巨大的经济损失。近年来我国鸡群MS感染的报道较多，对MS生物学特性、免疫原性及诊断方法的研究报道也较多[6-9]，但对MS感染的病理变化报道较少。本试验以1例自然感染MS、表现为典型临床症状的病例为研究对象，进行了病理组织学观察。

1 材料与方法

1.1 病料

病料来自江苏某养殖场，10只50日龄左右的疑似MS感染病鸡。

1.2 标准菌株

MS阳性菌株GX11-T株，购自中国兽医药品监察所。

1.3 主要试剂

DNA提取试剂盒、DNA Taq酶、dNTP和分子质量标准DL2000 DNA Marker购自大连宝生物技术有限公司；氯仿、异丙醇、乙醇、甲醛等均为国产分析纯产品。

1.4 流行病学调查与临床观察

对发病鸡场鸡群年龄、发病率等发病情况进行调查，观察发病鸡的临床症状和病死鸡的剖检变化，记录结果并作出初步诊断。

1.5 病料的PCR检测

采用PCR的检测技术，参考丁美娟等[10]建立的对临床疑似MS病变主要侵害部位鸡肿胀跗关节腔内容物进行MS病原检测。

根据鸡滑液囊支原体16S rRNA基因(N-R044811)序列设计的引物，预期扩增目的片段大小为1 077 bp，由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。

上游引物P1： 5′-CCTACGGGAGGCAGCAGT-3′;

下游引物P2： 5′-AGGCAGTCGTGTCCCAAGGTC-3′。

1.6 病理组织学观察

将病鸡关节、爪垫、肝脏、肾脏、胸腺等组织，用10%中性甲醛溶液固定组织，石蜡包埋，常规HE染色后观察其病理组织学变化。

2 结果与分析

2.1 流行病学及临床检查

2018年10月份，该养殖场存栏15 100只海兰褐蛋鸡，在50日龄左右，鸡出现跛行、采食量下降、精神沉郁、羽毛粗乱，有的发病鸡消瘦、关节肿大、爪垫肿胀，龙骨滑液囊处有囊肿，部分鸡的排泄物可见大量尿酸或绿色的尿酸盐沉积，疑似MS感染，发病率约2%。

2.2 PCR检测

对送检的疑似MS病鸡肿胀跗关节腔内容物直接进行PCR扩增，经琼脂糖凝胶电泳，在紫外透射仪下可见约1 077 bp特异性条带，与目的片段大小一致，见图1。

M.DL2000 DNA Marker; 1. MS阳性对照GX11-T; 2～7. 检测样品; 8. 阴性对照

2.3 PCR产物测序与分析

PCR扩增产物经过克隆、序列测定后，通过在线BLAST比对分析发现，检测样品与NCBI收录MS的16S rRNA基因序列同源性较高，同源性约92%～98%，证明该检测样品为MS感染。

2.4 剖检变化

解剖病鸡关节滑膜组织有黏性渗出物(图2A)，爪垫肿胀，分泌黏性渗出物(图2B)，龙骨的滑液囊有黄白色纤维素性干酪样物质(图2C)；病鸡气管、肝、脾、肾等无肉眼可见病变。

A. 跗关节黏性渗出物; B. 爪垫肿胀,分泌黏性渗出物; C. 龙骨黄白色纤维素性干酪样物质

2.5 病理组织学观察

肝脏：肝脏主要变化为肝小叶中央静脉和周围的肝窦扩张，充有大量红细胞，血管内皮细胞肿胀，汇管区周围少量炎症细胞浸润(图3A)。

肾脏：肾组织大面积灶性出血，肾小球扩张，毛细血管内皮细胞肿胀、增生，肾小管上皮细胞与基底膜分离形成一环状空白区(图3B)。

胰脏：胰岛中可见淋巴细胞浸润，腺泡排列较疏松，炎症细胞灶性浸润(图3C)。

胸腺：胸腺髓质中有明显出血和充血，大量血管扩张淤血以及炎性细胞浸润(图3D)。

法氏囊：法氏囊皮质与髓质界限模糊，皮质细胞大量减少消失，髓质细胞较疏松(图3E)。

小肠：肠黏膜层绒毛结构不完整，部分仅见裸露的固有层结构，肠腔内可见大量脱落的细胞，肠腺较丰富，肌层纤维排列折皱状(图3F)。

爪垫：部分真皮结蹄组织疏松、坏死，大量异嗜性细胞浸润和少量淋巴细胞浸润(图3G)。

关节：关节腔内以异嗜性细胞为主的炎性细胞崩解坏死，并伴有少量红细胞渗出(图3H)；关节囊结缔组织坏死，有巨噬细胞、淋巴细胞等炎性细胞浸润(图3I)。

A.肝脏; B. 肾脏; C.胰脏; D.胸腺; E.法氏囊; F.小肠; G.爪垫; H. 跗关节腔; I. 关节囊

3 讨论

对MS感染鸡各组织器官病理学观察结果显示，病鸡大部分组织器官的实质细胞均受到不同程度的病理性损伤。病理学观察结果同时显示，MS病原主要侵害部位关节和爪垫，腔囊内均有大量脓液和炎性细胞渗出、崩解、坏死，与聂立欣等[11]报道一致。病鸡爪垫部分真皮结蹄组织疏松，坏死，大量异嗜性细胞浸润和少量淋巴细胞浸润，部分形成脓液。这些病变导致发病鸡出现跛行、瘫痪。另外MS感染鸡肝脏等多处组织炎性细胞浸润，肝脏血管内皮细胞肿胀，肾组织大面积灶性出血，可见MS感染鸡存在血液循环障碍。胸腺髓质充血、出血以及炎性细胞浸润，法氏囊皮质细胞减少，导致机体免疫能力下降，该发现进一步证实了MS不仅导致关节炎和滑膜炎的发生，同时导致生长发育迟缓，甚至会引发免疫系统的抑制[12]。

MS感染已经遍及全球，尤其近几年来，我国MS感染常呈暴发趋势，给养鸡业造成严重的经济损失。2013年第18届世界禽病大会，就有专家提出“现在以及不远的将来MS的危害会超过鸡毒支原体(MG)”的观点[13]。国内外虽然已有许多关于MS的报道，但国内大部分报道基于病鸡的临床症状和剖检病理变化所作出的诊断，有关MS病理组织学研究尚不多见。本试验后期对该例临床样品进行了进一步实验室病原检测，排除了沙门氏菌、金黄色葡萄菌等细菌病，病毒性关节炎等病毒病混合感染；参考丁美娟等[14-15]MS分离和鉴定技术，进一步进行了SPF鸡人工感染试验，复制出典型的MS自然病例，说明该鸡场送检的疑似MS病鸡为单一、纯净MS病原感染。本研究通过MS临床典型发病病例进行系统的病理学观察，为该病的诊断提供可靠的依据，丰富了MS感染鸡的病理学资料。