食管癌组织CDC25B、PED/PEA-15表达变化及其临床意义

王明，王亮，何翔 沧州市中心医院，河北沧州061001

食管癌是上消化道常见的恶性肿瘤之一，是全球第八大常见恶性肿瘤。食管癌早期通常无明显症状，一旦出现吞咽困难症状就诊时，多数患者病程已进入中晚期，病死率较高，预后较差，5年生存率仅15%～25%[1]。目前，食管癌主要采取以手术为主的综合治疗，但效果并不能令人满意，部分患者即使经积极治疗仍可出现复发或转移[2]。细胞分裂周期蛋白25B(CDC25B)是CDC25家族中的重要成员，其基因定位于人染色体20p13。CDC25B既具有酪氨酸激酶活性又具有丝氨酸激酶活性，能够通过激活细胞周期蛋白依赖性激酶2，促进正常细胞的有丝分裂。近年研究发现，CDC25B基因是一种潜在的致癌基因，在多种肿瘤组织中表达上调，如皮肤鳞癌、子宫内膜癌、非小细胞肺癌等，其表达上调可促进肿瘤生长和恶性转化[3-4]。凋亡抑制蛋白PED/PEA-15基因定位于人染色体1q23.2，其基因编码含有死亡效应域的小分子蛋白质，具有蛋白激酶C内源性底物的特殊分子结构，对凋亡起负性调控作用。有研究发现，在食管鳞癌、肾透明细胞癌组织中PED/PEA-15表达上调，其表达上调能够抑制肿瘤细胞程序性死亡，促进肿瘤恶性进展[5-6]。但目前鲜见CDC25B、PED/PEA-15与食管癌关系的报道。2011年6月—2014年12月，本研究观察了食管癌组织CDC25B、PED/PEA-15表达变化，并探讨二者表达与患者临床病理特征和预后的关系。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择同期沧州市中心医院收治的食管癌患者80例。纳入标准：①经术后病理学检查明确食管癌诊断；②初诊；③接受食管癌根治术或姑息性切除术；④入院前未接受放化疗或免疫抑制剂治疗。排除标准：①合并其他消化系统疾病者；②合并严重心肺功能障碍者；③合并免疫系统疾病者；④合并其他系统恶性肿瘤者。其中，男50例、女30例，年龄31～78岁；肿瘤直径：≤5 cm 38例，>5 cm 42例；肿瘤部位：胸上段17例，胸中段41例，胸下段22例；肿瘤组织分化程度：高中分化49例，低分化31例；肿瘤临床分期：Ⅰ、Ⅱ期56例，Ⅲ期24例；有淋巴结转移35例，无淋巴结转移45例。本研究符合《赫尔辛基宣言》，经沧州市中心医院医学伦理委员会批准，患者或其家属签属知情同意书。

1.2 CDC25B、PED/PEA-15表达检测 取术中切除的食管癌组织及其癌旁组织(距肿瘤组织边缘超过3 cm，并经病理学检查明确为正常食管组织)，中性甲醛固定，石蜡包埋，4 μm厚切片。切片经60 ℃烤片过夜，二甲苯Ⅰ、Ⅱ脱蜡两遍，梯度乙醇水化，然后置于柠檬酸缓冲液中，微波炉加热抗原修复，自然冷却，3%双氧水灭活内源性过氧化物酶。5%山羊血清封闭1 h，滴加CDC25B、PED/PEA-15一抗(稀释比均为1∶400)，37 ℃孵育2 h。次日加入辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG二抗(稀释比为1∶500)，室温孵育2 h，DAB显色，苏木精染核，梯度乙醇脱水，中性树胶封固，显微镜下观察。

所有切片由两位病理科医师盲法独立阅片。CDC25B阳性染色定位于细胞核，呈棕黄色颗粒状。PED/PEA-15阳性染色定位于细胞质，呈棕黄色颗粒状。每张切片随机选取5个高倍镜视野(200×)，以染色强度评分和阳性细胞比例评分综合判定CDC25B、PED/PEA-15阳性表达，二者乘积≥3为阳性表达[6]。染色强度评分标准：无着色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；阳性细胞比例评分标准：无阳性细胞为0分，阳性细胞比例<25%为1分，阳性细胞比例25%～<50%为2分，阳性细胞比例≥50%为3分。

1.3 随访 患者出院后通过电话方式定期随访，每个月随访1次，随访截至2019年12月，共随访5年，终点事件为患者死亡或至随访截至日期。统计患者5年总体生存率。

1.4 统计学方法 采用SPSS20.0统计软件。计数资料比较采用χ2检验。相关性分析采用Spearman秩相关分析法。生存分析采用Kaplan-Meier法，生存率比较采用Log-rank检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 食管癌组织与癌旁正常组织CDC25B、PED/PEA-15表达比较 食管癌组织CDC25B、PED/PEA-15阳性表达率分别为52.50%(42/80)、66.25%(53/80)，癌旁正常组织分别为1.25%(1/80)、8.75%(7/80)。食管癌组织CDC25B、PED/PEA-15阳性表达率均高于癌旁正常组织(χ2分别为53.461、57.427，P均<0.01)。

2.2 食管癌组织CDC25B、PED/PEA-15阳性表达与患者临床病理特征的关系 见表1。

表1 食管癌组织CDC25B、PED/PEA-15阳性表达与患者临床病理特征的关系

2.3 食管癌组织CDC25B表达与PED/PEA-15表达的关系 在食管癌组织CDC25B阳性表达者中，PED/PEA-15阳性表达35例份、阴性表达7例份；在食管癌组织CDC25B阴性表达者中，PED/PEA-15阳性表达18例份、阴性表达20例份。Spearman秩相关分析显示，食管癌组织CDC25B表达与PED/PEA-15表达呈正相关关系(ρ=0.580，P<0.01)。

2.4 食管癌组织CDC25B、PED/PEA-15表达与患者预后的关系 至随访截至日期，共随访2～60个月，无失访病例，随访期间死亡64例。

CDC25B阳性表达者与阴性表达者5年总体生存率分别为9.52%(4/42)、31.58%(12/38)，CDC25B阳性表达者5年总体生存率低于CDC25B阴性表达者(χ2=4.557，P<0.05)；PED/PEA-15阳性表达者与阴性表达者5年总体生存率分别为7.55%(4/53)、44.44%(12/27)，PED/PEA-15阳性表达者5年总体生存率低于PED/PEA-15阴性表达者(χ2=3.845，P<0.05)。

3 讨论

食管癌是常见的消化系统恶性肿瘤，全球每年死亡约40万例。据统计，我国食管癌发病和死亡负担几乎占到全球一半，并且其发病率还有不断上升趋势[7]。目前，食管癌主要采取以手术为主的综合治疗，但效果并不能令人满意，部分患者即使经积极治疗仍可出现复发或转移[2]。近年研究发现，肿瘤的发生与癌基因的过度激活和抑癌基因的失活有关，从而导致了细胞增殖与凋亡失衡[8]。因此，探索影响肿瘤发生、发展的驱动基因，对研发新的靶向治疗药物具有重要的临床价值。

CDC25B是CDC25磷酸酶家族成员之一，是细胞周期蛋白依赖性激酶激活所必需的细胞周期调节剂，可参与个体发育、组织分化、组织再生等生物学过程。近年研究发现，在多种恶性肿瘤组织中存在CDC25B表达上调现象，其表达上调能够促进肿瘤细胞过度增殖，从而导致肿瘤恶性进展。体外实验亦证实，抑制CDC25B表达后，肿瘤细胞增殖明显受到抑制[3]。因此，CDC25B有可能是恶性肿瘤潜在的治疗靶点。本研究结果发现，食管癌组织CDC25B阳性表达率高于癌旁正常组织。提示CDC25B可能参与食管癌的发生、发展，但其具体作用机制尚不清楚。有研究报道，正常状态下miR-152能够结合CDC25B的3′非编码区，降低CDC25B mRNA的稳定性，抑制CDC25B表达；肿瘤发生时miR-152表达降低，CDC25B mRNA稳定性增加，从而引起CDC25B表达上调[4]。此外，CDC25B磷酸酶的活性受其亚细胞定位调节，CDC25B在细胞核与细胞质的穿梭过程中受14-3-3支架蛋白调节，肿瘤发生时14-3-3支架蛋白表达上调，能够促进CDC25B进入细胞核，促进细胞周期进程[9]。本研究结果还发现，食管癌组织CDC25B阳性表达与肿瘤临床分期有关，提示CDC25B表达上调能够促进食管癌恶性进展。细胞正常有丝分裂受CDK1/Cyclin B调节，而CDC25B作为磷酸酶去除抑制性磷酸基，能够激活CDK1/Cyclin B，从而促进细胞有丝分裂，导致肿瘤细胞无限增殖，继而使肿瘤临床分期升高[10]。

PED/PEA-15是在哺乳动物中普遍表达的小分子蛋白质，是调节多种细胞过程(如细胞增殖、凋亡)的关键多蛋白结合分子。PED/PEA-15能够与丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)途径中的细胞外信号调节激酶1和2(ERK1/2)、Fas相关死亡域蛋白结合，参与调控细胞增殖和凋亡，维持细胞增殖与凋亡平衡。近年研究发现，在多种恶性肿瘤组织中PED/PEA-15表达上调，并具有抗凋亡和抗炎特征，有可能成为恶性肿瘤潜在的治疗靶点[11-12]。本研究结果发现，食管癌组织PED/PEA-15阳性表达率明显高于癌旁正常组织，提示PED/PEA-15可能参与食管癌的发生、发展。有研究报道，肿瘤组织miR-212表达下调，导致其无法结合到PED/PEA-15 mRNA的3′非编码区，从而使PED/PEA-15表达上调，进而抑制肿瘤细胞凋亡[13]。本研究结果还发现，食管癌组织PED/PEA-15阳性表达与肿瘤临床分期有关，表明PED/PEA-15表达上调可能促进食管癌恶性进展。研究表明，PEA-15与ERK1/2结合能够阻断其与ERK的质膜结合，并防止成纤维细胞受体底物2α(FRS2α)的苏氨酸磷酸化，这一作用延长了成纤维细胞生长因子诱导的FRS2α酪氨酸磷酸化，从而维持MEK和ERK的活化，促进了肿瘤细胞恶性增殖，继而导致肿瘤临床分期升高[14]。

本研究发现，食管癌组织CDC25B表达与PED/PEA-15表达呈正相关关系，提示二者可能共同促进食管癌的发生、发展，其机制可能与这两种蛋白均参与G蛋白偶联受体信号转导MAPK/ERK途径有关[15]。本研究还发现，CDC25B、PED/PEA-15阳性表达者5年总体生存率均低于其阴性表达者，这表明CDC25B、PED/PEA-15表达变化与食管癌患者预后有关。有研究报道，CDC25B、PED/PEA-15表达升高可能会导致肿瘤患者预后不良[16]，本研究结果与其基本一致。

综上所述，食管癌组织CDC25B、PED/PEA-15表达升高，其表达变化与肿瘤临床分期和患者预后有关。CDC25B、PED/PEA-15有可能成为食管癌早期诊断和靶向治疗的生物标志物。