玉米基因组提取方法的比较研究

承佳佳，王 琪，魏晓通，徐亚维

（吉林农业科技学院 生物与制药工程学院，吉林 吉林 132101）

高纯度DNA的取得是植物分子生物学研究中的关键，因此，探索快速、经济有效的DNA提取方法尤为重要[1]。本研究以玉米为材料，通过比较改良十六烷基三甲基溴化铵（cetyltrimethylammonium Ammonium Bromide，CTAB）法、十二烷基苯磺酸钠（Sodium dodecyl sulfate，SDS）法、N-月桂酰胺法及植物基因组DNA快速提取试剂盒四种方法，探索最佳提取方法，为玉米的分子研究提供有效手段。

1 材料

1.1 试验材料

玉米种子，购自大润发超市。

1.2 主要试剂

Dzup（植物）基因组DNA快速抽提试剂盒购于上海生工生物有限公司；DL15000 DNA Marker 购于宝生物大连生物工程公司；其他试剂均为分析纯。

2 方法

2.1 改良CTAB法

0.2g玉米叶研至粉状，加入改良CTAB提取液（50 mmol/L EDTA、1 mol/L NaCl、2.5 g/100 ml CTAB、0.1 g/100 ml NSL、1 ml/100 ml β-巯基乙醇）800 μl，65℃水浴30 min；4 ℃，12000 rpm离心15min，取酚：氯仿：异戊醇700 μl与上清混合，4℃离心5 min。加入冷异丙醇1 ml，4 ℃静置30 min。12000 rpm离心5 min，70 μl TE与1 μl RNase溶解沉淀[2]。

2.2 SDS法

0.2 g玉米叶研磨后加入SDS提取液（10 mmol/L Tris-HCl，pH值为8.0；25 mmol/L EDTA，pH值为8.0；100 mmol/L NaCl；0.5% SDS）800 μl，56℃水浴20 min。12000 rpm离心，上清加酚：氯仿：异戊醇700 μl，4℃静置20 min后12000 rpm离心，上清加1 ml冷异丙醇，4℃静置30min。12000 rpm离心10 min，70 μl TE溶解[1]。

2.3 Dzup（植物）DNA抽提试剂盒

0.2 g玉米叶研至粉状，加入0.4 ml裂解液1，65 ℃裂解30 min，加130 μl裂解液2，4℃放置8 ～10 min，15000 rpm离心10 min。取500 μl上清液加入1.5 ml裂解液AP3/E混匀后移至吸附柱中，离心60sec。加600 μl漂洗液，离心1 min。13000 rpm空离心2 min，50μl EB溶解[1]。

2.4 N-月桂酰肌氨酸钠法

0.2 g玉米叶研至粉状，加600 μl缓冲液（500 ml含N-月桂酰肌氨酸钠5 g，氯化钠2.925 g，1 mol/L

Tris-HCl；0.5 mol/L的EDTA 20 ml；pH8.0），裂解5 min，上清加氯仿：异戊醇600 μl，离心10 min，上清加500μl冷异丙醇，4℃静置30 min后离心5 min，70 μl TE溶解沉淀[2]。取四种方法提取的DNA进行紫外和电泳鉴定。

3 结果分析

3.1 紫外鉴定

理想DNA其A260/A280的比值在1.80和1.90间，但改良CTAB法提的DNA浓度最高，为471.38 ng/ml，SDS法最低，从经济和简单的角度来讲，改良CTAB法效果最佳。

3.2 凝胶电泳鉴定

四种方法均获得了一定量纯DNA，其中SDS法条带亮度最浅，说明提取效果差；第2泳道虽然相对于第1和第3泳道，提取效果差不多，但试剂盒法价格高，因此，改良CTAB法条带最度且无杂带，提取效果最佳。

4 结论

本研究对传统方法进行了改良，结果表明改良CTAB法提取的基因组纯度和浓度都较高，证明此法对植物中小分子杂质、多糖、酚类等杂志的去除效果较好[2]。尽管植物提取试剂盒和N-月桂酰肌氨酸钠法也能获得高质量的基因组，但由于试剂盒造价高，N-月桂酰肌氨酸钠试剂不常用，因此，作为次选。