毛脉酸模石油醚和乙酸乙酯部位化学成分研究

2020-12-01常丰华

人参研究 2020年6期

常丰华

(吉林农业科技学院·吉林吉林·132101)

毛脉酸模（Rumex gmelini Turcz.）为蓼科酸模属多年生草本植物，是我国黑龙江、吉林等省份长白山地区的常用药用资源植物，自然资源蕴藏量丰富[1]。民间以根入药，用于淋病、上呼吸道感染、癣病和疮毒等疾病的治疗[2]。毛脉酸模作为一味民间草药，国内外相关研究报道较少，通过药理研究发现毛脉酸模具有良好的抗病原微生物、抗氧化、抗肿瘤、减轻急性肺损伤和降压等作用[3-5]。此外，毛脉酸模乙酸乙酯部位对心肌细胞缺血性损伤具有显著的保护作用，其机制可能与降低心肌耗氧、清除氧自由基、抗心肌脂质过氧化等有关，但是具体有效物质或有效成分尚不明确[6]。本实验对毛脉酸模石油醚和乙酸乙酯部位的化学成分进行了系统的提取、分离及鉴定，为今后进行主要药效学和药代动力学的研究，及安全性的早期评价，并进一步阐明毛脉酸模乙酸乙酯部位保护心肌有效单体化合物奠定了物质基础，从而为其新药的研发和申报提供了重要的科学依据。

1 仪器与材料

ZF-I型三用紫外分析仪；INOVA-600型超导核磁共振光谱仪；BRUKER AV-500MHz型超导核磁共振光谱仪；薄层层析硅胶、柱层析硅胶200～300目（青岛海洋化工厂）；Sephadex LH-20葡聚糖凝胶（美国GE）；薄层色谱用硅胶板（TLC Silica gel 60 F254）、高效硅胶薄层层析板（HPTLC silica gel 60）（德国Merck公司产品）；HPLC采用的甲醇为色谱纯，水为重蒸水；显色剂为10%的H2SO4乙醇溶液。

毛脉酸模原药材，采自吉林左家地区，经吉林农业科技学院中药学院中草药栽培与鉴定教研室鉴定为毛脉酸模(Rumex gmelini Turcz.)。

2 提取与分离

取干燥毛脉酸模根及根茎10kg，粉碎置回流提取器中，加8倍量50%乙醇溶液连续回流提取3次（分别为 3h，2h，1h），合并滤液，减压浓缩后干燥至恒重，粉碎成干粉，所得粉末为毛脉酸模50%乙醇提取物。所得提取物加入60倍量蒸馏水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯系统溶剂萃取,分别得到石油醚和乙酸乙酯部位，将萃取部位浓缩至浸膏。取石油醚萃取部位7.5g，采用硅胶（200～300目）柱层析法，以石油醚-乙酸乙酯系统（100∶1）进行反复洗脱，得到化合物1。取乙酸乙酯萃取部位300g，采用硅胶（100～200目）柱层析法，以二氯甲烷-甲醇系统（50∶1、30∶1、15∶1、10∶1）进行梯度洗脱，TLC示踪合并相同流分，得4个组分Fr.Ⅰ～Fr.Ⅳ。 Fr.Ⅰ、Fr.Ⅱ反复经硅胶柱层析(200～300目)分离和纯化，得到化合物 2～4。 Fr.Ⅲ、Fr.Ⅳ再反复经硅胶柱层析 (200～300目)、Sephadex LH-20凝胶柱层析等进一步分离和纯化，得到化合物5～7。

3 结构鉴定

化合物 1：黄色针状结晶（EtOAc），mp 164～166℃。分子式为 C13H12O3。1H-NMR(CDCl3，600MHz)δ：7.47（1H，d，J=8.0Hz，H-6），7.06（1H，m，H-7），6.97（1H，s，H-5），6.84（1H，d，J=8.0Hz，H-8），2.75（3H，s，H-12）,2.64（3H，s，H-13）。以上数据与文献报道的酸模素[7]一致，确定为酸模素（nepodin）。

化合物 2：白色针状晶体 (CHCl3)，mp 139.5～142℃，分子式为C29H50O。

1H-NMR (CDCl3，500MHz) δ：5.36 （1H，dd，J=1.8,3.6Hz，H-6），3.52（1H,m，H-3），2.29～1.05(29H,m)，0.94～0.68（3H×6，H-18，H-19，H-21，H-26，H-27，H-29）。13C-NMR（CDCl3，500Mz）给出 29 个 C 信号分别将其进行归属显示，δ：140.9（C-5），121.8（C-6），77.3（C-3），77.1（C-14），76.9（C-17），71.9（C-9），56.9（C-4），56.2（C-13），50.3（C-12），46.0（C-24），42.5（C-1），39.9（C-10），37.4(C-20)，36.6(C-7)，36.3(C-16)，34.1（C-2），32.0（C-8），31.8（C-11），29.3（C-15），28.4（C-22），26.3（C-23），24.4（C-27），23.2（C-28），21.2（C-19），19.9（C-25），19.5（C-21），19.2（C-29），18.9（C-26），12.0（C-18）。以上数据与文献报道的 β-谷甾醇[8]一致，故确定化合物2为β-谷甾醇（β-sitosterol）。

化合物 3：黄色结晶(CHCl3)，mp 195～196℃，分子式为 C15H10O4。

1H-NMR(CDCl3，500MHz) δ：12.10（1H，s，H-1），12.00 （1H，s，H-8）,7.81 （1H，d，J=7.5Hz，H-5），7.68（1H，t，J=8.0Hz，H-6），7.65 （1H，d，J=1.5Hz，H-4），7.29 （1H，d，J=8.2Hz，H-7），7.09 （1H，d，J=1.5Hz，H-2），2.46（3H，s，CH3）。以上数据与文献报道的大黄酚[7]一致，故确定化合物3为大黄酚（chrysophanol）。

化合物 4：黄色针状结晶(CHCl3)，mp 202～204℃，分子式为C16H12O5。

1H-NMR (CDCl3，500MHz) δ：7.62 （1H，d，J=2.2Hz，H-4），7.36 （1H，d，J=2.2Hz，H-2），7.08（1H，d，J=2.5Hz，H-5），6.68 （1H，d，J=2.5Hz，H-7），3.94（3H，s，OCH3），2.45（3H，s，CH3）。以上数据与文献报道的大黄素甲醚[7]一致，故确定化合物4为大黄素甲醚（physcion）。

化合物5：桔红色针状结晶（EtOAc），mp 255～257℃，分子式为 C15H10O5。

1H-NMR (DMSO，500MHz) δ：7.45 （1H，d，J=2.3Hz，H-4），7.17 （1H，d，J=2.0Hz，H-5），7.06（1H，d，J=2.3Hz，H-2），6.58 （1H，d，J=2.0Hz，H-7），2.39（3H，s，CH3）。13C-NMR（DMSO，500Mz）δ：189.6（C-9），181.2（C-10）；124.0（C-2），120.3（C-4），108.8（C-5），107.8（C-7），21.4（CH3）。以上数据与文献报道的大黄素[7]一致，故确定化合物5为大黄素（emodin）。

化合物6：白色针状晶体（CH3OH），mp 164～166℃，分子式为 C19H22O8。

1H-NMR （CD3OD，500MHZ）δ:7.43(1H，d，J=8.0Hz，H-4),7.37(1H，t，J=7.5，8.0Hz，H-3),7.33(1H，d，J=7.5Hz，H-2),7.15(1H，s，H-5),5.12(1H，d，J=8.0Hz，H-1′),3.43～3.95(6H，m，H-2′～6′),2.29(3H，s，H-12)，2.60(3H,s，H-13)。13C-NMR（CD3OD，500MHZ）δ:208.2（C-11），156.1（C-1），152.8（C-8），138.1（C-10），134.6（C-6），128.5（C-3），126.1（C-7），123.8（C-4），120.9（C-5），114.9（C-9），111.8（C-2），104.9（C-1′），62.5～78.8(C-2′～6′),32.3（C-12），19.8（C-13）。以上数据与文献报道的酸模素-8-O-β-D-葡萄糖苷[9]一致，故确定化合物6为酸模素-8-O-β-D-葡萄糖苷（nepodin-8-O-β-D-glucopyranoside）。

化合物7：白色针状结晶（CH3OH），mp 256～257℃，分子式为C14H12O3。紫外灯（365nm）下显蓝紫色荧光。三氯化铁—铁氰化钾反应呈阳性。

1H-NMR (CD3OD，500MHz) δ：7.35 （2H，d，J=8.5Hz，H-2′，H-6′），6.93(1H，d，J=16.3Hz，乙烯 H-β），6.81 （1H，d，J=16.3Hz，乙烯 H-α），6.75 （2H，d，J=8.5Hz，H-3′，H-5′），6.44（2H，d，J=2.0Hz，H-2，H-6），6.16 （1H，t，H-4）。13C-NMR（CD3OD，500Mz）δ：159.6（C-3，C-5），158.3（C-4′），141.3（C-1），129.4（C-1′）,128.7(C-2′，C-6′)，128.7 （C-β），127.0 （C-α），116.4（C-3′，C-5′），105.8 （C-2，C-6），102.6 （C-4）。结合1H-NMR和13C-NMR数据，将其数据与文献报道的白藜芦醇[10]的数据进行比较，发现二者基本一致，故确定化合物7为白藜芦醇（resveratrol）。